一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法技术

本发明专利技术公布了一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法。其方法为：一、以粉末状培养料基质为原料制备金针菇固体菌种作为接种物；二、将制备的菌种捣碎为粉末状菌种，接入装有液体培养基的种子罐。本发明专利技术利用粉末状固体菌种作为金针菇液体菌种生产的接种物，其制备方法简单、方便且可长时间使用；种子罐培养采用特别的搅拌方式，即接入粉末状菌种后首先采用高搅拌转速，以高效分散固体菌种，增加生长点，随后停止搅拌可省电力消耗，培养后期则短时高速搅拌以充分打碎菌丝，大量增加菌丝生长点，最后培养6 h以恢复活性；使用前调种子液pH至8‑9，有利于接种后抑制杂菌生长。采用本发明专利技术方法制备金针菇液体菌种具有极大的应用前景。

A Method for Preparing Flammulina velutipes Liquid Strain Containing High Number of Mycelial Growth Points

The invention discloses a preparation method of a liquid strain of Flammulina velutipes containing a high number of mycelial growth points. The methods are as follows: firstly, solid strains of Flammulina velutipes were prepared with powder medium as raw material as inoculant; secondly, the prepared strains were mashed into powder strains and inserted into seed pots with liquid medium. The invention uses powder solid bacteria as inoculum for liquid bacteria production of Flammulina velutipes, and its preparation method is simple, convenient and long-term use; seed tank culture adopts special stirring method, that is, after joining powder bacteria, high stirring speed is first used to disperse solid bacteria efficiently, increase growth point, and then stop stirring can save power consumption, while short-term cultivation is later. High speed agitation can fully destroy mycelia, increase mycelia growth point, and finally cultivate 6 h to restore activity. The use of pH seed liquid before 8 to 9 is beneficial to inhibit the growth of heterozygous bacteria after inoculation. The method of preparing the liquid strain of Flammulina velutipes has great application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法
本专利技术属于食用菌及生物工程应用领域，涉及一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法。
技术介绍
金针菇（Flammulinavelutipes）又称为冬菇、构菌等，是一种世界上著名的食用菌，在我国、日本以及韩国等国家广泛栽培。金针菇味道鲜美，营养丰富，是一种高蛋白，低热量，高多糖含量的天然食品。金针菇含有18种氨基酸，其中精氨酸、赖氨酸的含量高于常见食用菌，因此，金针菇对青少年的生长发育有很好的促进作用，有“增智菇”之称。此外，金针菇还具较高的药用价值，如降低胆固醇、促进胃肠蠕动、抗肿瘤、增强免疫力等生理活性，因此，金针菇是一种具有极高经济价值的食用菌种类，发展潜力巨大。目前，我国是世界上金针菇生产量和出口量最多的国家。金针菇是最早采用工厂化技术栽培的食用菌，生产量大。目前，金针菇栽培主要采用木屑种接种，但木屑种具有制备周期长、占用空间大、劳动力消耗多以及不易于自动化接种等缺点。因此，采用其他新型菌种用于栽培是今后的必然选择，以提高生产效率。与木屑种相比，食用菌液体菌种具有生产周期短、接种方便、吃料快、可自动化生产、劳动强度低等优点，因此，食用菌液体菌种开始用于食用菌栽培。近年来，随食用菌液体菌种生产技术的成熟以及栽培设施更新与改善，液体菌种开始广泛用于金针菇工厂化栽培，取得了显著成效，采用液体菌种栽培金针菇是今后的必然趋势。金针菇液体菌种制备主要包括以下3个步骤：一、斜面母种的活化；二、摇瓶培养，将活化菌种接种至三角摇瓶液体培养，通常约4-7d，作为一级液体种，视需要可再进一步摇瓶扩大培养，随后用于种子罐接种；三、种子罐扩大培养。种子罐培养后可直接用于生产栽培。从经济性及污染风险看，上述液体菌种的制备过程相当繁琐，周期通常需要10天以上，此外，制备及培养过程极易发生污染。另外一方面，金针菇液体培养时主要形成菌丝聚集体和菌丝球，传统的种子罐培养主要采用低转速搅拌方式进行培养，培养结束时液体菌种主要以菌丝球的形式存在，因此，该液体菌种接入栽培料时菌丝生长点极少，通常需加大接种量，且接种不方便和不利于分散至培养料中，因此，开发新的或采用改进的金针菇液体菌种制备方法具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法。一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，包括以下步骤：（1）以粉末状培养料基质制备金针菇固体菌种：（2）液体培养：将步骤（1）制备得到的金针菇固体菌种无菌条件下用无菌玻璃棒将固体菌种捣碎，成为粉末状固体菌种，立即或4℃保藏1个月后，接种至种子罐中进行培养。