The invention belongs to the field of biomedicine, in particular to a method for constructing a humanized cagA eukaryotic expression vector of Helicobacter pylori. The construction method comprises a codon optimization step in which the humanized cagA gene is synthesized. The nucleotide sequence of the humanized cagA gene is shown as SEQ ID NO:1 in the sequence table. The human cagA eukaryotic expression vector of Helicobacter pylori constructed by this method can express cagA protein in large quantities in gastric cancer cells, thus creating conditions for studying the carcinogenic mechanism of cagA gene-encoded protein. This technical scheme can be applied in the practice of pathogenesis research of Helicobacter pylori.
【技术实现步骤摘要】
人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是一种螺旋状的革兰式阴性微需氧菌，感染全球一半的人口，是引起胃炎、消化性溃疡、胃癌的主要病因。在感染人群中，大多数人引起无症状性胃炎，大约有20—25％发展为慢性胃炎，10％发展为消化性溃疡，有1-3％发展为胃癌。胃癌的发生是多因素综合作用的结果，主要包括幽门螺旋杆菌感染、宿主遗传因素及环境因素。其中幽门螺旋杆菌感染是胃癌最重要的始发因素，已被世界卫生组织列为人类胃癌的Ⅰ类致癌因子。细胞毒素相关基因A(cytotoxinassociatedgeneA,cagA)编码的蛋白，是目前所知的唯一被幽门螺旋杆菌注入胃上皮细胞并能模拟细胞内蛋白发挥作用的“癌蛋白”，cagA基因编码的蛋白在细胞内被磷酸化后激活多种信号通路，参与胃癌的发生发展，但其致癌机制尚不完全清楚。为研究进一步研究cagA基因对胃癌发生相关信号通路的影响，本专利技术人PCR扩增出幽门螺旋杆菌cag...
【技术保护点】
1.人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，包括：(1)密码子优化步骤：合成核苷酸序列为SEQ ID NO:1的人源化cagA基因；(2)人源化cagA真核表达载体构建步骤。
【技术特征摘要】
1.人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，包括：(1)密码子优化步骤：合成核苷酸序列为SEQIDNO:1的人源化cagA基因；(2)人源化cagA真核表达载体构建步骤。2.根据权利要求1所述的人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，在所述人源化cagA基因的模板链的5’端设有NheⅠ限制性内切酶识别序列，在所述人源化cagA基因的模板链的3’端设有XbaⅠ限制性内切酶识别序列。3.根据权利要求2所述的人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，在所述人源化cagA基因的模板链的5’端设有Kozak序列，所述Kozak序列位于NheⅠ限制性内切酶识别序列和人源化cagA基因的起始密码子ATG之间。4.根据权利要求3所述的人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，所述Kozak序列为5’-GCCACC-3’。5.根据权利要求4所述的人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法，其特征在于，在所述密码子优化步骤中，通过聚合酶链式反应合成所述人源化cagA基因。6.根...
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