产香酵母YG-4、其筛选方法及用其制备烟用香料的方法技术

本发明专利技术公开一种产香酵母YG‑4、其筛选方法及用其制备烟用香料的方法，其保藏编号为CGMCC NO.17223。产香酵母YG‑4用于烟草增香。产香酵母YG‑4的筛选方法为：通过对水果表皮菌种进行富集、分离，得到若干单菌落，将得到的单菌落分别进行活化培养，然后将其接入种子培养基中进行发酵，通过感官嗅辩对比的方法，筛选得到一株能够赋予发酵液花香韵和甜香韵，且区别于对照的产香酵母YG‑4。相对于现有技术，本发明专利技术提供一种产香酵母YG‑4，其可以发酵含有烟末的种子培养基，能产生酯类、羰基类、酸类、烃类、醇类等32种对香气有贡献的物质，其中苯乙醇的含量较大，香味贡献较多，且利用了烟末本身作为香原料的特征，其运用到卷烟中易与烟草制品协调一致，提高了卷烟的抽吸品质。

Aroma-producing yeast YG-4, its screening method and its preparation method for tobacco flavor

The invention discloses an aroma-producing yeast YG_4, a screening method thereof and a method for preparing tobacco flavors with the preservation number CGMCC NO. 17223. Aroma-producing yeast YG_4 is used for tobacco aroma enhancement. The screening method of aroma-producing yeast YG_4 is as follows: through enrichment and isolation of fruit epidermis strains, several single colonies are obtained. The single colonies are activated and cultured separately, and then fermented in seed medium. Through sensory olfaction and comparison, an aroma-producing yeast YG_4 is screened, which can give the floral and sweet fragrance of fermentation broth, and is different from the control yeast YG_4. 4. Compared with the existing technology, the present invention provides an aroma-producing yeast YG_4, which can ferment seed culture medium containing tobacco powder, and can produce 32 kinds of substances contributing to aroma, such as esters, carbonyls, acids, hydrocarbons and alcohols. Among them, phenylethanol content is larger, and the aroma contributes more, and the characteristics of tobacco powder itself as a cigarette raw material are utilized, and it is easy to be used in cigarettes and tobacco production. The smoking quality of cigarettes was improved by coordinating the products.

