一种真菌菌丝精粉的制备方法技术

本发明专利技术提供一种真菌菌丝精粉的制备方法，解决了由液体培养获得的菌丝体的处理及保存问题。该方法是按照以下步骤进行的：1)通过液体扩大培养获得菌丝体；2)将液体菌丝体进行抽滤处理，制得菌饼；3)将菌饼置于真空干燥设备或微波设备干燥处理；4)菌饼干燥后，粉碎、过筛、保存。通过此种方法制得的真菌菌丝精粉，色泽明亮，无异味，且操作方法简单易行，生产成本低。

A Method for Preparing Fungal Mycelial Concentrate Powder

The invention provides a preparation method of fungal mycelium concentrate powder, which solves the problem of treatment and preservation of mycelia obtained by liquid culture. The method is carried out according to the following steps: 1) obtaining mycelium by liquid enlargement culture; 2) extracting and filtering liquid mycelium to produce fungus cake; 3) putting the fungus cake in vacuum drying equipment or microwave drying equipment; 4) crushing, sieving and preserving the fungus cake after drying. The fungal mycelial powder prepared by this method has bright color, no odor, simple operation method and low production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种真菌菌丝精粉的制备方法
本专利技术涉及一种真菌菌丝精粉的制备方法。
技术介绍
将真菌的菌丝体制成菌丝精粉，是增加其保存时间的一种有效方法。这其中，对于真菌的扩大培养是基础环节，菌丝体与培养体系的分离、干燥是最终的产出环节，且该环节设计与培养体系密切相关。常规的液体培养方法，大多是直接将真菌菌核接种于液体培养基中，虽然在接种前会用1％的次氯酸钠溶液进行消毒灭菌。但如果次氯酸钠浓度太低会造成灭菌消毒不彻底，容易污染的情况，浓度太大会又会使真菌子实体降低活性甚至失去生物活性。因此，常规的液体培养方法虽然真菌的生长速度优于固体培养方法，但由于不够稳定，某些菌种的培养在实际产业中的应用尚不理想。对于菌丝体与发酵液的分离，目前实验室的做法有以下几种：离心法、过滤法、抽滤法，通过在实验室中对几种方法进行对比实验，得到了以下结果：离心法虽然能够达到固液分离，但此时的菌丝体仍含有大量液体，会增加真空干燥的时间；过滤法是使用纱布对菌丝发酵液进行分离，也能达到固液分离的目的，但由于发酵液本身较为粘稠，会耗费较多时间，而且也会增加烘干时间；抽滤法是利用真空真空泵所产生的压强对菌丝发酵液进行分离，具有分离速度快菌丝体含水量少的特点，是较为理想的方法。
技术实现思路
本专利技术提出一种真菌菌丝精粉的制备方法，以满足对该真菌进行进一步深入研究所需原料的使用需求。该真菌菌丝精粉的制备方法，包括以下步骤：1)通过液体培养方法获得菌丝体；其中用于接种菌丝母液的液体培养基的配方为：玉米糁35-45g/L，蛋白胨6-10g/L，葡萄糖10-20g/L，磷酸二氢钾2-4g/L；2)将液体菌丝体进行抽滤处理，制得菌饼；3)将菌饼置于真空干燥设备或微波干燥设备中干燥，温度控制在45℃至50℃之间；4)菌饼烘干后，粉碎，过筛，装袋保存。进一步的，步骤1)具体包括以下步骤：1.1)将菌核接种在斜面培养基上活化，长出菌丝；1.2)无菌条件下，将已活化的菌核菌丝接种在PDA液体培养基上，培养3-4天，即得菌丝母液；1.3)将菌丝母液接种在液体培养基上，摇床培养7天，即得菌丝体。进一步的，上述液体培养基的最佳配方为：玉米糁35g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖15g/L，磷酸二氢钾3g/L。进一步的，步骤1.3)中，菌丝母液的接种量为5％；所述摇床培养在有氧的条件下进行，温度为24℃，转速为160r/min，pH值为培养基原始值5.5。进一步的，步骤1.1)中，活化菌种时的培养温度为24-27℃。进一步的，步骤2)中，所述抽滤处理具体是：用真空泵连接布氏漏斗，对菌丝体进行抽滤，得到菌饼。进一步的，步骤4)中，具体是将烘干的菌饼粉碎，过40目筛，装袋密封保存。本专利技术的制备方法尤其适用于申请人发现的一种新菌种Fibularhizoctoniasp.。该新菌种在白蚁巢穴中采集得到，经过形态学和分子生物学鉴定为属于担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、阿太菌目(Atheliales)、阿太菌科(Atheliaceae)的Fibularhizoctoniasp.真菌，通过对真菌菌核部分进行组织培养，分离得到原始菌株。经分子生物学测定其ITS分子序列，通过比对我们发现，数据库中编号为DQ276871Fibulorhizoctoniasp.的ITS区段序列与新型真菌菌核的相应序列最相似，相似值达595/597(99％)。所以证实了新型真菌为Fibulorhizoctonia属。