测量微生物计数的方法技术

本发明专利技术提供一种简单且精确地测量样品中的微生物计数的方法。即，一种测量微生物计数的方法，包含：将用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物与添加到其中的样品进行共混的步骤，所述组合物包含(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分；培育含于样品中的微生物的步骤；以及测量微生物的菌落计数的步骤。

Method of Measuring Microbial Count

The invention provides a simple and accurate method for measuring microbial count in a sample. That is to say, a method for measuring microbial counts includes: a step for mixing the samples for measuring the microbial counts for preparing the culture medium and blending the samples added thereinto, wherein the composition comprises (a) a polymer without forming a non flowing transparent gel without heating the melting step and without cold, and (b) nutrients; and cultivating microbes contained in the samples. The steps of measuring microorganism colony count and the steps of measuring microorganism colony count.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测量微生物计数的方法
本专利技术涉及一种简单且容易地测量样品中的微生物计数的方法。
技术介绍
就饮用水、软饮料、工业水、制药用水(pharmaceuticalwater)、透析(dialysis)水等而言，要求污染等级应该最小，且众所周知，存在于其中的微生物的计数通常非常低。尤其来说，就饮用水而言，活细胞(viablecell)计数的标准是100菌落形成单位/毫升(CFU/mL)或小于100菌落形成单位/毫升，且就透析水而言，标准是10菌落形成单位/毫升或小于10菌落形成单位/毫升。在标准控制上，监测以定期评估精确的微生物计数是重要的(非专利文献1)。针对食物或类似物中微生物的检测，通常采用对1毫升的样品悬浮液或类似物进行浇灌培养(pourculture)的方法。然而，就存在于其中的微生物的计数非常低的例如饮用水的样品而言，可能并不能通过以上方法精确地测量微生物计数。举例来说，在10菌落形成单位或小于10菌落形成单位的微生物存在于100毫升中的情况下，如果只检验1毫升样品，可能不能检测到微生物，以致可能不能精确地评估污染状况。为了消除这种缺点，此前已使用薄膜过滤器法(membranefiltermethod)。即，通过薄膜过滤器来过滤液体样品的总量以在薄膜过滤器的表面上捕获样品中的微生物，且接着在琼脂培养基(agarmedium)平板上进行培育(非专利文献2)。通过所述方法可精确地测量即使存在于大量样品中的微生物的低计数。引用文件列表非专利文献NPL1：日本药典第17版，通用信息，G8水NPL2：日本临床工程师协会(JapanAssociationforClinicalEngineers)2014年3月11日2.01版"TosekiSeijou-ka指南(针对更清洁的透析的指南(GuidelineforCleanerDialysis))"。
技术实现思路
技术问题然而，对薄膜过滤器法来说，用于过滤的包含漏斗和吸引泵(suctionpump)的设备是必要的，且每次对每一零件进行杀菌是麻烦的。另外，某些技能是操作所必需的，因为如果过滤之后将薄膜过滤器放置在琼脂培养基上，薄膜过滤器与琼脂培养基表面之间形成气泡，那么会出现以下问题：一些捕获到的微生物可能不接触培养基，且不在将要检测的位置上。鉴于这类情形，本专利技术的目标是提供一种简单且精确地测量液体样品中的微生物计数(尤其是存在于大量液体样品中的微生物的低计数)的方法，而不使用特殊仪器。问题解决方案本专利技术人努力研究以实现达成通过利用液体样品本身作为构成培养基的溶剂来简化操作以及通过培育来发展菌落以使样品中的微生物可视化的目的。另外，已发现，从执行微生物计数测量进而完成本专利技术的简单操作和易于视觉识别的观点来看，聚丙烯酸和/或其盐是用于这种培养基的成分的合适的胶凝剂(gellingagent)。即，本专利技术如下。[1]一种用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物(下文称为“本专利技术的组合物”)，包括(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。[2]根据上文[1]的组合物，其中聚合物能够保留多达自身重量的10倍或大于10倍的水。[3]根据上文[1]或[2]的组合物，其中凝胶不发生水分离。[4]根据上文[1]到[3]中的任一者的组合物，其中聚合物具有作为单体单元的丙烯酸。[5]根据上文[4]的组合物，其中聚合物是聚丙烯酸和/或其盐。[6]根据上文[1]到[5]中的任一者的组合物，进一步包括(c)着色试剂。[7]一种用于测量微生物计数的试剂盒，包括根据上文[1]到[6]中的任一者的组合物，以及培养容器。