特异性结合S100P蛋白的核酸适配体及其筛选、鉴定和应用制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合S100P蛋白的核酸适配体及其筛选、鉴定和应用，包括以下步骤：设计并构建随机寡核苷酸文库，经SELEX筛选富集、测序、流式分析、免疫荧光及斑点杂交等验证，最终获得能与S100P蛋白特异性结合的寡核苷酸，即核酸适配体，命名为AptS100P‑1，其序列如下所示5’‑ATCCAGAGTGACGCAGCACAGGACTGC TTAGGATTGCGAAGTGCATAGAGCGGCTATATGGACACGGTGGCTTAGT‑3’。

Nucleic acid aptamers specifically binding to S100P protein and their screening, identification and Application

The present invention relates to a nucleic acid aptamer specifically binding to S100P protein and its screening, identification and application. It includes the following steps: designing and constructing a random oligonucleotide library, which is verified by SELEX screening, enrichment, sequencing, flow analysis, immunofluorescence and dot hybridization, and finally obtaining an oligonucleotide specifically binding to S100P protein, namely nucleic acid aptamer, named AptS100P_1. The sequence of ATCCAGAGTGACGCAGGACTGC TTAGGATTGCGAAGTGCATAGGGACTGC TTAGGAGTGCATAGGGCTATGGACACGGCTATGGACACGGGGGTGGCTTAGT

【技术实现步骤摘要】
特异性结合S100P蛋白的核酸适配体及其筛选、鉴定和应用
本专利技术属于分析化学与医学生物领域，涉及特异性结合S100P的核酸适配体及其筛选、鉴定和应用，具体还涉及该核酸适配体在设计、制备验证、应用于基础研究与临床治疗各个方面。
技术介绍
结直肠癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一。尽管在过去的几十年里它的治疗和预后有了改善，但结直肠癌的手术治愈率、5年生存率始终徘徊在50％左右。近年来，结直肠癌的靶向治疗越来越受关注，实现肿瘤靶向治疗则需要有在肿瘤细胞内高表达的靶标，S100P蛋白作为一种钙结合蛋白，介导钙依赖的信号转导通路，参与调节细胞周期进程等多种细胞生长分化过程，它在多种癌症组织中表达上调，与临床预后不良有关。已有研究表明S100P的过表达与结直肠癌的生长、转移和侵袭有关。因此，S100P有望成为一个有效的结直肠癌治疗靶点。核酸适配体(Aptamer)是利用体外筛选技术——指数富集的配体系统进化技术(Systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment，SELEX)，从核酸分子文库中得到的小分子RNA或DNA，可充当性能优良的能特异本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合S100P蛋白的核酸适配体，命名为AptS100P‑1，其特征在于，其序列如下：5’‑ATCCAGAGTGACGCAGCACAGGACTGCTTAGGATTGCGAAGTGCATAGAGCGGCTATATGGACACGGTGGCTTAGT‑3’。

【技术特征摘要】
1.特异性结合S100P蛋白的核酸适配体，命名为AptS100P-1，其特征在于，其序列如下：5’-ATCCAGAGTGACGCAGCACAGGACTGCTTAGGATTGCGAAGTGCATAGAGCGGCTATATGGACACGGTGGCTTAGT-3’。2.特异性结合S100P蛋白的核酸适配体AptS100P-1的衍生物，其特征在于，权利要求1所述核酸适配体AptS100P-1的核苷酸序列上的某一位置被化学修饰或偶联不同的基团、蛋白、药物和纳米载体，得到与所述核酸适配体AptS100P-1具有同源核心序列，相同功能用途的核酸序列。3.根据权利要求1所述的特异性结合S100P蛋白的核酸适配体的筛选，其特征在于，包含a)、b)、c)和d)四个步骤：a)正向筛选将重组人S100P蛋白与适量琼脂糖镍珠室温孵育一定时间，使其偶联至琼脂糖镍珠上，BindingBufferⅠ重悬备用，洗涤除去未结合物，以此为正向筛选的靶标，将合成的随机文库95℃变性，并缓慢冷却至室温后，加入上述制备好的S100P蛋白偶联的琼脂糖镍珠中室温孵育一定时间，将琼脂糖镍珠洗涤后用DEPC水重悬，95℃变性一定时间，离心后收集上清作为模板进行PCR扩增，PCR产物通过3％琼脂糖电泳鉴定，选择没有非特异条带的最高扩增循环数作为大量制备PCR产物的条件，以此对每轮筛选中的PCR循环数进行具体优化；b)ssDNA文库制备5’端Cy3修饰的ssDNA文库的制备方法如下：用5’端Cy3修饰的上...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋磊，孙文静，倪吴花，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33