一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种红景天苷‑维生素E双相前体脂质体，所述双相前体脂质体主要包括大豆磷脂10‑25wt%、维生素E 1‑2.5wt%、红景天苷1‑2.5wt%、胆固醇2‑5wt%，冻干保护剂2‑5wt%，聚乙二醇2000 2‑5wt%，余量磷酸盐缓冲液。制备方法包括如下步骤：S1原料溶解；S2制膜；S3红景天苷水相溶液；S4洗膜；S5高速剪切；S6高压微射流均质；S7透析；S8冷冻干燥。本发明专利技术制备同时包埋油‑水双相功能分子的脂质体，并且经过高压微射流及冷冻处理得到了稳定的油‑水双相前体脂质体，以解决现有脂质体普遍存在功能单一、颗粒大小不均匀、稳定性低，不利于运输等问题。

A salidroside-vitamin E biphasic precursor liposome and its preparation and Application

The invention discloses a salidroside-vitamin E biphasic precursor liposome, which mainly comprises soybean phospholipid 10_25wt%, vitamin E 1_2.5wt%, salidroside 1_2.5wt%, cholesterol 2_5wt%, lyophilization protectant 2_5wt%, polyethylene glycol 2000_2_5;wt%, and residual phosphate buffer. The preparation method includes the following steps: S1 raw material dissolution; S2 film preparation; S3 salidroside aqueous solution; S4 film washing; S5 high-speed shearing; S6 high-pressure micro-jet homogenization; S7 dialysis; S8 freeze-drying. The present invention prepares liposomes containing oil-water biphasic functional molecules at the same time, and obtains stable oil-water biphasic precursor liposomes after high pressure micro-jet and freezing treatment, so as to solve the common problems of single function, uneven particle size, low stability and unfavorable transportation of existing liposomes.

【技术实现步骤摘要】
一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体及其制备方法和应用，属于医药

技术介绍
红景天为景天科红景天属多年生草本植物，或亚灌木野生植物，其种类繁多，是具有悠久历史的珍贵传统药材，入药主要部位是干燥根或根茎。红景天苷是红景天中含量较高(1.11％)的主要活性成分。红景天的药理作用主要有抗缺氧、抗疲劳、抗衰老、抗辐射和抗病毒等，已作为具有明显抗缺氧作用的中药而广泛应用于临床。但红景天苷相关产品具有服用量大、服用次数多、体内生物利用度低等问题。维生素E是脂溶性天然抗氧化剂，通过钝化过氧化自由基的活性或与脂质过氧化自由基反应抑制脂质过氧化，有助于提高免疫力和防治疾病，影响基因的转录和表达。维生素E还具有抗衰老、提高机体免疫力、预防自由基代谢紊乱引发的各种疾病以及预防早老性老年痴呆症、抗肿瘤、防止DNA的辐射损伤等方面的作用,一直是人们研究的热点。但是市售的维生素E存在诸如水溶性差、对光和热敏感、易氧化、没有缓释功效、生物利用度低等许多问题。