The invention belongs to the field of biomedical engineering, in particular to a preparation method of bFGF hydrogel and its application. The preparation method of bFGF hydrogel includes the following steps: S1, trypsinase digestion into fibrous annulus tissue, S2, ribozyme digestion into the mixture, and Trizon treatment of precipitate after digestion; S3, preparation. Preparation of acellular fibrous ring matrix solution; S4, preparation of chitosan solution; S5, preparation of genipin solution; S6, preparation of acellular fibrous ring matrix/chitosan mixture; S7, preparation of bFGF buffer; S8, total mixing of bFGF hydrogel. The preparation method of the present invention has the advantages of simple operation, good histocompatibility, excellent mechanical properties, continuous release of bFGF, long duration, promoting the synthesis of collagen 1, collagen 2 and polysaccharide, and can be applied in fibrous ring tissue engineering.
【技术实现步骤摘要】
一种bFGF水凝胶的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物医学工程领域,尤其涉及一种bFGF水凝胶的制备方法及其在纤维环组织工程中的应用。
技术介绍
椎间盘退变性疾病引起腰部疼痛,严重影响中老年患者的生活质量。有报道称,仅美国每年用于治疗该病的花费在160亿美元左右。椎间盘退变性疾病引起的腰部疼痛在全球广泛流行并带来了巨大的经济损失。目前,常规治疗方法包括保守治疗和外科手术治疗。通过外科手术能够显著改善患者病情,但是术后脊柱生物力学的改变会引起相邻节段的退化从而引起严重的脊柱病变。纤维环组织工程是治疗椎间盘退变性疾病的一个热点,部分专家和学者尝试使用组织工程椎间盘替换病变的椎间盘,纤维环机构和功能的完整性是维持髓核初始形态位置以及盘内生理压力的关键。有研究表明,维持纤维环的完整性在椎间盘退变性疾病的治疗中起着关键作用。胶原和黏多糖在纤维环的机械性伸缩过程中起主要作用。然而,早先的研究里基质中的胶原和黏多糖完全异于自然组织,这也导致了研究的失败。从显微结构上模拟自然组织是成功构造仿生纤维环的最大挑战。普遍来讲理想的手术支架需要拥有较好的组织相容性、适当的降解速率,与自然组织拥有相似的结构和机械性能。近年来,随着去细胞技术的发展,原生组织支架被广泛研究。通过化学、生物酶或者机械方法去除细胞内组分同时保留细胞外基质的方法可以获得脱细胞基质。脱细胞基质不仅能减少机体的免疫排斥,同时能很好的维持初始器官的生物学功能,有利于细胞的黏着、增殖和分化。脱细胞技术已经被运用于人体的肌腱重建、皮肤移植和血管工程。目前,鲜有脱细胞纤维环基质应用于纤维环组织工程的报道。虽然脱细胞纤 ...
【技术保护点】
1.一种bFGF水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、取纤维环组织,并将纤维环组织切成1mm×1mm×1mm大小的纤维环组织块,将纤维环组织块置于研钵中,加入液氮后捣碎,再加入0.25%胰蛋白酶溶液,置于24℃的恒温振荡器中振荡24小时,得混合物;S2、将步骤S1得到的混合物用PBS溶液清洗三次,然后加入核糖酶溶液,并在37℃的恒温振荡器中消化12小时;消化完成后用100ml Trizon处理24小时,然后每8小时用PBS溶液处理一次至8次为止,静置得沉淀物;S3、用醋酸水溶液溶解步骤S2得到的沉淀物,待沉淀物溶解完全即得脱细胞纤维环基质溶液,并将脱细胞纤维环基质溶液贮存在4℃冰箱内待用;S4、取壳聚糖并加入醋酸水溶液,机械搅拌溶解,得壳聚糖溶液;S5、取京尼平并加入乙醇水溶液,机械搅拌溶解,得京尼平溶液;S6、将步骤S4制得的壳聚糖溶液、步骤S3制得的脱细胞纤维环基质溶液和步骤S5制得的京尼平溶液混合均匀即得脱细胞纤维环基质/壳聚糖混合液;S7、取bFGF添加到5nM的tris缓冲液中,混合均匀即得bFGF缓冲液;S8、将步骤S7制得的bFGF缓冲液与步骤S6制得的脱细胞 ...
【技术特征摘要】
1.一种bFGF水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、取纤维环组织,并将纤维环组织切成1mm×1mm×1mm大小的纤维环组织块,将纤维环组织块置于研钵中,加入液氮后捣碎,再加入0.25%胰蛋白酶溶液,置于24℃的恒温振荡器中振荡24小时,得混合物;S2、将步骤S1得到的混合物用PBS溶液清洗三次,然后加入核糖酶溶液,并在37℃的恒温振荡器中消化12小时;消化完成后用100mlTrizon处理24小时,然后每8小时用PBS溶液处理一次至8次为止,静置得沉淀物;S3、用醋酸水溶液溶解步骤S2得到的沉淀物,待沉淀物溶解完全即得脱细胞纤维环基质溶液,并将脱细胞纤维环基质溶液贮存在4℃冰箱内待用;S4、取壳聚糖并加入醋酸水溶液,机械搅拌溶解,得壳聚糖溶液;S5、取京尼平并加入乙醇水溶液,机械搅拌溶解,得京尼平溶液;S6、将步骤S4制得的壳聚糖溶液、步骤S3制得的脱细胞纤维环基质溶液和步骤S5制得的京尼平溶液混合均匀即得脱细胞纤维环基质/壳聚糖混合液;S7、取bFGF添加到5nM的tris缓冲液中,混合均匀即得bFGF缓冲液;S8、将步骤S7制得的bFGF缓冲液与步骤S6制得的脱细胞纤维环基质/壳聚糖混合液混合均匀,置于孔板上,再置于冷冻干燥器干燥24小时即得bFGF水凝胶。2.根据权利要求1所述的一种bFGF水凝胶的制备方法,其特征在于,步骤S1中,所述纤维环组织由兔纤维环组织中的髓核和外侧...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘晨,徐宏光,张玙,肖良,赵泉来,
申请(专利权)人:皖南医学院第一附属医院皖南医学院弋矶山医院,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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