其具有以下形态特征：菌落直径68-70mm，白色至浅褐色，中部致密，毡状，边缘疏松，具明显同心轮纹及放射状皱褶，表面产生大量浅褐色菌核，菌落背面白色到浅褐色，无水溶性色素。营养菌丝壁光滑，薄壁，具锁状联合，多分枝，宽0.9-4.0μm，液体培养状态下不产孢。该真菌菌株的保藏编号：CCTCCM2018446，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期：2018年07月04日。本专利技术具有以下有益效果：1.菌丝精粉能长时间保存。本专利技术采用将液体培养液进行抽滤，获得菌饼，并在45℃-50℃下真空干燥，使菌丝完全脱水，既不影响将菌丝制成菌粉，也不会对菌丝中的有效活性成分造成损失。因为处于脱水状态，精粉状态的菌丝不会发生霉变等情况，制得的菌丝精粉色泽明亮、无异味且方便携带、生产成本低、操作简便，在后续进行药理、毒理及功效实验时，菌丝精粉可作为制剂或溶液溶于水中，直接灌胃作用于小鼠，完全可以在工厂生产中实际应用，具有很好的实用性，能够产生很好的经济效益和社会效应。2.菌丝体是采用玉米糁与其他基础营养配方通过液体培养的制作而成，化学配方较少，不会对人体产生一些毒副作用，而且价格也很低廉。3.本专利技术中涉及到的菌种液体培养方法，明显缩短了生产周期且菌种在三角瓶里形态大小一致、生产成本低、接种简便。菌丝产量高，且产量可以达到19g/L。4.用到的培养基原料与抽滤烘干设备相对简单易得，具有制备成本低，易保存，成色好，无异味且营养成分高等优点。5.本专利技术具有通用性。具体实施方式下面以申请人发现的一种新菌种Fibularhizoctoniasp.为例，详细介绍该真菌菌丝精粉的制备方法：(1)菌种的活化及菌丝母液的制备将收集到的真菌菌核用1％(v/v)的NaClO溶液冲洗数次，每次浸泡2-3min，倒掉废液后，再用无菌水洗掉其表面残留液，然后接种在制备好的斜面培养基上，放在24-27℃下培养3-4天后，培养完成，挑选长势较好的菌种，放入4℃保存，备用。其中，斜面培养基可采用常规方法制备。在无菌操作台中用无菌接种针将保存的菌丝菌种接到PDA液体培养基(可不加琼脂)中，放入24-27℃摇床振荡培养3-4d，即得菌丝母液。(2)液体培养基的制备(最佳配方)称取玉米糁35g，煮沸20min使其熟而不烂，过滤，去残渣，加入葡萄糖15g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾3g，溶解于滤液中，最后将滤液定容至1000mL。在250mL三角瓶中加入100mL以上液体培养基。灭菌，121℃，保持20min。(3)接种在无菌操作台中，用无菌试管吸取5mL菌丝母液接入三角瓶中，接种后，三角瓶瓶口必须用塑封薄膜封好，以免染菌。(4)培养将接种后的三角瓶置于恒温摇床培养箱中培养。温度控制在24-27℃，转速160r/min下，培养一周左右。即可看到三角瓶中有大量的菌丝产生。(5)制备真菌菌丝菌饼将装有菌丝培养液的三角瓶从摇床培养箱中取出，倒入布氏漏斗中，利用真空泵，对菌丝培养液进行抽滤，以达到培养液与菌丝体分离的目的，待抽滤完成后，菌丝与之分离，形成圆形菌饼。(6)制备菌丝精粉将所有生长有真菌菌丝体的发酵液按上述方法制成菌饼后，置于真空干燥箱中，45℃-50℃烘干。待菌饼完全烘干后，进行粉碎，过40目筛，装袋密封保存，即为菌丝精粉。上述真菌菌丝精粉的制备方法中的液体培养环节(上述(2)-(4))，没有直接将真菌菌核接种于液体培养基中，而是在进行液体培养前进行真菌菌种的活化，并筛选得到液体培养基的最佳配方。以下简要介绍获得最优液体培养基的筛选实验：对照组1：碳源的筛选：改变液体培养基中碳源的来源，依次选用含量为2％的玉米糁、葡萄糖、淀粉、蔗糖、乳糖、糊精作为碳源来源，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真菌菌丝精粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)通过液体培养方法获得菌丝体；其中用于接种菌丝母液的液体培养基的配方为：玉米糁35‑45g/L，蛋白胨6‑10g/L，葡萄糖10‑20g/L，磷酸二氢钾2‑4g/L；2)将液体菌丝体进行抽滤处理，制得菌饼；3)将菌饼置于真空干燥设备或微波干燥设备中干燥，温度控制在45℃至50℃之间；4)菌饼烘干后，粉碎，过筛，装袋保存。

【技术特征摘要】
1.一种真菌菌丝精粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)通过液体培养方法获得菌丝体；其中用于接种菌丝母液的液体培养基的配方为：玉米糁35-45g/L，蛋白胨6-10g/L，葡萄糖10-20g/L，磷酸二氢钾2-4g/L；2)将液体菌丝体进行抽滤处理，制得菌饼；3)将菌饼置于真空干燥设备或微波干燥设备中干燥，温度控制在45℃至50℃之间；4)菌饼烘干后，粉碎，过筛，装袋保存。2.根据权利要求1所述的真菌菌丝精粉的制备方法，其特征在于，步骤1)具体包括以下步骤：1.1)将菌核接种在斜面培养基上活化，长出菌丝；1.2)无菌条件下，将已活化的菌核菌丝接种在PDA液体培养基上，培养3-4天，即得菌丝母液；1.3)将菌丝母液接种在液体培养基上，摇床培养7天，即得菌丝体。3.根据权利要求2所述的真菌菌丝精粉的制备方法，其特征在于，步骤1.3)中，所述液体培养基的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢连喜，张宏贵，赵剑，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61