The invention provides a preparation method of stable and highly specific heterodimer immunoglobulin constructs, such as bispecific antibodies, which have the required natural IgG characteristics and no unnecessary heavy-light chain mismatch. The bispecific antibodies can bind two target molecules simultaneously and are more effective in treating complex diseases.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异源二聚体免疫球蛋白构建体和其制备方法对相关申请的交叉引用本申请要求于2016年9月29日提交了中国专利申请序号CN2016108638147的优先权，其公开内容通过引用全部引入本文。
本专利技术的领域和是稳定且高度特异的异源二聚体免疫球蛋白构建体，其保留天然IgG抗体的所需特点而没有不需的重轻链错配。
技术介绍
具有单特异性并且仅与靶抗原上的单个表位相互作用的单克隆抗体(mAb)已被广泛用于治疗许多疾病，例如癌症、炎症和自身免疫疾病和传染病。然而，迄今为止，此类治疗分子如果单独使用，没有一种能够显示出足够的药效，这是由于疾病的潜在复杂性，例如癌症或炎症性疾病，通常涉及过多种疾病介导的分子通路和信号通路之间的相叉作用。因为这种mAb仅与单个靶抗原相互作用，所以难以提供最佳治疗效果。同时阻断多个靶点或者一个靶点的多个位点能够改善治疗效果。另外，用单个多特异性分子靶向多个抗原/表位使得新药物开发不那么复杂，因为该疗法被简化为单一分子。和使用两个或以上的单特异分子的联合用药相比，对于患者和医疗工作者都是更方便的。双特异抗体(BsAb)或多特异性分子通常是本领域已知的。最...
【技术保护点】
1.一种异源二聚体，其包括Fc受体(FcR)‑结合成员和一条或多条与该FcR‑结合成员共价连接的识别部分，其中FcR‑结合成员包括通过一个或多个二硫键链间连接的第一多肽和第二多肽，第一多肽和第二多肽各自至少包括免疫球蛋白重链恒定区的一部分；第一多肽和第二多肽根据Kabat EU索引在如下位置包括至少5个氨基酸置换，a)第一多肽上T366位和D399位氨基酸置换，第二多肽上L351位、Y407位和K409位氨基酸置换；或者b)第一多肽上T366位和K409位氨基酸置换，第二多肽上L351位、D399位和Y407位氨基酸置换；因此，第一多肽与第二多肽彼此之间具有比自身更高的二聚化亲和力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.29 CN 20161086381471.一种异源二聚体，其包括Fc受体(FcR)-结合成员和一条或多条与该FcR-结合成员共价连接的识别部分，其中FcR-结合成员包括通过一个或多个二硫键链间连接的第一多肽和第二多肽，第一多肽和第二多肽各自至少包括免疫球蛋白重链恒定区的一部分；第一多肽和第二多肽根据KabatEU索引在如下位置包括至少5个氨基酸置换，a)第一多肽上T366位和D399位氨基酸置换，第二多肽上L351位、Y407位和K409位氨基酸置换；或者b)第一多肽上T366位和K409位氨基酸置换，第二多肽上L351位、D399位和Y407位氨基酸置换；因此，第一多肽与第二多肽彼此之间具有比自身更高的二聚化亲和力。2.如权利要求1所述的异源二聚体，其中至少五个氨基酸置换发生在第一多肽和第二多肽的免疫球蛋白重链恒定区的两个CH3结构域中。3.如权利要求1-2中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少五个氨基酸置换包括以下中的至少一个：a)L351G、L351Y、L351V、L351P、L351D、L351E、L351K或L351W；b)T366L、T366P、T366W或T366V；c)D399C、D399N、D399I、D399G、D399R、D399T或D399A；d)Y407L、Y407A、Y407P、Y407F、Y407T或Y407H；和e)K409C、K409P、K409S、K409F、K409V、K409Q或K409R。4.如权利要求1-3中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少五个氨基酸置换包括来自第一组a)-h)和第二组a)-h)中的每一个的任何一个成员的以下组合中的任一种：第一组：a)第一多肽T366L置换和第二多肽L351E，Y407L置换；b)第一多肽T366L置换和第二多肽L351G，Y407L置换；c)第一多肽T366L置换和第二多肽L351Y，Y407A置换；d)第一多肽T366P置换和第二多肽L351V，Y407P置换；e)第一多肽T366W置换和第二多肽L351D，Y407P置换；e)第一多肽T366P置换和第二多肽L351P，Y407F置换；g)第一多肽T366V置换和第二多肽L351K，Y407T置换；和h)第一多肽T366L置换和第二多肽L351W，Y407H置换；第二组：a)第一多肽D399R置换和第二多肽K409V置换；b)第一多肽D399C置换和第二多肽K409C置换；c)第一多肽D399C置换和第二多肽K409P置换；d)第一多肽D399N置换和第二多肽K409S置换；e)第一多肽D399G置换和第二多肽K409S置换；f)第一多肽D399I置换和第二多肽K409F置换；g)第一多肽D399T置换和第二多肽K409Q置换；和h)第一多肽D399A置换和第二多肽K409R置换。