[8]一种测量微生物计数的方法(下文称为“本专利技术的测量方法”)，包括：将根据上文[1]到[6]中的任一者的组合物与添加到其中的样品进行共混的步骤，培育含于样品中的微生物的步骤，以及测量微生物的菌落计数的步骤。[9]根据上文[8]的方法，其中样品中的微生物计数是0.1菌落形成单位/毫升或小于0.1菌落形成单位/毫升。[10]根据上文[8]或[9]的方法，其中样品重量高达组合物中的聚合物的重量的10倍到10000倍。[11]一种用于测量微生物计数的组合物的用途，所述组合物包括(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。[12]一种在用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物的制造中的(a)聚合物以及(b)营养成分的用途，所述聚合物无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶。虽然下文中不存在对样品的特定限制，但样品通常是液体样品，且具体地说是水性液体样品，例如饮用水、软饮料、工业水、制药用水、透析水以及尿液。另外，微生物在下文中通常意指大肠菌群(coliformgroup)、葡萄球菌(staphylococci)、弧菌属细菌(Vibriobacteria)、肠球菌(enterococci)、真菌(fungi)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)等。本专利技术的有利效应根据本专利技术可简单且精确地测量样品中的微生物计数。尤其来说，可成功地定量检测到即使存在于大量样品中的微生物的低计数。附图说明[图1]图1是在袋型容器(100毫升容量)中使用本专利技术的组合物的一个实施例的照片。[图2]图2是在实例1中100毫升凝胶中的红色菌落的照片。具体实施方式本专利技术的组合物强制性地含有(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。本专利技术的组合物是用于制备培养基以供微生物计数测量。所述制备通常通过以下来进行：添加含有原样(asitis)测量目标微生物的液体样品作为用于构成培养基的凝胶的溶剂，且将其共混在一起。在这种使用模式下，本专利技术的组合物和使用其制备的培养基不同于用于微生物的常规培养基。从另一观点来看，本专利技术可被视为一种用于测量微生物计数的组合物的用途，所述组合物包括(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。此外，本专利技术可被视为一种在用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物的制造中的(a)聚合物以及(b)营养成分的用途，所述聚合物无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶。(a)聚合物起到构成用于培育和测量目标微生物的培养基的胶凝剂的作用，所述聚合物无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶。聚合物通过与液体样品共混来形成凝胶。作为聚合物，能够优选地保留多达自身重量的10倍或大于10倍的水、更优选地保留多达自身重量的20倍或大于20倍的水且进一步优选地保留多达自身重量的30倍或大于30倍的水的聚合物是适合的。通过对水的这种保留，可形成适用于制备培养基的凝胶。由于形成的凝胶不可流动，微生物的丰度(abundance)可精确地被测量。另外，优选的是凝胶中不发生水分离。如果发生水分离，虽然微生物的菌落的存在可定性地检测，但是有时可能很难精确地测量丰度。就这一点而言，水分离意指保留在凝胶中的水与凝胶分离。另外，“不发生水分离”具体意指例如在室温下静置60分钟之后，将要与凝胶分离的水的量保留在凝胶中的初始水量优选地是0.5％或小于0.5％，且更优选地是0.1％或小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，包括(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.28 JP 2016-1895451.一种用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，包括(a)聚合物，无需通过加热的熔融步骤且无需冷却便能够形成不可流动透明凝胶，以及(b)营养成分。2.根据权利要求1所述的用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，其中所述聚合物能够保留多达自身重量的10倍或大于10倍的水。3.根据权利要求1或2所述的用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，其中所述凝胶不发生水分离。4.根据权利要求1到3中任一项所述的用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，其中所述聚合物具有作为单体单元的丙烯酸。5.根据权利要求4所述的用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，其中所述聚合物是聚丙烯酸和/或其盐。6.根据权利要求1到5中任一项所述的用于制备培养基以供微生物计数测量的组合物，进一步包括(c)着色试剂。7.一种用于测量微生物计数的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：寺村哉，木村龙三，曽田浩二朗，
申请(专利权)人：捷恩智株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP