The invention relates to a preparation method of acellular nerve scaffold, which comprises the following steps: taking the isolated nerve tissue for pretreatment; freezing and thawing the preconditioned isolated nerve tissue repeatedly; hypoosmotic treatment of the isolated nerve; treating the isolated nerve with a solution containing a detergent and removing the cells with nuclease, and obtaining the acellular nerve after cleaning. Bracket. By using the method of the invention, antigenic components such as lipid, protein and nucleic acid are fully removed while preserving the structure of nerve basement membrane tube and nerve matrix to the greatest extent.
【技术实现步骤摘要】
一种脱细胞神经支架及其制备方法
本专利技术涉及组织工程材料领域,具体地,涉及一种制备脱细胞神经支架的方法以及该方法制备的的脱细胞神经支架。
技术介绍
临床上因各种原因造成的神经损伤非常常见,当缺损较大(>3cm)时,通常难以进行无张力吻合,需要进行神经移植。其中,自体神经移植虽然有肯定的疗效,且作为其他治疗方法对比的金标准,但存在来源有限及伦理问题等局限性,限制了其进一步使用。然而,目前的工艺技术水平还无法仿制出类似天然细胞外基质结构和功能的人工支架,而去细胞同种异体神经内部天然结构与受区神经的细胞外基质结构相似,同时具有免疫原性弱、去细胞完全、神经基底膜管保存好、有利于轴突趋化性再生等优点,得到专家一致认可。因此,脱细胞神经支架成为了组织工程支架理想选择。近年来组织工程学和再生医学的大量研究表明,细胞外基质(Extraellularmatrix,ECM)是细胞新陈代谢场所,可诱导调节细胞的生长、繁殖与分化,其自身的形态和功能与组织的形态和功能有着密切的关系。细胞外基质在哺乳动物的发育和生理活动中起重要的作用,基质中的很多成分,如胶原的氨基酸序列在种属间高度保守,这种同源性也为异种细胞外基质作为生物活性支架莫定了基础。研究表明,神经组织内ECM成分有重要的生物学功能,不仅能够明显的引导和促进神经再生,同时为神经再生提供良好的微环境。天然神经细胞外基质成分主要包含层粘连蛋白(Laminin,LN)、纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)、I型胶原(TypeIcollagen)、IV型胶原(TypeIVco11agen)、硫酸肝素蛋白多糖(Hepa ...
【技术保护点】
1.一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.取离体神经组织进行预处理;S2.将经过预处理的所述离体神经组织进行反复冻融;S3.将步骤S2处理后的所述离体神经组织进行低渗处理;S4.脱细胞:将步骤S3处理后的所述离体神经组织用含有去垢剂的溶液处理脱除细胞,并用PBS缓冲液清洗;S5.核酸酶处理:用含DNA酶和RNA酶的混合溶液处理脱除细胞后残留的核酸成分,并用PBS缓冲液清洗,得到脱细胞神经支架。
【技术特征摘要】
1.一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.取离体神经组织进行预处理;S2.将经过预处理的所述离体神经组织进行反复冻融;S3.将步骤S2处理后的所述离体神经组织进行低渗处理;S4.脱细胞:将步骤S3处理后的所述离体神经组织用含有去垢剂的溶液处理脱除细胞,并用PBS缓冲液清洗;S5.核酸酶处理:用含DNA酶和RNA酶的混合溶液处理脱除细胞后残留的核酸成分,并用PBS缓冲液清洗,得到脱细胞神经支架。2.根据权利要求1所述的一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,所述预处理包括剔除神经外血管、脂肪及结缔组织。3.根据权利要求1所述的一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,步骤S2通过以下方式实现:将经过预处理的所述离体神经组织置于液氮中1~3min,25~37℃放置3~10min,重复操作3~4次。4.根据权利要求1所述的一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,步骤S3通过以下方式实现:将步骤S2处理后的所述离体神经组织在25~37℃下浸渍于低渗液中3~6h。5.根据权利要求1所述的一种脱细胞神经支架的制备方法,其特征在于,S4包括以下步骤:S41.将步骤S3处理后的所述离体神经组织置于含有SB-10的溶液中,在20~25℃、以80~100次/分钟的频率震荡浸泡12~18h;S42.将S41处理后的所述离体神经组织置于含有TritonX-200和SB-16的混合液中,在20~25℃,以80~100次/分钟的频率震荡浸泡9~12h,然后用灭菌的PBS缓冲液清洗;S43.将S42处理后的所述离体神经组织置于含有SB-10的等渗液Ⅰ中,在10~15℃下,以80~100次/分钟的频率震荡浸泡6~9h,然后用灭菌的PBS缓冲液清洗;S44.将S43处理后的离体神经组织置于含有Trito...
【专利技术属性】
技术研发人员:王伟,李杰,马义勇,智晓东,李宇,张玉强,张振宇,管树军,邱裕佳,段思腾,张臣鸣,曹宇,
申请(专利权)人:王伟,锦州医科大学,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。