一种香加皮化学成分的提取分离方法技术

本发明专利技术公布了一种香加皮化学成分的提取分离方法，属于中药分析领域，具体包括以下步骤：提取香加皮药材、大孔吸附树脂纯化、中低压硅胶柱色谱分离、制备HPLC分离，既得十三种化合物。本发明专利技术的分离方法一次就得到13个化合物，有利于节约分离时间、减少流动相试剂用量，保护环境、降低分离成本。

Extraction and Separation of Chemical Constituents from Cortex Periplocae

The invention discloses a method for extracting and separating chemical constituents of Cortex Periplocae, which belongs to the field of traditional Chinese medicine analysis. The method comprises the following steps: extracting Cortex Periplocae, purifying macroporous adsorption resin, separating by silica gel column chromatography at medium and low pressure, and separating by preparative high performance liquid chromatography, and obtaining thirteen compounds. The separation method of the invention can obtain 13 compounds at a time, which is beneficial to saving separation time, reducing the amount of mobile phase reagent, protecting environment and reducing separation cost.

【技术实现步骤摘要】
一种香加皮化学成分的提取分离方法
本专利技术涉及一种香加皮的化学成分提取分离的方法，属于中药分析领域。
技术介绍
香加皮，为罗摩科植物杠柳PeriplocasepiumBge.的干燥根皮，春、秋二季采挖，剥取根皮，晒干。香加皮是一种用途较广泛的中药材,具有祛风湿,强筋骨的功效,用于风寒湿痹,腰膝酸软,心悸气短,下肢浮肿，文献报道的主要作用有，1、香加皮治水肿：香加皮一钱五分至三钱，煎服(《上海常用中草药》)；2、香加皮治风湿性关节炎，关节拘挛疼痛：北五加皮、穿山龙、白鲜皮各五钱。用白酒泡24小时。每天服10毫升(《陕甘宁青中草药选》)；3、香加皮治水肿，小便不利：北五加皮、陈皮、生姜皮、茯苓皮、大腹皮各三钱，水煎服(《陕甘宁青中草药选》)；4、香加皮治筋骨软弱，脚痿行迟：北五加皮、木瓜、牛膝等分为末，每服一钱，每日三次(《陕甘宁青中草药选》)；香加皮有祛风湿、强筋骨之功能，故对于关节拘挛疼痛，或筋骨痿软行迟，香加皮常与穿山龙、木瓜、怀牛膝等同用，共奏祛风湿，舒筋活络之效；香加皮配独活，祛风胜湿，效力增强，尤宜于肾阳不足，风寒湿痹，腰膝酸痛；香加皮有利水消肿作用，一般单用，或与陈皮、大腹皮、茯苓皮等配伍，加强利尿消肿作用；香加皮配杜仲，治疗肾阳不足，寒湿痹证；香加皮配桑螵蛸，用于肾虚阳痿，梦遗肾精，尿精遗溺；香加皮配淫羊藿，既可治疗肾阳不足之阳萎遗溺，又可用于风寒湿痹；香加皮配茯苓，温阳利水，治疗心阳不足，气喘水肿。香加皮在我国药源丰富，主要分布于我国河北、山西、河南、山东4省，以山西、河南产量为最大【李天祥,张丽娟,刘虹,等.香加皮的研究进展[J].北京中医药,2008,27(12):960-963.】。近年来，国内外对香加皮化学成分的研究多有报道【李金楠,赵丽迎,于静,等.香加皮化学成分的研究[J].中成药,2010,32（9）:1552-1556；毕志明,李健,周娇娇,等.香加皮化学成分的研究*[J].药学与临床研究,2011,19（6）:521-522；KawanishiS,SakumaSandShojiJ.ConstituentsofChineseCrudeDrug"Wujiapi"V.1)OntheStructureofGlycosideH1ofBei-Wujiapi[J].ChemPharmBull.1968,206(3):469-475；ItokawaH,XuJunping,TakeyaK,etal.StudiesonChemicalConstituentsofAntitumorFractionfromPeriplocasepium.Ⅳ.StructuresofNewPregnaneGlycosides,PeriplocosidesD,E,L,andM[J].Chem.Pharm.Bull.1988,36(6):2084-2089.】，总结发现香加皮的化学成分主要有C21甾体类、强心苷类、萜类和醛类【王丽萍,刘建利.香加皮的化学成分和药理作用研究进展[J].中草药,2009,40(3):493-496】，其分离方法虽然采用药材醇提或水提取，以大孔树脂吸附、柱层析等分离手段，并利用IR、MS、NMR等现代波谱学手段以及理化性质,鉴定化学成分，分离得到最多的有7-10种化合物，而且分离时间长、试剂用量大。