The invention relates to the technical field of biological fermentation, in particular to a method for improving the production of vitamin B12 by Pseudomonas denitrificans. A method for improving the production of vitamin B12 by Pseudomonas denitrificans is provided. Vitamin B12 producing strains are cultured under the optimal fermentation conditions through a large number of experiments on optimized mother bottle culture medium, shaking flask culture medium and supplementary culture medium. Temperature is controlled at a relatively low level within 0 39 h in the early stage of fermentation process, i.e. 26 30 C, so as to control the suitable growth of strains. In the later stage of fermentation, the temperature of fermentation system should be raised and maintained at a relatively high level, that is, 30 34 C, to promote the growth of bacteria and the start-up and accumulation of vitamin B12 synthesis. After fermentation, the fermentation unit of vitamin B12 reaches 198mg/L, which not only improves the production and efficiency of vitamin B12, but also saves energy consumption and energy consumption. Cost reduction.
【技术实现步骤摘要】
一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法
本专利技术涉及生物发酵
,尤其是一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法。
技术介绍
维生素B12(VitaminB12)又称钴胺素,是一类含有钴的咕啉类化合物总称,最早作为“抗恶性贫血因子”于1926年被发现。维生素B12是一种重要的生物活性物质,同时也是许多微生物和动物的生长因子,广泛应用于医药、食品和畜牧业。由于维生素B12的分子结构极为复杂,其全化学合成需要多达70余个的反应步骤,且成本昂贵,故目前几乎都是通过微生物发酵的方式来生产维生素B12。自然界中,维生素B12的生物合成存在两种不同的途径,即好氧途径和厌氧途径,但是VB12的生物合成严格局限于一些微生物中,目前成功应用于工业化发酵的生产菌株主要有费氏丙酸杆菌(Propiomibacteriumfreudenreichii)、谢氏丙酸杆菌(Propiomibacteriumshermanii)和脱氮假单胞杆菌(Pseudomonasdenitrificans)。其中,因脱氮假单胞杆菌好氧合成维生素B12的途径清晰明了且维生素B12产率高,因而,目前工业生产几乎都是使用脱氮假单胞杆菌来作为生产维生素B12的工业菌株。脱氮假单胞杆菌好氧发酵生产维生素B12的过程控制条件比较严格,一旦控制不好就会导致菌体发虚早衰进而影响维生素B12的产量。因此,发酵过程中维持脱氮假单胞杆菌的菌体形态至关重要。除了发酵培养基、pH和转速等能够影响菌体形态之外,温度也是影响菌种菌形的关键因素。对同一微生物来说,不同的生理生化过程有着不同的最适温度,也就是说,菌体生长量 ...
【技术保护点】
1.一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法,其特征在于:包括如下步骤:S1、母瓶培养过程控制:将活化的脱氮假单胞杆菌二代斜面刮取适量菌体接种于母瓶培养基中,温度控制在27 ‑ 29℃,湿度控制在30 ‑ 60%,培养时间为18 ‑ 24h小时;S2、摇瓶培养过程控制:将符合标准的脱氮假单胞杆菌母瓶培养基在无菌条件下接入摇瓶培养基,接种量为10%,发酵前期(0‑39h)摇床温度控制在26‑30℃;发酵中后期(39‑170h)摇床温度控制在30‑34℃,湿度控制在30 ‑ 60%;培养时间为170h;S3、补料控制:步骤S2的发酵过程中,分别于第3d、4d、5d时检测总糖含量,当总糖含量低于5%进行补料,维持发酵液总糖含量控制在5‑7%,至发酵结束,从发酵液中分离纯化出维生素B12。
【技术特征摘要】
1.一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法,其特征在于:包括如下步骤:S1、母瓶培养过程控制:将活化的脱氮假单胞杆菌二代斜面刮取适量菌体接种于母瓶培养基中,温度控制在27-29℃,湿度控制在30-60%,培养时间为18-24h小时;S2、摇瓶培养过程控制:将符合标准的脱氮假单胞杆菌母瓶培养基在无菌条件下接入摇瓶培养基,接种量为10%,发酵前期(0-39h)摇床温度控制在26-30℃;发酵中后期(39-170h)摇床温度控制在30-34℃,湿度控制在30-60%;培养时间为170h;S3、补料控制:步骤S2的发酵过程中,分别于第3d、4d、5d时检测总糖含量,当总糖含量低于5%进行补料,维持发酵液总糖含量控制在5-7%,至发酵结束,从发酵液中分离纯化出维生素B12。2.如权利要求1所述的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法,其特征在于:所述步骤S1中母瓶培养基的配制步骤包括:分别称取甜菜糖蜜(50%)110g、磷酸氢二钾0.60g,硫酸铵0.81g、硫酸镁1.65g、硫酸锰0.15g、硫酸锌0.02g、氯化钴0.02g、前体0.012g,溶解并定容至1000mL,用20%NaOH溶液调节pH,消前6.80-7.40,每个300mL三角瓶分装60mL,包...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘瑞艳,马杰希,刘伟,张彩霞,寇凤雨,
申请(专利权)人:山东泓达生物科技有限公司,山东昆达生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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