本发明专利技术涉及双靶向配体化力达霉素DTLL的单独用药以及与吉西他滨联合给药在胰腺癌治疗中的应用。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL能与其受体特异性亲和，同时对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞MIA‑paca‑2有特异性靶向和极强的细胞毒作用，DTLL与吉西他滨联合用药能够发挥协同作用，明显优于非配体化游离的力达霉素(LDM)。并且，对单独使用吉西他滨不敏感的胰腺癌细胞AsPC‑1，也能够有效逆转胰腺癌对吉西他滨的耐药。
Application of double targeting ligand chlordamycin DTLL combined with gemcitabine in the treatment of pancreatic cancer
【技术实现步骤摘要】
双靶向配体化力达霉素DTLL联合吉西他滨在胰腺癌治疗中的应用
：本专利技术属于生物医药领域，涉及一种新型重组蛋白组装药物与其他抗癌药物治疗胰腺癌中的应用，特别涉及双靶向配体化力达霉素DTLL与吉西他滨联合用药在胰腺癌治疗中的应用，尤其是双靶向配体化力达霉素DTLL与吉西他滨联合在治疗耐药性胰腺癌中的应用。
技术介绍
：胰腺癌是当前恶性程度比较高的难治性胃肠道肿瘤之一，其发病率在全球范围内呈现上升趋势，由于我国患者发现时大部分为晚期，死亡率几乎100％，5年生存率低于4％。胰腺癌早期的确诊率并不高，目前，治疗胰腺癌的首选方法仍然是手术切除，但仅有15％-20％的患者确诊后能进行手术治疗，其余患者多采用化疗的方式。吉西他滨在胰腺癌的化疗中有着极其重要的地位，它作用于DNA合成期的肿瘤细胞，是胰腺癌的标准一线化疗方案。有报道指出，腹腔灌注吉西他滨能有效抑制肿瘤的生长，改善患者生活质量并减轻全身的毒性反应。尽管吉西他滨单药方案已经成为了胰腺癌的辅助治疗标准方案，但其化疗的有效率仅能达到25％，中位生存期仅为5-7个月，1年生存率约为20％，远远不能满足临床的需要。尤其是对无手术指征的局部晚期和转移性胰腺癌，其中位生存期的延长较传统的5-FU/LV而言也仅为数月。造成这种情况的主要原因是由于吉西他滨在临床上出现了越来越多的耐药现象。研究表明，吉西他滨的耐药主要与摄取转运过程障碍，胞浆内活化，分解酶异常以及DNA修复等有关。目前晚期胰腺癌以吉西他滨为基础的一线化疗方案的疗效已停滞于平台期，因此,亟需改进现有对晚期胰腺癌的治疗策略。分子靶向治疗针对细胞内或者表面特定的分子，特异性强，不良反应少，是目前治疗肿瘤的一个研究热点。表皮生长因子受体EGFR及其相关的信号通路在胰腺癌的发生发展过程中发挥着及其重要的作用。研究选择性抑制EGFR及其相关通路的分子靶向性药物可能会使得胰腺癌的治疗取得突破。目前上市的针对该靶点的药物有酪氨酸激酶抑制剂(埃罗替尼，吉非替尼等)和单克隆抗体(西妥昔单抗)。并且，联合应用吉西他滨和EGFR靶向药物对胰腺癌的治疗已经取得了一些进展。如EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂——厄罗替尼，该药与吉西他滨联合使用，在2005年11月已获美国FDA批准用于治疗局部晚期、不可切除或转移性胰腺癌，并于2007年1月份也被欧盟批准用于转移性胰腺癌。MOORE和DRAQOVICH等在临床研究中都证实，这一联合用药对于未手术的胰腺癌患者的总存活期为12.5个月，1年存活率为51％。研究表明，由于ErbB家族受体成员之间的相互关联作用，同时阻断两个受体比只阻断单一受体可能对于有效治疗癌症和限制耐药性更为重要。抗肿瘤抗生素-力达霉素(Lidamycin，LDM)因其有效地抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡等作用，使其可以成为抗体偶联药ADC等靶向药物的理想弹头。本所前期研究中，通过基因重组和分子强化的技术路线，构建制备了一种抗ErbB通路的双靶向强化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE，其具体构建过程已申请相关专利(专利号：CN101497666A)。已证明，其对人卵巢癌、乳腺癌及食管癌中均表现出良好的抗肿瘤疗效。为了提高产量和纯度，增强组装效率和活性，我们改进优化了制备工艺流程，构建相应的质控标准，我们将优化后融合蛋白的中间产品命名为DTLP，其为SEQIDNO：1所示的蛋白质，不含下述式(I)发色团。将最产品命名为双靶向配体化力达霉素DTLL，所述的双靶向配体化力达霉素DTLL为SEQIDNO：1所示的蛋白质和下式(I)所示的发色团的组装产物：在本专利技术中，我们尝试将该靶向药物DTLL应用于难治性恶性肿瘤---胰腺癌的治疗，并将DTLL与吉西他滨联合用药，为难治性胰腺癌的治疗及逆转吉西他滨的耐药等寻找更好的解决方案，使其有望成为治疗胰腺癌的新型靶向药物。