本发明专利技术的公开了一种核苷酸链适配体及其用途，属于生物医学与临床医学技术领域。其中，所述适配体满足：（1）具有由SEQ ID NO:1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列依次连接组成5'‑AGAGACGGACACAGGATGAGC‑N40‑CCTTCCCCAAGACAGCATCCA‑3’所示的通式；（2）能特异性与RhD抗原结合。该适配体能够特异性遮蔽红细胞表面RhD抗原，将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞。本发明专利技术还公开了所述适配体制备用于将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞的改造剂中的用途。利用本发明专利技术，能够避免因同种免疫引起的溶血性输血反应，可以用于RhD阴性患者紧急情况时的非同型输血。
【技术实现步骤摘要】
一种单链核酸适配体及其用途
本专利技术属于生物医学与临床医学
具体而言，本专利技术涉及一种单链核酸适配体及其用途。
技术介绍
在临床输血实践中，Rh血型系统是临床意义最为显著的血型系统之一，也是人类36个血型系统中最复杂、最富多态性的血型系统。Rh血型系统不合的输血可因同种免疫而引起溶血病、肾功能衰竭等输血不良反应，甚至死亡。Rh血型系统抗原由RHD和RHCE基因控制编码，目前已发现54种抗原。RhD抗原是Rh血型系统抗原中免疫原性最强，临床意义最为显著的抗原，也是影响临床用血安全的主要因素。以往的研究显示，RhD阴性患者输注30μLRhD阳性红细胞即可产生同种抗-D。为保障输血安全，RhD阴性患者只能输注阴性血液。但在我国汉族人群中，RhD阴性个体仅占0.1％-0.4％。随着临床用血量日益增加，RhD阴性血液供应经常出现短缺，严重影响RhD阴性患者的日常输血治疗，尤其是在急性失血的情况下，会威胁患者生命。相反地，RhD阳性血却十分丰富，将RhD阳性红细胞改造成阴性红细胞，则可解决RhD阴性临床供血短缺的问题。以细胞为靶标的指数富集的配体系统进行技术(cellsystematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment，cell-SELEX)的出现为实现RhD通用血的改造提供了可能。通过Cell-SELEX筛选可获得识别某一靶分子的核酸适配体，其具有特异性强、亲和力高、体积小等优点，而且可通过基因合成或PCR扩增的方法大量获得，成本低廉，且对人体无毒性。核酸适配体已在高灵敏检测分析、诊断、蛋白质相互作用、抗感染新药研发及难治性病毒感染性疾病(如AIDS、HBV、HSV、Rabiesvirus等)等方面得到广泛应用。
技术实现思路
专利技术人通过红细胞消减指数富集的配体系统进化技术，意外地筛选出一种能与RhD抗原高亲和力、高特异性结合并能够遮蔽其抗原性的单链核酸(ssDNA)适配体，可实现RhD血型“改造”达到血液通用的目的，紧急情况下可为RhD阴性稀有血型患者提供“血型相容”的红细胞。从而，本专利技术提供了一种单链核酸适配体，其能与RhD抗原特异性结合，遮蔽RhD抗原性，将RhD阳性红细胞转变为RhD阴性红细胞。其能制备成治疗剂，在无法及时获得RhD阴性血液时，使用本治疗剂将RhD阳性红细胞改造成阴性红细胞，用于RhD阴性患者的急救输血。为了完成上述目的，本专利技术一方面提供了一种单链核酸适配体，所述适配体满足：(1)具有由SEQIDNO:1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQIDNO:2所示核苷酸序列依次连接组成5'-AGAGACGGACACAGGATGAGC-N40-CCTTCCCCAAGACAGCATCCA-3’所示的通式；(2)能特异性与RhD抗原结合。在本专利技术的一些实施方案中，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3-14中的一种。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:11中的一种。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3和SEQIDNO:4中的一种。本专利技术的第二方面提供一种单链核酸适配体组合物，其包括至少两种单链核酸适配体，任一适配体满足：(1)具有由SEQIDNO:1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQIDNO:2所示核苷酸序列依次连接组成5'-AGAGACGGACACAGGATGAGC-N40-CCTTCCCCAAGACAGCATCCA-3’所示的通式；(2)能特异性与RhD抗原结合。在本专利技术的一些实施方案中，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3-14中的至少两种。