一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法技术

本发明专利技术提供一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法，如下：(1)纳米磁珠表面修饰亲和素：20mg的纳米四氧化三铁均匀分散在适量乙醇中，先后依次加入氨水和正硅酸乙酯，室温下充分搅拌；上述反应产物经磁分离后分散于甲苯中并搅拌，逐滴加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷，在高温氮气保护下充分搅拌；上述反应产物经磁分离后分散于PBS溶液，加入戊二醛，室温充分混合，加入亲和素振荡继续充分孵育，获得表面修饰亲和素的纳米磁珠。(2)纳米磁珠表面嫁接适配体。取上述表面修饰亲和素的磁珠溶于适量TE溶液，加入5’端修饰生物素的AFP适配体，室温充分孵育，通过亲和素和生物素的特异性结合，适配体嫁接于纳米磁珠表面，获得AFP适配体纳米磁珠。

Preparation of functional nanomagnetic beads for the separation of alpha-fetoprotein adapters

The invention provides a preparation method of functional nanomagnetic beads for separating alpha-fetoprotein, which is as follows: (1) surface modified avidin of nanomagnetic beads: 20 mg Nano-ferric tetroxide is uniformly dispersed in appropriate amount of ethanol, ammonia water and ethyl orthosilicate are successively added, and fully stirred at room temperature; the reaction products are separated by magnetic method, dispersed in toluene and stirred, and added 3_drop by drop. Aminopropyl triethoxysilane was fully stirred under the protection of high temperature nitrogen; the reaction products were separated by magnetic separation and dispersed in PBS solution, added glutaraldehyde, and mixed at room temperature. Affinity oscillation was added to continue to incubate sufficiently to obtain nano-magnetic beads of surface-modified avidin. (2) Grafting adapters on the surface of nano-magnetic beads. The magnetic beads of aforementioned surface-modified avidin were dissolved in a suitable amount of TE solution, and the AFP adapters with 5'end-modified biotin were added. The AFP adapters were fully incubated at room temperature. Through the specific binding of avidin and biotin, the adapters were grafted onto the surface of nano-magnetic beads to obtain AFP adapter nano-magnetic beads.

【技术实现步骤摘要】
一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法
本专利技术涉及功能化纳米材料制备领域，具体是指一种能够高效分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法。
技术介绍
原发性肝癌(HCC)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，具有发病隐匿、进展快、恶性程度高等特点。美国癌症学会最新发布的癌症统计数据显示，全球HCC新发病例78.2万，死亡病例74.5万，中国均占50％左右；在癌症死亡率排序中，男性和女性的HCC死亡率分别位居第2和第6位(参看L.A.Torre,etal.,Globalcancerstatistics,2012.CA-CancerJClin,2015.65(2):87-108)。HCC由于初期发病时比较隐匿，没有特殊的症状表现，因而大部分病患确诊时已经进入癌症的中晚期，往往耽误了最佳的治疗时间。因此，HCC的前期诊断和治疗对于延长病患的生存时间和改善其生活水平起着至关重要的作用。甲胎蛋白(AFP)是由胚胎卵黄囊产生并从肝脏中分泌出的血浆蛋白，人血清中AFP含量与肝癌细胞密切相关。AFP是当前全世界应用最普遍的HCC临床标志物，广泛应用于HCC的早期筛查、诊断、疾病发展监测、治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)纳米磁珠表面修饰亲和素：20mg的纳米四氧化三铁均匀分散在150mL乙醇中，先后依次加入10mL氨水和0.4mL正硅酸乙酯，室温下充分搅拌5小时；上述反应产物经磁分离后分散于甲苯中并搅拌，逐滴加入6mL的3‑氨丙基三乙氧基硅烷，在氮气保护下90℃搅拌12小时；上述反应产物经磁分离后分散于PBS溶液，加入5.5mL戊二醛，室温孵育2小时充分混合，加入0.5‑1mg亲和素振荡继续充分孵育12h，获得表面修饰亲和素的纳米磁珠；(2)纳米磁珠表面嫁接适配体：取上述表面修饰亲和素的磁珠20mg溶于1mLTE溶液，加入1‑...

【技术特征摘要】
1.一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)纳米磁珠表面修饰亲和素：20mg的纳米四氧化三铁均匀分散在150mL乙醇中，先后依次加入10mL氨水和0.4mL正硅酸乙酯，室温下充分搅拌5小时；上述反应产物经磁分离后分散于甲苯中并搅拌，逐滴加入6mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，在氮气保护下90℃搅拌12小时；上述反应产物经磁分离后分散于PBS溶液，加入5.5mL戊二醛，室温孵育2小时充分混合，加入0.5-1mg亲和素振荡继续充分孵育12h，获得表面修饰亲和素的纳米磁珠；(2)纳米磁珠表面嫁接适配体：取上述表面修饰亲和素的磁珠20mg溶于1mLTE溶液，加入1-2OD的5’端修饰生物素的AFP适配...

【专利技术属性】
技术研发人员：林振坤，苏宇，刘雨欣，陈永辉，刘畅，金嘉乐，戴露瑶，包佳丽，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院，温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33