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞有特异性靶向和极强的细胞毒作用，DTLL与吉西他滨联合用药能够发挥协同作用，明显优于非配体化游离的力达霉素(LDM)。并且，对单独使用吉西他滨不敏感的胰腺癌细胞，也能够有效逆转胰腺癌对吉西他滨的耐药。而且，将DTLL与吉西他滨联合处理吉西他滨敏感和不敏感的胰腺癌细胞，其疗效均明显强于已有报道的吉西他滨与厄罗替尼的联合应用。因此，本专利技术所阐述的治疗策略，是针对EGFR和HER2双靶向作用的联合、配体化靶向肽与强效细胞毒药物LDM的类抗体偶联药物(Antibody-baseddrugconjugate,ADC)的新型结合，以及靶向药物与一线化疗药——即双靶向配体化力达霉素(DTLL)与吉西他滨协同给药的应用。其创新性多重性的联合治疗胰腺癌的应用，有望成为具有良好临床应用前景的专利技术，迄今为止尚未见有相关报道。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种药盒，其含有双靶向配体化力达霉素DTLL和吉西他滨，其中SEQIDNO：1所示的蛋白质和式(I)所示的发色团的组装产物定义为双靶向配体化力达霉素DTLL。还提供了包含中间产物DTLP和吉西他滨的药盒，其任选地含有式(I)的发色团。本专利技术还提供含有双靶向配体化力达霉素DTLL和吉西他滨的组合物。本专利技术还提供了前述双靶向配体化力达霉素DTLL在制备胰腺癌治疗药物中的应用。本专利技术进一步提供了前述双靶向配体化力达霉素DTLL与吉西他滨在制备用于治疗胰腺癌治疗药物中的应用。本专利技术还提供了前述双靶向配体化力达霉素DTLL在制备用于耐药的胰腺癌的治疗药物中的应用。而且，本专利技术进一步提供了前述的双靶向配体化力达霉素DTLL在制备用于吉西他滨耐药的胰腺癌的治疗药物中的应用。本专利技术的技术方案包括以下内容:1.获得融合蛋白DTLP和双靶向配体化力达霉素DTLL。(构建制备过程详见专利(专利号为CN101497666A)，制备工艺改进的流程另有专利正在申请中，其中DTLL是由DTLP与力达霉素发色团经过体外分子重建所得)2.免疫融合蛋白DTLP与受体EGFR和HER2的亲和性验证：主要利用Biacore实验和受体包被的ElISA实验，分析DTLP与其相应受体的亲和活性，证明了此融合蛋白的特异性靶向作用。3.体内外分析免疫融合蛋白DTLP与胰腺癌细胞之间的亲和活性验证：主要利用Westernblot实验和细胞的ElISA实验证明了此融合蛋白能够与不同程度表达EGFR和HER-2的胰腺癌细胞亲和性，并用实验结果表明亲和活性与受体表达量呈正相关。细胞免疫化学法证实了此融合蛋白能够结合在EGFR和HER-2高表达的胰腺癌细胞系MIA-paca-2的细胞膜上并能实现与受体EGFR或HER-2的共定位。再次印证了DTLP的结合靶点确为EGFR和HER2。体内靶向性分析主要利用活体成像仪分析其在MIA-paca-2荷瘤裸鼠体内的荧光分布，得知DTLP可靶向荷瘤动物的肿瘤部位并积累。4.双靶向配体化力达霉素DTLL对胰腺癌的抗肿瘤活性分析：主要采用MTS法，检测DTLL对不同胰腺癌细胞的杀伤活性，利用流式细胞术测定DTLL对MIA-paca-2细胞的促凋亡作用。体内实验采用了人胰腺癌MIA-paca-2裸鼠移植瘤模型，观察DTLL对肿瘤生长能力的抑制作用，同时利用HE染色观察药物对实验动物各个脏器本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种药盒，其含有SEQ ID NO：1所示的蛋白质和吉西他滨，任选地含有下式(I)所示的发色团的组装产物：
【技术特征摘要】
1.一种药盒，其含有SEQIDNO：1所示的蛋白质和吉西他滨，任选地含有下式(I)所示的发色团的组装产物：2.一种药盒，其含有双靶向配体化力达霉素DTLL和吉西他滨，其中双靶向配体化力达霉素DTLL为SEQIDNO：1所示的蛋白质和下式(I)所示的发色团的组装产物：3.一种药物组合物，其含有双靶向配体化力达霉素DTLL和吉西他滨，其中双靶向配体化力达霉素DTLL为SEQIDNO：1所示的蛋白质和下式(I)所示的发色团的组装产物：4.双...
【专利技术属性】
技术研发人员：李亮，邵荣光，叶程，曹睿，宋文凭，李良，李毅，刘秀均，甄永苏，赵春燕，姚红娟，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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