步骤（1）所述制备金针菇固体菌种的方法如下：培养料配制:将培养料中各组分混合均匀，调含水量至50-60%后，称取150-200g湿料装于500mL三角瓶中，胶塞封口；灭菌：将三角瓶中的培养料在灭菌锅中121℃中灭菌2h；接种和培养：培养料冷却后无菌条件下接入活化好的金针菇斜面菌种至培养料表面，25℃、在相对湿度60-70%的暗环境下培养，菌丝吃料完全后即可；培养料组成成分包括：过20目筛后的木屑粉80-90份、豆粉8-18份、豆油2份。步骤（2）所述种子罐培养的方法为：（1）种子罐消毒：采用100L种子罐，121℃空消30min；装入70L液体培养基，121℃实消30min；（2）种子罐接种：培养基冷却后接入200g捣碎后的粉末状固体菌种；（3）培养条件为温度25℃，通气量0.5-1vvm；（4）搅拌及培养方法：第1天300-400rev/min，以分散接入的粉末状固体菌种，随后2-4天只通气不搅拌，节省电力消耗，第5天时设置转速为300-400rev/min，6h，利用强剪切力分散及打碎菌丝球及菌丝体，增加菌丝生长点；随后停止搅拌，继续培养6h使菌丝恢复活力，使用前用灭过菌的1moL/LNaOH调培养液pH至8-9，即制备得到含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种。进一步地，将含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法应用于金针菇栽培中。该应用包括以下步骤：利用接种枪在无菌接种间将液体菌种接入栽培包，每包装料量湿重1000克，每包接入20mL液体种；接种后的栽培包转移至培养房，25℃暗培养，菌包吃料完全后，转入出菇房，经低温、光照、高湿度剌激诱导子实体形成。本专利技术的优点在于：1）采用粉末状培养料基质制备固体菌种，好于在于有利于增加固体菌种的菌丝生长点；2）培养料中加入豆油有利于促进菌丝生长，提高固体菌种质量，3）固体种子制备流程少，有利于避免污染发生；4）固体菌种无菌条件易控制，其用于液体种制备的接种物时可有效提高液体菌种制备成功率和消除隐性污染；5）固体菌种可长时间保藏，可随时用于液体菌种生产，提高制种效率；6）种子罐培养时采用特别搅拌策略，即接种后高速搅拌以分散固体菌种，增加菌丝生长点；随后停止搅拌，可减少电力消耗；培养结束前，高速搅拌6h，以分散菌丝球和菌丝体，增加菌丝生长点，随后的6h不搅拌，以恢复菌丝活力，获得高活性液体菌种，有利于菌丝吃料；7）液体菌种使用前用无菌的1mol/L的NaOH溶液调pH至8-9，接种后有利于抑制杂菌生长，减少污染发生；8）利用接种枪在无菌接种间将本专利技术制备得到的液体菌种接入栽培包，每包接入的液体种量仅为传统液体菌种用量的1/2；接种后的栽培包菌丝走菌同步性好。具体实施方式本专利技术公布了一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，下面实施例来进一步描述本专利技术的使用方法，但这些实施例仅是规范性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。此外，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换仍在本专利技术保护范围。实施例11.制备粉末状金针菇固体菌种：将木屑粉碎，过20目筛；2.木屑粉80份、豆粉18份和豆油2份，混合，调节含水量至50%，将湿料200g装于500mL三角瓶，稍微压实，胶塞封口；3.培养料121℃灭菌2h，确保灭菌彻底；4.冷却后无菌条件下接入从金针菇斜面母种中切取的约2cm长、1cm宽的1块琼脂块菌种至培养料表面，25℃、相对湿度60-70%的暗环境中培养，菌丝吃料完全后即可作为种子罐生产液体菌种时的接种物；5．种子罐消毒：使用100L种子罐，121℃空消30min；加入70L液体培养基（配方为：葡萄糖20g/L,玉米粉5g/L,豆油2g/L，磷酸二氢钾1.0g/L,硫酸镁0.5g/L），121℃实消30min；6.种子罐的接种：培养基冷却后接入200克捣碎后的粉末状固体菌种；7．培养条件，温度25℃，通气量为1vvm，搅拌方法为：第1天300rev/min（以分散接入的固体菌种），随后的2-4天不搅拌（利用通气使培养物搅动），可节省电力消耗，第5天起转速设置为300rev/min（利用强剪切力分散及剪碎菌丝球及菌丝体，6h，以显著增加菌丝生长点，随后的6h停止搅拌，使菌丝恢复活力，与破碎前的活性相近，处于高活性状态；8.菌种使用前用灭过菌的NaOH调pH至约8-9，有利于接种后抑制杂菌生长，减少污染发生；9.液体菌种使用；利用接种枪在无菌接种间将液体菌种接入栽培包（装料量湿重约1000克），每1包接入约20mL液体菌种，与栽培包接入传统方法制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）以粉末状培养料基质制备金针菇固体菌种：（2）液体培养：将步骤（1）制备得到的金针菇固体菌种无菌条件下用无菌玻璃棒将固体菌种捣碎，成为粉末状固体菌种，立即或4℃保藏1个月后，接种至种子罐中进行培养。

【技术特征摘要】
1.一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）以粉末状培养料基质制备金针菇固体菌种：（2）液体培养：将步骤（1）制备得到的金针菇固体菌种无菌条件下用无菌玻璃棒将固体菌种捣碎，成为粉末状固体菌种，立即或4℃保藏1个月后，接种至种子罐中进行培养。2.根据权利要求1所述一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，其特征在于，步骤（1）所述制备金针菇固体菌种的方法如下：培养料配制:将培养料中各组分混合均匀，调含水量至50-60%后，称取150-200g湿料装于500mL三角瓶中，胶塞封口；灭菌：将三角瓶中的培养料在灭菌锅中121℃中灭菌2h；接种和培养：培养料冷却后无菌条件下接入活化好的金针菇斜面菌种至培养料表面，25℃、在相对湿度60-70%的暗环境下培养，菌丝吃料完全后即可。3.根据权利要求2所述一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，其特征在于，培养料组成成分包括：过20目筛后的木屑粉80-90份、豆粉8-18份、豆油2份。4.根据权利要求1所述一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法，其特征在于，步骤（2）所述种...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘盛荣，张维瑞，郑世仲，阮俊峰，
申请(专利权)人：宁德师范学院，
类型：发明
国别省市：福建,35