The present invention relates to a protein fluorescence analysis method based on target excitation of DNA cycle on gold nanoparticles surface. The detection solutions of this method include Au DNA 1, DNA 2/DNA 3, DNA 4 and Nt. BbvCI, which are gold nanoparticles modified with hairpin DNA 1. DNA 1 was labeled with fluorescent dyes, whose fluorescence was quenched by gold nanoparticles. When the target protein exists, it can be recognized by sandwich probes. Based on the neighborhood effect, DNA 4 replaces DNA 2 and DNA 3, releases DNA 2 and Au DNA 1, activates the digestion site, triggers Nt.BbvCI to digest DNA 1, and makes the fluorescent dyes recover fluorescence far away from the surface of gold nanoparticles. This digestion reaction can be carried out on the surface of gold nanoparticles, thus amplifying the fluorescence signal and realizing it. Sensitive quantitative analysis of target proteins. The method is simple, sensitive and universal, and has certain clinical application value.
【技术实现步骤摘要】
基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法一、
本专利技术为一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法,用于对蛋白质分子的简单、灵敏检测。通过蛋白-适配体识别模式,利用夹心识别反应产生邻位效应,诱导核酸杂交、链取代、金纳米粒子表面DNA酶切循环放大,使得大量荧光染料释放,放大荧光信号,实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。二、
技术介绍
细胞分泌物的表达异常与包括恶性肿瘤在内的多种疾病相关,因此具有重要的分析检测意义。常规细胞分泌物检测方法主要包括基于抗原抗体识别的免疫分析和基于蛋白-适配体识别的分析方法。免疫分析方法主要为酶联免疫法(ELISA),该方法虽具有较高的检测灵敏度,但其存在操作复杂、耗时长、成本高等缺点。不同于蛋白抗体,适配体是一条能特异性识别目标蛋白的短链核酸序列,因其具有稳定性强、易合成和功能化、成本低廉、操作简单、循环方式多样等优点,已被广泛用于蛋白质的检测。然而目前基于蛋白-适配体识别所建立的细胞分泌物(例如PDGF-BB)的检测方法,主要依赖适配体与目标蛋白识别后其结构的改变直接产生信号进行检测。这些方法由于缺乏可靠的信号放大步骤,检测灵敏度不高。因此,迫切需要发展简单、快速、灵敏的细胞分泌物检测方法。邻位诱导效应通过夹心识别反应使一对含有DNA的亲和探针(如抗体-DNA复合物,DNA-适配体序列)与靶标蛋白结合形成邻位复合物,使得亲和探针上的DNA产生邻位杂交,进而触发级联DNA循环反应,产生检测信号。该策略将对蛋白质的检测转化为对DNA的检测,由于DNA放大技术成熟并多样,通过与各种DNA信号放大技术偶联 ...
【技术保护点】
1.本专利技术涉及一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法,其特征在于该分析方法以含有修饰发卡DNA1的金纳米粒子Au‑DNA1、双链DNA识别探针DNA2/DNA3、单链DNA识别探针DNA4和核酸外切酶Nt.BbvCI的溶液为检测溶液,当靶标蛋白存在时,通过蛋白‑适配体识别方式,被DNA2/DNA3和DNA4夹心识别,基于邻位效应,DNA4取代DNA2与DNA3杂交,释放的DNA2与Au‑DNA1杂交,激活酶切位点,引发Nt.BbvCI对DNA1的酶切,使得标记在DNA1上的荧光染料远离金纳米粒子表面恢复荧光,同时,DNA2被再次释放并引发第二轮酶切,如此循环,放大荧光信号,实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。
【技术特征摘要】
1.本发明涉及一种基于靶标激发金纳米粒子表面DNA循环的蛋白质荧光分析方法,其特征在于该分析方法以含有修饰发卡DNA1的金纳米粒子Au-DNA1、双链DNA识别探针DNA2/DNA3、单链DNA识别探针DNA4和核酸外切酶Nt.BbvCI的溶液为检测溶液,当靶标蛋白存在时,通过蛋白-适配体识别方式,被DNA2/DNA3和DNA4夹心识别,基于邻位效应,DNA4取代DNA2与DNA3杂交,释放的DNA2与Au-DNA1杂交,激活酶切位点,引发Nt.BbvCI对DNA1的酶切,使得标记在DNA1上的荧光染料远离金纳米粒子表面恢复荧光,同时,DNA2被再次释放并引发第二轮酶切,如此循环,放大荧光信号,实现对靶标蛋白的灵敏定量分析。2.根据权利要求1所述的分析方法,其特征在于所述的DNA1上标...
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