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一种快速筛选高效表达抗菌肽酵母工程菌的新方法技术

技术编号:3828399 阅读:289 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提出了一种快速筛选高效表达抗菌肽酵母工程菌的新方法,其方法为:1.构建抗菌肽基因和伴侣蛋白基因进行融合的质粒,2.酶切使质粒线性化,3.电穿孔转化到毕赤酵母感受态菌体,利用营养缺陷筛选,28℃培养36-48小时,4.直接从初筛平板上获得水解圈大的转化子,也就是初步获得表达抗菌肽高的酵母工程菌。然后经过复筛可以从大量的转化子中获得高效表达抗菌肽的工程菌。本发明专利技术实验过程简单,易操作。可把整个筛选过程缩短5-6天。大大减少人力、物力和财力的支出。本发明专利技术适合于不易于或者不能采用功能法进行筛选的抗菌肽、酶、抗体、多肽等蛋白质在酵母中表达的工程菌。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种快速筛选高效表达抗菌肽酵母工程菌的新方法,其特征步骤为: 1).质粒的构建,将抗菌肽基因和伴侣蛋白基因进行融合,中间添加一个酵母自生可识别切割位点,将融合基因克隆至酵母分泌表达载体pHBM905多克隆位点,构建的表达载体为pHBM30 6, 2).酶切使质粒线性化, 3).电穿孔转化,利用营养缺陷筛选,28℃培养36-48小时, 4).根据酶水解圈的大小,初步筛选水解圈大的菌落。也就是此次产生抗菌肽产量高的菌落, 5).将每批筛选到的可能高产菌株集中进行复筛,获得 水解圈最大的菌落,最后经过验证获得抗菌肽表达高产工程菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:马向东胡凡
申请(专利权)人:湖北大学
类型:发明
国别省市:83[]

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