脂质体是一种具有双分子层结构的封闭囊泡，是一种人工膜，在自组装过程中可同时包埋亲脂性(双层膜之间)和亲水性(中心)功能营养物质。自1965年被英国剑桥大学Bangham教授团队发现以来，脂质体在医药、化妆品和基因工程等领域有了广泛应用，目前已有超过18种包埋了不同抗癌药物的脂质体产品经过了美国FDA批准上市。中国专利申请201711175784.1公开了一种柔性脂质体的制备方法，定量称取蛋黄卵磷脂、胆固醇、胆酸钠和维生素E，加入到圆底烧瓶中，添加氯仿-甲醇复合溶剂使其溶解，负压旋转蒸发清除有机溶剂，直至烧瓶壁出现暗黄色均匀薄膜；加入聚乙二醇的磷酸盐缓冲液，旋转洗膜；在冰水浴中适度超声，使用0.22微米微孔滤膜滤除大颗粒；取少量维生素E溶取脂质体原液，使用超速离心将脂质体从混悬液体系中分离，使用微孔滤膜过滤，去除清液后即得柔性脂质体。中国专利申请201711238111.6公开了一种包埋红景天苷的PEG化纳米脂质体的制备方法。即将胆固醇、大豆卵磷脂、1,2-二硬脂酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺-N-马来酰亚胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)和红景天苷溶于无水乙醇中，通过减压蒸发形成脂质薄膜；加入红景天苷溶液充分水化，通过振荡、超声分散得到悬浮液；再通过挤压形成PEG化红景天苷纳米脂质体胶体溶液。上述的脂质体制备方法都存在这样的缺陷：包埋的内容物单一，也就决定了相关脂质体的功能单一，一些复合脂质体也只是在脂质体中心的水相中加入多种水溶性物质；另外，现有的脂质体，往往颗粒大小不均匀，长期放置易发生聚集沉降，被包埋物释放加剧，严重影响脂质体寿命且不利于运输。
技术实现思路
本专利技术同时包埋油-水双相功能分子的脂质体，并且经过高压微射流及冷冻处理得到了稳定的油-水双相前体脂质体，以解决现有脂质体普遍存在功能单一、颗粒大小不均匀、稳定性低，不利于运输等问题。为了达到上述的目的，本专利技术采取以下技术方案：一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体,所述双相前体脂质体主要包括大豆磷脂10-25wt％、维生素E1-2.5wt％、红景天苷1-2.5wt％、胆固醇2-5wt％，冻干保护剂2-5wt％，聚乙二醇20002-5wt％，余量磷酸盐缓冲液。所述冻干保护剂选自甘露醇和棉籽糖中的一种或多种。所述冻干保护剂选自甘露醇和棉籽糖的两者混合物，所述两者混合物的质量比为(1-3)：(1-2)。所述的维生素E-红景天苷双相前体脂质体的制备方法，包括如下步骤：S1原料溶解：将大豆磷脂、维生素E、胆固醇混合，加入无水乙醇，加热至40-60℃，搅拌至完全溶解，得到混合溶液；S2制膜：将步骤S1处理后的溶液加入旋转蒸发仪中，抽真空去除溶剂，旋蒸速度为30-60rpm，旋蒸温度为45-60℃，旋转蒸发仪抽真空处理时间为20-40min，容器内壁附着一层脂溶性混合物；S3红景天苷水相溶液：将聚乙二醇2000加入到磷酸盐溶液中，配制成聚乙二醇2000磷酸盐溶液，将红景天苷溶解于聚乙二醇2000磷酸盐缓冲溶液中，然后用微孔滤膜过滤以除去不溶性杂质；S4洗膜：将步骤S3制得的红景天苷水相溶液加入步骤S2得到的脂溶性混合物中进行洗膜，直至容器内壁附着物被完全洗下，获得粗脂质体；S5高速剪切：将步骤S4制得的粗脂质体用高速剪切机剪切10-15min；S6高压微射流均质：将步骤S5处理后的脂质体混悬液加入高压微射流均质机进行二次均质；S7透析：将步骤S6得到的二次均质脂质体置于截留分子量为8000-12000的透析袋中透析，除去游离的维生素E和红景天苷，得到维生素E-红景天苷乳液；S8冷冻干燥：将步骤S7得到的维生素E-红景天苷乳液中加入冻干保护剂后，-40℃真空冷冻至水印消失；然后升温至10-20℃，再持续干燥一段时间后，得维生素E-红景天苷双相前体脂质体。所述步骤S3中磷酸缓冲盐的浓度为10nmol/L-100nmol/L。所述步骤S4洗膜时间为60-120min。所述步骤S6高压微射流均质压力为110-140MPa。所述步骤S8真空冷冻时间为36-72h，升温干燥时间8-24h。所述的红景天苷-维生素E双相前体脂质体在具有肝损伤特征的脂肪肝、急、慢性肝炎、肝硬化疾病中的应用。