在本专利技术的一些实施方案中，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:11中的至少两种。在本专利技术的一些实施方案中，所述随机核苷酸序列分别为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4。本专利技术的第三方面提供本专利技术第一方面所述的适配体或本专利技术第二方面所述的适配体组合物在制备用于将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞的改造剂中的用途。本专利技术第四方面提供一种用于将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞的改造剂，所述改造剂包括本专利技术第一方面所述的适配体或本专利技术第二方面所述的适配体组合物。本专利技术的有益效果本专利技术的单链核酸适配体是由82个碱基组成的小分子物质，可特异性地与RhD抗原结合，可以有效遮蔽红细胞RhD抗原，使其失去生物活性，阻断与同种抗体的特异性结合，避免因同种免疫引起的溶血性输血反应，可以用于RhD阴性患者紧急情况时的非同型输血。附图说明图1为实施例1的红细胞消减SELEX筛选RhD抗原特异性ssDNA核酸适配体的制备方法流程图。图2为实施例1中次级文库制备效果的琼脂糖凝胶电泳图，从左至右依次为：Marker；1为步骤五的对称PCR扩增产物；2为步骤六的不对称PCR扩增产物；3为步骤七的在步骤二的产物基础上纯化后的产物。图3为实施例2有效性验证中经不同ssDNA全长序列遮蔽RhD抗原后的荧光强度变化，其中横坐标为ssDNA编号，纵坐标为荧光强度。图4为实施例2亲和力验证中RhD阳性红细胞与SEQIDNO:15、SEQIDNO:16结合后荧光强度的变化，其中横坐标为ssDNA全长序列的浓度，纵坐标为荧光强度。图5为实施例2中SEQIDNO:15与SEQIDNO:16联合使用遮蔽RhD抗原效果，从左至右依次为：A为流式细胞术检验结果；B为未经SEQIDNO:15与SEQIDNO:16联合处理的显微镜下观察结果；C为SEQIDNO:15与SEQIDNO:16浓度为500pmol时显微镜下观察结果。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。实施例1本实施例提供了一种红细胞消减SELEX筛选RhD抗原特异性ssDNA核酸适配体的制备方法，其制备流程及主要制备参数见图1，表1，包括如下步骤：表1红细胞消减SELEX参数步骤一：负向筛选。在1.5mL离心管中，依次加入100μL浓度为2.0×106/μLRhD-红细胞生理盐水悬液、950μL血液保存液Ⅲ(CPDA-I保存液)、15.2μL鲑鱼精DNA及100μLssDNA文库，室温(25℃)下孵育30min。5000rpm，2min离心去除红细胞(RBC)，上清液本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单链核酸适配体，其特征在于，所述适配体满足：（1）具有由SEQ ID NO :1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQ ID NO: 2所示核苷酸序列依次连接组成5'‑AGAGACGGACACAGGATGAGC‑N40‑CCTTCCCCAAGACAGCATCCA‑3’所示的通式；（2）能特异性与RhD抗原结合。
【技术特征摘要】
1.一种单链核酸适配体，其特征在于，所述适配体满足：（1）具有由SEQIDNO:1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQIDNO:2所示核苷酸序列依次连接组成5'-AGAGACGGACACAGGATGAGC-N40-CCTTCCCCAAGACAGCATCCA-3’所示的通式；（2）能特异性与RhD抗原结合。2.根据权利要求1所述的适配体，其特征在于，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3-14中的一种。3.根据权利要求2所述的适配体，其特征在于，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:11中的一种。4.根据权利要求3所述的适配体，其特征在于，所述随机核苷酸序列选自SEQIDNO:3和SEQIDNO:4中的一种。5.一种单链核酸适配体组合物，其包括至少两种单链核酸适配体，其特征在于，任一适配体满足：（1）具有由SEQIDNO:1所示核苷酸序列、40bp随机核苷酸序列和SEQIDNO:2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：张印则，王琳，刘瑞琪，王鑫，李璐，
申请(专利权)人：深圳大学总医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。