一种外源抗体基因拷贝数的检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种外源抗体基因拷贝数的检测方法和试剂盒以及引物对。具体地，本发明专利技术涉及一种引物对，其包含：引物对1，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对；优选地，还包含引物对2，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对。本发明专利技术还涉及测定外源抗体基因的拷贝数的方法，进而为外源抗体基因的转导效率评估、质量控制、体外监测提供了更准确的技术支持。本发明专利技术对含IgG4重链恒定区的外源抗体基因的检测具有通用性。

A Kit for Detecting the Copy Number of Exogenous Antibody Genes

【技术实现步骤摘要】
一种外源抗体基因拷贝数的检测方法和试剂盒
本专利技术属于生物
，涉及使用荧光定量PCR方法检测外源抗体基因拷贝数。具体地，本专利技术涉及基于IgG4抗体重链恒定区，使用荧光定量PCR检测外源抗体基因拷贝数的方法和试剂盒。
技术介绍
抗体，也叫免疫球蛋白(Ig)，其由抗原刺激B细胞分化成浆细胞所产生，能与抗原特异性结合，在人体免疫系统中起重要作用。根据重链抗原性的差异，可将抗体分IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五种类型。由于抗体具有特异性高、亲和力强的特点，人们针对不同的适应症，已开发出学多特异性的治疗性抗体药物。在人类血清的所有免疫球蛋白中，IgG的血清半衰期最长。基于实用性和功能上的考虑，目前开发的重组单克隆抗体均是IgG类型。根据其在血清的分布丰度，IgG可进一步分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4四种亚型。各亚型的恒定区序列高度同源，主要表现在重链和轻链之间的二硫键连接方式、铰链区的核心CXXC序列组成、CH2区间存在一定程度的差异。在体内，IgG4亚型的典型特征是单价有效，能够避免形成免疫复合物，可以作为阻断抗体，避免触发效应机制，从而呈现出相对“非炎症性”本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物对，其包含：引物对1，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对；优选地，还包含引物对2，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对。

【技术特征摘要】
1.引物对，其包含：引物对1，SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的引物对；优选地，还包含引物对2，SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的引物对。2.探针，其包含：探针A，其核酸序列如SEQIDNO:3所示；优选地，还包含探针B，其核酸序列如SEQIDNO:6所示。3.根据权利要求2所述的探针，其中，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团选自FAM、Hex、VIC、ROX和Cy5；优选地，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、TAMRA、JOE、BHQ2和BHQ3。4.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的引物对，和/或权利要求2至3中任一权利要求所述的探针。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其包含：引物对1和探针A；和/或引物对2和探针B；优选地，所述试剂盒还包含PCR反应所需的试剂，例如Mg2+、反应缓冲液、dNTP和Taq酶。6.一种测定外源抗体基因拷贝数的方法，包括如下步骤：(1)提取待测样品的DNA；(2)使用含人源IgG4铰链区-CH3基因的质粒和含Actin基因的质粒作为标准品母液，分别制成外源抗体基因标准品系列和Actin标准品系列；(3)使用权利要求1的引物对和权利要求2或3所述的探针，分别对外源抗体基因标准品系列、Actin标准品系列和待测样品的DNA进行实时荧光定量PCR；(4)根据每个外源抗体标...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱其军，金华君，郝方元，王超，孙娟娟，
申请(专利权)人：上海细胞治疗研究院，上海细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31