5.如权利要求1-3中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少五个氨基酸置换包括来自第三组a)-h)和第四组a)-h)中的每一个的任何一个成员的以下组合中的任一种：第三组：a)第一多肽T366L置换和第二多肽L351E，Y407L置换；b)第一多肽T366L置换和第二多肽L351G，Y407L置换；c)第一多肽T366L置换和第二多肽L351Y，Y407A置换；d)第一多肽T366P置换和第二多肽L351V，Y407P置换；e)第一多肽T366W置换和第二多肽L351D，Y407P置换；e)第一多肽T366W置换和第二多肽L351P，Y407F置换；g)第一多肽T366V置换和第二多肽L351K，Y407T置换；和h)第一多肽T366L置换和第二多肽L351W，Y407H置换；第四组：a)第一多肽K409V置换和第二多肽D399R置换；b)第一多肽K409C置换和第二多肽D399C置换；c)第一多肽K409P置换和第二多肽D399C置换；d)第一多肽K409S置换和第二多肽D399N置换；e)第一多肽K409S置换和第二多肽D399G置换；f)第一多肽K409F置换和第二多肽D399I置换；g)第一多肽K409Q置换和第二多肽D399T置换；和h)第一多肽K409R置换和第二多肽D399A置换。6.如权利要求1-4中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少五个氨基酸置换包括第五组a)-h)中的以下成员中的任何一个：第五组：a)第一多肽T366L和D399R置换和第二多肽L351E、Y407L和K409V置换；b)第一多肽T366L和D399C置换和第二多肽L351G、Y407L和K409C置换；c)第一多肽T366L和D399C置换和第二多肽L351Y、Y407A和K409P置换；d)第一多肽T366P和D399N置换和第二多肽L351V、Y407P和K409S置换；e)第一多肽T366W和D399G置换和第二多肽L351D、Y407P和K409S置换；f)第一多肽T366P和D399I置换和第二多肽L351P、Y407F和K409F置换；g)第一多肽T366V和D399T置换和第二多肽L351K、Y407T和K409Q置换；h)第一多肽T366L和D399A置换和第二多肽L351W、Y407H和K409R置换。7.如权利要求1-3和5中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少五个氨基酸置换包括第六组a)-h)中的以下成员中的任何一个：第六组：a)第一多肽T366L和K409V置换和第二多肽L351E、Y407L和D399R置换；b)第一多肽T366L和K409C置换和第二多肽L351G、Y407L和D399C置换；c)第一多肽T366L和K409P置换和第二多肽L351Y、Y407A和D399C置换；d)第一多肽T366P和K409S置换和第二多肽L351V、Y407P和D399N置换；e)第一多肽T366W和K409S置换和第二多肽L351D、Y407P和D399G置换；f)第一多肽T366P和K409F置换和第二多肽L351P、Y407F和D399I置换；g)第一多肽T366V和K409Q置换和第二多肽L351K、Y407T和D399T置换；h)第一多肽T366L和K409R置换和第二多肽L351W、Y407H和D399A置换。8.如权利要求1-7中任一项所述的异源二聚体，其中所述FcR-结合成员包括一个Fc结构域。9.如权利要求8所述的异源二聚体，其中所述Fc结构域来源于IgGFc结构域。10.如权利要求9所述的异源二聚体，其中IgGFc结构域包括选自IgG1Fc结构域、IgG2Fc结构域、IgG3Fc结构域和IgG4Fc结构域中的一种。11.如权利要求1-10中任一项所述的异源二聚体，其中所述一个或多个识别部分包括抗原结合(Fab)片段或多个片段、单链可变(scFv)片段或多个片段、膜受体的细胞外结构域、细胞膜受体的肽配体、细胞因子、凝血因子、亲和力标签和其组合中的至少一种。12.如权利要求11所述的异源二聚体，其中所述一个或多个识别部分包括两个识别部分，其中所述两个识别部分各自包括Fab片段。13.如权利要求12所述的异源二聚体，其中所述两个Fab片段是不同的。14.如权利要求13所述的异源二聚体，其中所述异源二聚体包括一个免疫球蛋白(Ig)样分子。15.如权利要求13-14中任一项所述的异源二聚体，其中所述异源二聚体包括一个双特异性抗体。16.如权利要求11所述的异源二聚体，其中所述一个或多个识别部分包括两个识别部分，其中所述两个识别部分包括一个Fab片段和一个scFv片段。17.如权利要求1-16中任一项所述的异源二聚体，其中，当在含有1mM二硫苏糖醇的生理条件下的水性溶液中存在时，基于溶液中所有多肽形式的重量，小于50％重量的所述第一多肽和第二多肽中仅一个以及所述第一多肽或第二多肽的同源识别部分以同源二聚体形式存在，所述溶液基本上不含除所述第一多肽或第二多肽和其同源识别部分以外的肽。