The invention discloses the expression and purification of Citrus allergen Cit s 1.01 antigen, the preparation and application of polyclonal antibodies, and specifically discloses a codon-optimized Rutaceae plant allergen Cits 1.01 gene, which is characterized by the sequence shown in SEQ ID NO:2. By optimizing the prokaryotic expression sequence of Cit s 1.01 gene and gene synthesis, the prokaryotic expression system of allergen Cit s 1.01 is constructed. Rabbit polyclonal antibody Anti Cit s 1.01 is prepared by using the expressed and purified rCit s 1.01 protein. The content of allergen Cit s 1.01 in citrus peel and pulp is detected, and the Western blot can be measured by light density value. Methods Potential allergenicity of some edible allergens such as Citrus fruits Cit s 1.01 was evaluated.
【技术实现步骤摘要】
柑橘过敏原Cits1.01抗原表达纯化、多克隆抗体制备及应用
本专利技术属于植物分子生物学、免疫学和食品安全检测技术交叉领域，更具体地，涉及一种柑橘过敏原Cits1.01抗原表达纯化、多克隆抗体制备及应用，获得柑橘属过敏原Cits1.01抗原表达、蛋白纯化、多克隆抗体制备方法及它们的应用，即过敏原Cits1.01基因原核表达载体构建、重组表达、蛋白纯化、质谱鉴定和多克隆抗体制备，以及它们在芸香科植物(尤其是柑橘属植物)中过敏原Cits1.01蛋白含量检测的应用。
技术介绍
据不完全统计，我国对食物过敏的人群约4000～5000万人左右。食物过敏的症状一般是局部的口腔病理症状，除此之外，还有一些其他症状，例如肠胃症状(恶心、呕吐、腹泻、肠胃绞痛等)，皮肤症状(麻疹、皮炎、湿疹、血管神经性水肿、皮肤瘙痒等)，呼吸系统症状(鼻炎、哮喘、喉咙肿等)和心血管系统症状(过敏性休克等)[1]。对于患者而言，最好的医治方案是设法剔除饮食中的食物过敏原，或者完全避免会引起的食物过敏的种类，但在实际操作中存在很多困难，故而鉴定和选择一些不含过敏原或低致敏的食物给过敏患者是一种比较好的...
【技术保护点】
1.一种密码子优化的芸香科植物过敏原Cit s 1.01基因，其特征在于，包括SEQ ID NO:2所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种密码子优化的芸香科植物过敏原Cits1.01基因，其特征在于，包括SEQIDNO:2所示的序列。2.一种用于构建Cits1.01基因原核表达载体的引物，其特征在于，包括正向引物和反向引物，其中，所述正向引物包括SEQIDNO:3所示的序列或SEQIDNO:5所示的序列；所述反向引物包括SEQIDNO:4所示的序列或SEQIDNO:6所示的序列。3.一种rCits1.01重组蛋白，其特征在于，该蛋白为：i.由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或ii.与SEQIDNo.1所限定的氨基酸序列同源性在80％至100％编码相同功能蛋白质的氨基酸序列组成的蛋白质；或iii.SEQIDNo.1所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸具有同等活性的衍生蛋白。4.一种诱导表达rCits1.01重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：将重组菌在对数生长期时加入终浓度为0.01～1mmol/LIPTG，在12～37℃诱导4～24h后，即诱导生成rCits1.01重组蛋白；优选的，是将重组菌在对数生长期时加入终浓度为0.1mmol/LIPTG，在20℃诱导16h后，即诱导生成rCits1.01重组蛋白；其中，所述重组菌为转入Cits1.01基因原核表达载体的大肠杆菌；所述Cits1.01基因原核表达载体具体是以如权利要求1所述密码子优化的芸香科植物过敏原Cits1.01基因为模板，并利用如权利要求2所述用于构建Cits1.01基因原核表达载体的引物经PCR反应构建得到的。5.如权利要求4所述诱导表达rCits1.01重组蛋白的方法，其特征在于，生成的所述rCits1.01重组蛋白还经过纯化处理，所述纯化处理具体是先收集诱导后的重组菌，然后对这些重组菌进行PBS洗涤、离心、重悬于冰预冷的裂解缓冲液、以及超声破菌处理，然后离心收集上清，接着用滤膜过滤该上清，得到的滤液经GST亲和柱纯化洗脱处理后收集洗脱液即得到rCits1.01重组蛋白。6.一种鉴定rCits1.01重组蛋白的方法，该方法是将待鉴定蛋白与Cits1.01蛋白经MALDI-TOF/TOF质谱鉴定，若从所述待鉴定蛋白上鉴定出能够匹配Cits1.01蛋白的有效特异性肽段，则该待鉴定蛋白属于rCits1.01重组蛋白；否则，该待鉴定蛋白不属于rCits1.01重组蛋白；其中，所述Cits1.01蛋白具有如SEQIDNO:1所示的序列。7.一种制备Anti-Cits1.01兔多克隆抗体的方法，其特征在于，该方法是将纯化后的rCits1.01重组蛋白乳化后在兔背部皮下注射，进行多次免疫；然后，收集并分离含有Anti-Cits1.01兔多克隆抗体的...
【专利技术属性】
技术研发人员：马兆成，邓秀新，吴金龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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