寨卡病毒的纳米抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物纳米材料技术领域，具体涉及寨卡病毒的纳米抗体及其制备方法和应用，利用寨卡病毒的病毒颗粒，免疫羊驼，然后通过克隆，再将克隆得到的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，经过亲和淘选的方式选择亲和力较高的，最后进行单克隆ELISA的鉴定，之后抗体的表达纯化，得到寨卡病毒的纳米抗体。本发明专利技术提供的寨卡病毒的纳米抗体，利用免疫羊驼，再结合噬菌体展示技术，得到纳米抗体，不仅能够在原核或真核系统中高表达，而且特异性强，亲和力高，更加适合寨卡病毒的特异性血清学检测。

Preparation and application of nano-antibodies against Zhaika virus

【技术实现步骤摘要】
寨卡病毒的纳米抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物纳米材料
，具体涉及寨卡病毒的纳米抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
寨卡病毒的血清学检测，可以利用寨卡病毒的抗体检测。但现在市面上的一般都是利用免疫小鼠或者兔子得到的抗体(多克隆抗体)，或者利用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，该类抗体的存在分子量大、亲和力较弱等特点。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种寨卡病毒的纳米抗体及其制备方法，解决寨卡病毒的酶联免疫检测的灵敏度问题，以实现在献血人群中进行寨卡病毒的血清学检测。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：寨卡病毒的纳米抗体的制备方法，包括以下步骤：1)制备寨卡病毒颗粒：利用A549细胞系培养寨卡病毒，然后收集上清，通过密度梯度离心得到寨卡病毒颗粒，浓度为1mg/ml；2)羊驼免疫：首次免疫将1mgZika抗原与CFA开乳化后，后皮下多点注射；其次加强免疫将0.5mgZika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射；最终免疫将0.5mgZika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射，之后进行血清学效价验证；3)目的片段克隆：首先分离血液中的外周淋巴细胞，然后进行RNA的提取，逆转率以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.寨卡病毒的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备寨卡病毒颗粒：利用A549细胞系培养寨卡病毒，然后收集上清，通过密度梯度离心得到寨卡病毒颗粒，浓度为1mg/ml；2)羊驼免疫：首次免疫将1mg Zika抗原与CFA开乳化后，后皮下多点注射；其次加强免疫将0.5mg Zika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射；最终免疫将0.5mg Zika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射，之后进行血清学效价验证；3)目的片段克隆：首先分离血液中的外周淋巴细胞，然后进行RNA的提取，逆转率以及两轮的巢式PCR，最后将PCR产物连接到pComb3XSS噬菌粒载体上，之后进行电转化到大肠杆菌中，...

【技术特征摘要】
1.寨卡病毒的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备寨卡病毒颗粒：利用A549细胞系培养寨卡病毒，然后收集上清，通过密度梯度离心得到寨卡病毒颗粒，浓度为1mg/ml；2)羊驼免疫：首次免疫将1mgZika抗原与CFA开乳化后，后皮下多点注射；其次加强免疫将0.5mgZika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射；最终免疫将0.5mgZika抗原与IFA乳化后，后皮下多点注射，之后进行血清学效价验证；3)目的片段克隆：首先分离血液中的外周淋巴细胞，然后进行RNA的提取，逆转率以及两轮的巢式PCR，最后将PCR产物连接到pComb3XSS噬菌粒载体上，之后进行电转化到大肠杆菌中，经测序验证正确后用于后面的相关筛选；4)亲和淘选：将靶分子Zika用pH值为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至终浓度为10μg/mL，按100μL/孔加入酶标孔中，每个靶分子包被2孔，4℃包被12小时；弃包被液，PBS洗涤3次，每孔加入300μL3％BSA-PBS封闭液，37℃封闭1h；PBS洗涤3次，加入100μL噬菌体文库，37℃孵育1h；吸出未结合的噬菌体，用PBST洗涤6次，PBS洗涤2次；加入100μLGly-HCl洗脱液，37℃孵育8min，洗脱特异性结合的噬菌体；将该洗脱液转移至1.5mL无菌离心管中，迅速用15μLTris-HCl中和缓冲液中和；取10μL进行梯度稀释，测定滴度，计算淘选回收率，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈利民，李世林，徐敏，李玉佳，段晓琼，杨春晖，叶海艳，
申请(专利权)人：中国医学科学院输血研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51