本专利技术的原理是：本专利技术采用薄膜分散-动态高压微射流法，同时包埋了维生素E-红景天苷两种物质。将维生素E溶解于磷脂等油相溶液并在抽真空条件下获得脂质薄膜，红景天苷溶解在聚乙二醇2000磷酸盐溶液水相溶液中，加入脂质薄膜中进行洗膜，此过程磷脂分子自发组装形成双分子层闭合囊泡结构，维生素E嵌入磷脂双分子层、红景天苷则被包埋于水相中心成为芯材，聚乙二醇2000通过共价键偶联的方式连接到己经制得的脂质体的表面；制得的粗脂质体经过高速剪切机预处理，再经过动态高压微射流二次均质，并通过透析袋透析除去游离的维生素E和红景天苷后，获得粒度分布均匀的脂质体，再加入冻干保护剂冷冻干燥，大大提高脂质体稳定性。本专利技术具有以下技术特点：1)本专利技术选择合适的原材料相配合，通过改良的生产工艺，制备得到的脂质体能够同时包埋油-水双相物质，使得脂质体能够同时搭载不同极性物质。2)本专利技术药理实验结果表明，红景天苷和维生素E合用在治疗肝损伤效果明显优于单用效果，基于红景天苷和维生素E自身的缺点，本专利技术将这两组物质制成复方脂质体，在提高维生素E和红景天苷稳定性的同时，亦可改善口感、增加生物利用度及减少服用次数。3)本专利技术所得维生素E-红景天苷前体脂质体为固体制剂，克服了普通脂质体存在的聚集、沉降、药物渗漏及磷脂氧化等技术问题，相对于现有的普通脂质体具有稳定性好的优点，另外还有便于贮存和运输的优点。4)本专利技术制备的维生素E-红景天苷双相前体脂质体具有粒径均匀、稳定性高等优点。本专利技术制备的前体脂质体平均粒度为55.8-61.4nm，红景天苷包封率为33.8-46.8％，维生素E包封率为36.6-47.9％。附图说明图1为维生素E-红景天苷双相前体脂质体制备流程图；图2为实施例1-4制备的维生素E-红景天苷双相前体脂质体的粒径分布图；图3为实施例3制备的维生素E-红景天苷双相前体脂质体分别在25℃、40℃和光照条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种红景天苷‑维生素E双相前体脂质体，其特征在于所述双相前体脂质体主要包括大豆磷脂10‑25wt%、维生素E 1‑2.5wt%、红景天苷1‑2.5wt%、胆固醇2‑5wt%，冻干保护剂2‑5wt%，聚乙二醇2000 2‑5wt%，余量磷酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体，其特征在于所述双相前体脂质体主要包括大豆磷脂10-25wt%、维生素E1-2.5wt%、红景天苷1-2.5wt%、胆固醇2-5wt%，冻干保护剂2-5wt%，聚乙二醇20002-5wt%，余量磷酸盐缓冲液。2.根据权利要求1所述的一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂选自甘露醇和棉籽糖中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的一种红景天苷-维生素E双相前体脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂选自甘露醇和棉籽糖的两者混合物，所述两者混合物的质量比为（1-3）：（1-2）。4.一种权利要求1-3中任一项所述的维生素E-红景天苷双相前体脂质体的制备方法，包括如下步骤：S1原料溶解：将大豆磷脂、维生素E、胆固醇混合，加入无水乙醇，加热至40-60℃，搅拌至完全溶解，得到混合溶液；S2制膜：将步骤S1处理后的溶液加入旋转蒸发仪中，抽真空去除溶剂，旋蒸速度为30-60rpm，旋蒸温度为45-60℃，旋转蒸发仪抽真空处理时间为20-40min，容器内壁附着一层脂溶性混合物；S3红景天苷水相溶液：将聚乙二醇2000加入到磷酸盐溶液中，配制成聚乙二醇2000磷酸盐溶液，将红景天苷溶解于聚乙二醇2000磷酸盐缓冲溶液中，然后用微孔滤膜过滤以除去不溶性杂质；S4洗膜：将步骤S3制得的红...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭娜，接伟光，张颖智，乔巍，
申请(专利权)人：黑龙江东方学院，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23