【技术实现步骤摘要】
产香酵母YG-4、其筛选方法及用其制备烟用香料的方法
本专利技术涉及微生物技术发酵领域，特别涉及一种产香酵母YG-4、其筛选方法及用其制备烟用香料的方法。
技术介绍
随着卷烟加工工艺的提高以及“降焦减害”的推广，各大烟草企业开始探寻降焦途径，使得焦油等物质含量减少，然而香味成分也随之减少，烟气中香气不足故而无法满足消费者的需求。所以，目前急需解决的一个问题是如何弥补经过陈化等步骤后损失的香气。因此，使用香精香料来弥补烟气的不足成为主要研究方向，但是合成香料香味单一，天然香料植物资源有限，成本高，使得无法广泛使用。随着微生物技术的发展，并在烟草中的使用越来越广泛，尤其是在香料的制备以及品质改善方面越来越重要。利用微生物来发酵烟叶产香的研究多是通过固态发酵，改善其烟叶品质。而利用微生物进行烟草的液态发酵，制备天然烟用香料的相关研究较少，因此，通过筛选新菌株进行液态发酵制备烟用香料对提高卷烟的抽吸品质具有重要作用。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种产香酵母YG-4，其保藏编号为CGMCCNO.17223，此菌株的筛选方法及用此菌株制备的烟用香料的制备方法。本专利技术的目的是以下述方式实现的：一种产香酵母YG-4，其保藏编号为CGMCCNO.17223。所述产香酵母YG-4用于烟草增香。所述的产香酵母YG-4的筛选方法，通过对水果表皮菌种进行富集、分离，得到若干单菌落，对这些得到的单菌落分别进行活化培养，然后将其接入种子培养基中进行发酵，通过嗅辩对比来分析发酵液的香气，最终筛选出一种赋予发酵液明显花香韵与甜香韵，且区别于对照组的产香酵母YG-4。所述的产香酵母YG-4的筛选方法，具体包括以下步骤：（1）富集：取水果表皮于锥形瓶中，加入无菌水，在恒温摇床中培养20min~30min，使水果表皮的微生物移至无菌水中，取出静置，得到富集液；（2）分离：将富集液进行梯度稀释，得到不同浓度的菌液，取同等量的不同浓度菌液，分别涂布于固体培养基中，培养24-48h，观察其形态，选出酵母菌类的若干单菌落，对若干单菌落进行分离纯化；（3）活化培养：将分离纯化后的单菌落分别接入活化培养基中，分别进行活化培养，并置于恒温摇床培养12-24h，得到菌液；（4）发酵筛选：将菌液分别接入预先配制好灭菌过的种子培养基中，然后将其在恒温摇床培养48-72h，进行发酵培养，通过嗅辩对比来分析发酵液的香气，最终筛选出一种赋予发酵液花香韵和甜香韵，且区别于对照组的产香酵母菌株YG-4。优选地，所述种子培养基的组成为：烟末5-20g，水40-200mL，烟末和水的质量比为1：（2-15）。优选地，所述步骤（4）中，菌液接种量为3%-15%。优选地，所述步骤（4）中发酵培养过程中，温度为25-42℃，时间为18-120h。优选地，所述水果为葡萄。一种用产香酵母YG-4制备烟用香料的方法，由所述的产香酵母YG-4对含有烟末的种子培养基进行发酵，得到发酵液，将发酵液进行过滤浓缩，得到烟用香料。优选地，所述种子培养基的组成为：烟末5-20g，水40-200mL，烟末和水的质量比为1：（2-15）。相对于现有技术，本专利技术提供一种产香酵母YG-4、其筛选方法及用其制备烟用香料的方法，保藏编号为CGMCCNO.17223，其可以发酵含有烟末的种子培养基，能产生至少酯类、羰基类、酸类、烃类、醇类等32种对香气有贡献的物质，其中产生苯乙醇的含量较大，香味贡献较多，且利用了烟末本身作为香原料的特征，其运用到卷烟中易与烟草制品协调一致，提高了卷烟的抽吸品质。生物保藏说明产香酵母YG-4：分类命名：汉逊酵母，拉丁文名称：Hansenulasp.；保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2019年01月23日；保藏编号：CGMCCNo.17223。具体实施方式实施例1一种产香酵母YG-4，其保藏编号为CGMCCNO.17223。具体地，所述产香酵母YG-4，分类命名为汉逊酵母Hanseniaspora.sp.，于2019年1月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，保藏编号为CGMCCNO.17223。进一步地，所述产香酵母YG-4用于烟草增香。本专利技术还提供了一种产香酵母YG-4的筛选方法，通过对水果表皮菌种进行富集、分离，得到若干单菌落，对这些得到的单菌落分别进行活化培养，然后将其接入种子培养基中进行发酵，得到发酵液，通过嗅辩对比来分析发酵液的香气，最终筛选出一种赋予发酵液花香韵和甜香韵，且区别于对照组的产香酵母菌株YG-4。对照组也称为空白对照组，筛选时，设置空白对照组，对照空白组是由不接菌的活化培养基以10%的接种量接入种子培养基中构成，将发酵好的样品液与空白对照组进行对比，将不同于空白对照组香味的发酵液取出进行嗅辩，筛选出能够赋予发酵液明显花香韵和甜香韵的一株菌株。具体包括以下步骤：（1）富集：取水果表皮于锥形瓶中，加入无菌水，在恒温摇床中培养20min~30min，使水果表皮的微生物移至无菌水中，取出静置，得到富集液；（2）分离：将富集液进行梯度稀释，得到不同浓度的菌液，取同等量的不同浓度菌液，分别涂布于固体培养基中，培养24-48h，观察其形态，按照酵母在培养基中的常规形态进行初步筛选，选出酵母菌类的若干单菌落，对若干单菌落进行分离纯化；所述分离纯化的过程为：分别挑去固体培养基中的酵母菌，采用平板划线法分离到重新配制灭菌后的固体培养基中，进行培养，一直重复此步骤，直至培养基中出现纯酵母单菌落为止；所述固体培养基为YPD培养基，其组成为:酵母粉10g、葡萄糖20g、蛋白胨20g、蒸馏水1L、琼脂20g；（3）活化培养：将分离纯化后的单菌落分别接入活化培养基中，分别进行活化培养，并置于恒温摇床培养12-24h，得到菌液；上述活化培养基可以是YPD液体培养基，其组成可以为:酵母粉10g、葡萄糖20g、蛋白胨20g、蒸馏水1L。（4）发酵筛选：将菌液分别接入预先配制好灭菌过的种子培养基中，然后将其在恒温摇床培养48-72h，进行发酵培养，培养过程中观察发酵液香味变化，通过嗅辩对比来分析发酵液的香气，最终筛选出一种赋予发酵液花香韵和甜香韵，且区别于对照组的产香酵母菌株YG-4。利用常规的WL表型鉴定、形态学鉴定以及分子鉴定对产香酵母YG-4进行种属的鉴定，其鉴定方法为现有技术，在此不再赘述。通过WL表型鉴定，可知产香酵母YG-4的菌落颜色为黄色边、深绿色顶，表面光滑圆润且不透明，中部突起，干燥、菌落较大。通过形态学鉴定，可知显微形态下产香酵母YG-4呈现梭形、且为单生菌。同时对产香酵母YG-4进行16SrRNA检测，可知，其菌株的基因测序结果与汉逊酵母Hanseniaspora.sp具有高度的同源性，因此本专利技术得到的产香菌YG-4的种属为汉逊酵母Hanseniaspora.sp。优选地，所述种子培养基的组成为：烟末5-20g，水40-200mL，烟末和水的质量比为1：（2-15）。所述烟末包括烤烟烟叶等碎末。优选地，所述步骤（4）中，菌液接种量为3%-15%。优选地，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产香酵母YG‑4，其特征在于：其保藏编号为CGMCC NO.17223。