18.如权利要求1-17中任一项所述的异源二聚体，其中所述至少5个氨基酸置换包括第一多肽上T366L和D399R置换和第二多肽上L351E，Y407L和K409V置换。19.如权利要求13所述的异源二聚体，其中所述异源二聚体包括第一重链和第二重链，以及第一轻链和第二轻链，其中，所述第一重链和第二重链不相同，并且第一轻链和第二轻链不相同。20.如权利要求16所述的异源二聚体，其中所述Fab片段和scFv片段选自一对选自VIIa)-d)的识别部分：第七组：a)特异性结合HER2的Fab和特异性结合CD3的scFv；b)特异性结合Trop2的Fab和特异性结合CD3的scFv；c)特异性结合CD20的Fab和特异性结合CD3的scFv；和d)特异性结合PD-L1的Fab和特异性结合CD3的scFv。21.如权利要求13所述的异源二聚体，其中，两个不相同的Fab片段包括特异性结合HER2的第一Fab片段和特异性结合CD20的第二Fab片段。22.如权利要求1-21任一项所述的异源二聚体，其中，所述第一多肽和第二多肽中的至少一个具有氨基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQIDNO：16-31、33、35、37、39、41、43、45、48、49、51、53、55、57、59、61、63、68、69、70和71中的至少一个。23.如权利要求1-22中任一项所述的异源二聚体，其中，所述FcR-结合成员能够结合Fc受体，所述Fc受体选自FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB1、FcγRIIB2、FcγRIIIA、FcγRIIIB、FcεRI、FcεRII、FcαRI、Fcα/μR、FcRn和其组合中的一种。24.如权利要求24所述的异源二聚体，其中，所述FcR-结合成员能够结合FcRn。25.如权利要求23所述的异源二聚体，其中，所述与Fc受体的结合引发抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)。26.一种生产如权利要求1-25中任一项所述的异源二聚体的方法，其包括步骤：1)将在第一宿主细胞中编码第一多肽的一种或多种核酸和在第二宿主细胞中编码第二多肽的一种或多种核酸进行表达，其中第一宿主细胞和第二宿主细胞彼此分开；2)在分开时还原第一多肽和第二多肽；3)将还原的第一多肽和第二多肽组合以形成所得混合物；4)将混合物进行氧化；和5)回收形成的异源二聚体。27.一种生产异源二聚体的方法，该异源二聚体包括二价异源免疫球蛋白，其中，所述二价异源免疫球蛋白具有第一重链、第二重链、第一轻链和第二轻链，所述第一重链和第二重链不相同，所述第一轻链和第二轻链不相同，所述第一重链和第二重链的一部分形成二价异源免疫球蛋白的Fc区，该方法包括步骤：1)将在第一宿主细胞中编码第一重链和第一轻链的一种或多种核酸和在第二宿主细胞中编码第二重链和第二轻链的一种或多种核酸进行表达，其中第一宿主细胞和第二宿主细胞彼此分开；2)将第一重链与第一轻链一起还原和将第二重链与第二轻链一起还原；3)将还原的第一重链、第一轻链、第二重链和第二轻链混合以形成所得混合物；4)将混合物进行氧化；和5)回收形成的异源二聚体，其中所述Fc区包括至少5个氨基酸置换，其中所述至少5个氨基酸置换包括来自第八组a)-h)和第九组a)-h)的每一个的任何一个成员的以下组合中的任一种：第八组：a)第一重链T366L置换和第二重链L351E，Y407L置换；b)第一重链T366L置换和第二重链L351G，Y407L置换；c)第一重链T366L置换和第二重链L351Y，Y407A置换；d)第一重链T366P置换和第二重链L351V，Y407P置换；e)第一重链T366W置换和第二重链L351D，Y407P置换；f)第一重链T366P置换和第二重链L351P，Y407F置换；g)第一重链T366V置换和第二重链L351K，Y407T置换；和h)第一重链T366L置换和第二重链L351W，Y407H置换；第九组：a)第一重链D399R置换和第二重链K409V置换；b)第一重链D399C置换和第二重链K409C置换；c)第一重链D399C置换和第二重链K409P置换；d)第一重链D399N置换和第二重链K409S置换；e)第一重链D399G置换和第二重链K409S置换；f)第一重链D399I置换和第二重链K409F置换；g)第一重链D399T置换和第二重链K409Q置换；和h)第一重链D399A置换和第二重链K409R置换。28.一种生产异源二聚体的方法，该异源二聚体包括二价异源免疫球蛋白，其中，所述二价异源免疫球蛋白具有第一重链、第二重链、第一轻链和第二轻链，所述第一重链和第二重链不相同，所述第一轻链和第二轻链不相同，所述第一重...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘家望，宋楠萌，杨东歌，杨亚平，金孟燮，
申请(专利权)人：北京韩美药品有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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