一种LAG3基因人源化动物模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种制备LAG3人源化动物模型的方法及其应用，该方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将鼠Lag3基因编码胞外区的部分替换为相应的人源LAG3基因片段，同时保留了鼠Lag3基因的胞内信号转导区，保证了细胞信号的正确传导不受影响。该模型是筛选人LAG3抑制剂药物的理想动物模型。

【技术实现步骤摘要】
一种LAG3基因人源化动物模型的构建方法及其应用
本专利技术属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体涉及一种LAG3基因修饰人源化动物模型的构建方法。
技术介绍
复杂的生物过程通常需要进行体内分析，而人体内生物学的研究受到道德和技术的严重限制，因此越来越需要动物模型来进行人体细胞、组织和器官的体内研究。目前，科学家们已经开发了多种人源化小鼠或人鼠嵌合体来克服这些限制，并且现在已经成为人体细胞和组织体内研究的重要工具。在临床药物的研发过程中，小鼠被广泛用于候选药物临床前的安全性及有效性评价，如新型抗病毒药物的体内有效性评价、肿瘤的免疫治疗和开发新型的化学治疗药物、新型抗自身免疫病药物的治疗效果、药物体内代谢和肝毒性、人源抗体的前期开发评估等。然而，通过临床前评估的候选药，大部分会在临床I期失败，小鼠与人体内生理、病理等的差异是重要的因素：人鼠免疫系统的差异、许多致病因子和药物在人鼠之间的种系特异性、药物靶点与受体在人鼠之间的亲和力差异、人源肿瘤与鼠源肿瘤的差异等都将影响临床前与临床数据的一致性。因此，构建具有人的功能性基因、细胞及组织的人源化小鼠模型具有重要的意义，可以随着人源化小鼠的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备LAG3人源化动物模型的方法，其特征在于，所述人源化动物中，动物Lag3基因的胞外区域被替换为人源LAG3的基因对应片段，保留动物LAG3的胞内信号转导区。

【技术特征摘要】
1.一种制备LAG3人源化动物模型的方法，其特征在于，所述人源化动物中，动物Lag3基因的胞外区域被替换为人源LAG3的基因对应片段，保留动物LAG3的胞内信号转导区。2.如权利要求1所述的方法，其包括以下步骤：(1)构建表达针对鼠源Lag3基因的sgRNA的质粒；(2)构建人源化LAG3基因的打靶载体；(3)将步骤(1)所述质粒体外转录获得的sgRNA与步骤(2)的载体以及Cas9mRNA或Cas9蛋白注射至鼠受精卵细胞质或细胞核中，移植入受体母鼠生产LAG3基因修饰人源化鼠模型。3.如权利要求2所述的方法，其中所述人源化LAG3基因包含嵌合序列SEQIDNO：10，其中1-808bp及5797-6599bp为鼠源序列，809-5796bp为人源序列。4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其中针对鼠源Lag3基因的sgRNA的序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:6所示。5.如权利要求1-3任一项所述的方法，进一步包括利用引物鉴定所述动物模型的基因型的步骤。6.如权利要求5所述的方法，其中鉴定所述动物模型的基因型使用的引物为：7.如权利要求6所述的方法，进一步包括对对两端PCR鉴定阳性的小鼠克隆进行测序验证。8.如权利要求7所述的方法，其中所述测序使用的引物如下：引物名称引物序列YF000087-HuLAG3-5seqR1CTGTCCTACAGTCTGCCTGC(SEQNo.17)YF000087-HuLAG3-5seqF1AGAATGAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翔，赵静，琚存祥，张明坤，陶裴裴，侯欢欢，
申请(专利权)人：江苏集萃药康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32