一种外泌体miRNA的内参集及多内参联合标准定量法制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体miRNA标准化的多内参联合定量的方法及其用途，具体包括以下步骤：(1)高通量miRNA测序数据的标准化处理；(2)利用变异系数和标准差筛选内参miRNAs；(3)数字PCR的测序引物设计；(4)miRNA的数字PCR检测；(5)多内参联合标准的R_score值计算。通过对大量取自健康的体检样本和不同程度疾病患者的样本进行研究，发现miR‑128‑3p,miR‑129‑5p,miR‑320a和Let‑7i‑5p或其组合能够作为血浆外泌体microRNA标准化的内参，具有极高的稳定性和准确度。本发明专利技术基于数字PCR方法，为生物体内外泌体miRNA的研究提供了一种有效且便捷的定量标准化检测，弥补目前外泌体中没有标准内参U6 snRNA的缺陷，对于全面深入外泌体microRNA的生物标志物筛选具有的重要意义。

A Standard Quantitative Method of Multiple Internal References and Internal References for Exocrine MicroRNAs

The invention discloses a method for standardized multi-internal parameters combined quantification of exosome microRNAs and its application, which includes the following steps: (1) standardized processing of high-throughput microRNAs sequencing data; (2) screening internal parameters microRNAs by using coefficient of variation and standard deviation; (3) design of sequencing primers for digital PCR; (4) detection of microRNAs by digital PCR; (5) calculation of R_score value of multi-internal parameters combined standard. A large number of samples from healthy physical examination and patients with various degrees of disease were studied. It was found that microRNA 128_3p, microRNA 129_5p, microRNA 320A and Let_7i 5p or their combinations could be used as internal parameters for the standardization of microRNA in plasma exosomes with high stability and accuracy. Based on the digital PCR method, the invention provides an effective and convenient quantitative standardized detection for the study of microRNA in the exosome and in the exosome, makes up for the defect that there is no standard internal reference U6 snRNA in the exosome at present, and has important significance for thorough screening of the biomarkers of microRNA in the exosome.

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体miRNA的内参集及多内参联合标准定量法
本专利技术涉及生物信息技术、生物检测技术和分子生物学领域，具体涉及一种外泌体miRNA的内参集及多内参联合标准定量法。
技术介绍
二代测序技术的核心思想是边合成边测序，在生物学研究中有着广泛的应用，以能够一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。目前的smallRNA测序就是基于二代测序手段对所建库的所有smallRNA进行测序的手段，包含的smallRNA主要有：miRNA，ncRNA，siRNA，snoRNA，piRNA等。建库之后，利用胶回收或者磁珠回收方式进行产物片段大小筛选，可以进一步将测序目标集中在miRNA数据上。利用二代测序工具进行质检、比对、提取可以对miRNA进行差异表达分析，获取所有样本的完整miRNA表达谱。该处理结果可以为后期的内参miRNA筛选提供数据依据。外泌体(exosome)是一种特殊大小的由活细胞分泌的多泡体(multivesicularbody,MVB)，目前比较公认的说法是30-100nm的一种纳米级脂质双分子囊泡。其内部含有多种活性分子，如DNA、RNA和蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微小核糖核酸(microRNA)或其对应的核酸序列或互补序列的用途，其中所述的microRNA选自下组：miR‑128‑3p,miR‑129‑5p,miR‑320a和Let‑7i‑5p，或其组合，其特征在于，它们用作血浆外泌体microRNAs标准化的内参。

【技术特征摘要】
1.一种微小核糖核酸(microRNA)或其对应的核酸序列或互补序列的用途，其中所述的microRNA选自下组：miR-128-3p,miR-129-5p,miR-320a和Let-7i-5p，或其组合，其特征在于，它们用作血浆外泌体microRNAs标准化的内参。2.一种用于microRNA标准化的内参集，其特征在于，所述内参集包括选自下组2种、3种或4种microRNA所构成的组合：miR-128-3p,miR-129-5p,miR-320a和Let-7i-5p。3.如权利要求2所述的内参集，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆燕，郑梦月，刘鹏渊，吕卫国，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属妇产科医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33