【技术特征摘要】
1.一种产香酵母YG-4，其特征在于：其保藏编号为CGMCCNO.17223。2.如权利要求1所述的产香酵母YG-4，其特征在于：所述产香酵母YG-4用于烟草增香。3.如权利要求1所述的产香酵母YG-4的筛选方法，其特征在于：通过对水果表皮菌种进行富集、分离，得到若干单菌落，对这些得到的单菌落分别进行活化培养，然后将其接入种子培养基中进行发酵，通过嗅辩对比来分析发酵液的香气，最终筛选出一种赋予发酵液花香韵和甜香韵，且区别于对照组的产香酵母菌株YG-4。4.如权利要求3所述的产香酵母YG-4的筛选方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）富集：取水果表皮于锥形瓶中，加入无菌水，在恒温摇床中培养20min~30min，使水果表皮的微生物移至无菌水中，取出静置，得到富集液；（2）分离：将富集液进行梯度稀释，得到不同浓度的菌液，取同等量的不同浓度菌液，分别涂布于固体培养基中，培养24-48h，观察其形态，选出酵母菌类若干单菌落，对若干单菌落进行分离纯化；（3）活化培养：将分离纯化后的单菌落分别接入活化培养基中，分别进行活化培养，并置于恒温摇床培养12-24h，得到菌液；（4）发酵筛选：将菌液分别接入预...

【专利技术属性】
技术研发人员：马林，朴永革，郭林青，朱春阳，李河霖，
申请(专利权)人：郑州轻工业学院，
类型：发明
国别省市：河南,41