本申请研究香加皮的化学成分，采用大孔吸附树脂对香加皮的50-80%乙醇提取物进行系统分离，采用乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱液，研究了50-80%乙醇洗脱部位，采用硅胶柱色谱和制备色谱方法从中分离得到13个化合物，即2-羟基-5-(2-羟基-4-甲氧基苄基)-4-甲氧基苯甲醛（化合物1）北五加皮苷M（化合物2），Δ5-孕甾烯-3β，16β，20（R）-三醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃洋地黄糖苷（化合物3），Δ5-孕甾烯-3β，16α，20（S）-三醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）-β-D-吡喃洋地黄糖苷（化合物4），Δ5-孕甾烯-3β，20（S）-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）-β-D-吡喃洋地黄糖苷（化合物5），杠柳苷H2（化合物6），21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，20-四醇（化合物7），21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，21-四醇-20-酮（化合物8），12β-羟基孕甾-4,6,16-三烯-3,20-20-酮（化合物9），Δ5-孕甾烯-3β，16α，20（s）-三醇（化合物10），Δ5-孕甾烯-3β，17α，20（α）-三醇（化合物11），Δ5-孕甾烯-3β，20（α）-二醇(化合物12)，3β-O-（4’，6’-双脱氧-3’-O-甲基-Δ3’-D-2'-hexosulosyl）-Δ5-孕甾烯-17（α），20（s）-三醇(化合物13)，其中除了化合物1以外，其余化合物均为C21甾体类化合物。如果采用现有技术从香加皮中得到该13个化合物，需要耗费时间长；使用的试剂多，污染环境；分离需要时间、人力、资金多，分离成本高。
技术实现思路
本专利技术提供一种香加皮化学成分的提取分离方法，该方法包括如下步骤：（1）取香加皮药材，以50-80%乙醇为提取溶剂，过滤，回收乙醇，得药液，备用；（2）取步骤（1）所得药液，经大孔吸附树脂纯化，采用50-80%乙醇为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，干燥，得干膏，备用；（3）取步骤（2）所得干膏，加甲醇溶解，经中低压硅胶柱色谱，洗脱剂为三氯甲烷-甲醇梯度洗脱比例为（1：0，20：1，15：1，10：1，5：1，2：1，0：1），收集三氯甲烷-甲醇（20：1）的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集三份，前两部分分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分；收集三氯甲烷-甲醇（5：1）的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集两份，第二份标记为洗脱液第三部分，备用；（4）取步骤（3）所得三部分洗脱液，分别经制备HPLC分离，色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱；流动相：甲醇—水洗脱，既得化合物。本专利技术的分离方法优选为：步骤（4）制备HPLC分离，第一部分洗脱液的色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱，流动相：甲醇—水，梯度洗脱：0~10min，40~50%甲醇，10~30min,50%甲醇，30~50min，50~60%甲醇，50~60min，60~90%甲醇，60~65min，90~40%甲醇，65~75min,40%甲醇，每次进样体积为100-500μL，得到化合物1和化合物2；所述步骤（4）制备HPLC分离，第二部分洗脱液的色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱，流动相：甲醇—水，梯度洗脱：0~15min，30~40%，15~25min，40~50%，25~55min，50~90%，55~65min，90~30%，65~75min，30%，每次进样体积为100-500μL，得到化合物7，化合物8，化合物9，化合物10，化合物11，化合物12和化合物13；所述步骤（4）制备HPLC分离，第三部分洗脱液的色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱，流动相：甲醇—水，梯度洗脱：0~10min，3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种香加皮化学成分的提取分离方法，其特征在于所述提取分离方法包括以下步骤：（1）取香加皮药材，以50‑80%乙醇为提取溶剂，过滤，回收乙醇，得药液，备用；（2）取步骤（1）所得药液，经大孔吸附树脂纯化，采用50‑80%乙醇为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，干燥，得干膏，备用；（3）取步骤（2）所得干膏，加甲醇溶解，经中低压硅胶柱色谱，洗脱剂为三氯甲烷‑甲醇梯度，洗脱比例为1：0，20：1，15：1，10：1，5：1，2：1，0：1，收集三氯甲烷‑甲醇为20：1的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集三份，前两部分分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分；收集三氯甲烷‑甲醇为5：1的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集两份，第二份标记为洗脱液第三部分，备用；（4）取步骤（3）所得三部分洗脱液，分别经制备HPLC分离，既得十三种化合物。

【技术特征摘要】
1.一种香加皮化学成分的提取分离方法，其特征在于所述提取分离方法包括以下步骤：（1）取香加皮药材，以50-80%乙醇为提取溶剂，过滤，回收乙醇，得药液，备用；（2）取步骤（1）所得药液，经大孔吸附树脂纯化，采用50-80%乙醇为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，干燥，得干膏，备用；（3）取步骤（2）所得干膏，加甲醇溶解，经中低压硅胶柱色谱，洗脱剂为三氯甲烷-甲醇梯度，洗脱比例为1：0，20：1，15：1，10：1，5：1，2：1，0：1，收集三氯甲烷-甲醇为20：1的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集三份，前两部分分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分；收集三氯甲烷-甲醇为5：1的洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集两份，第二份标记为洗脱液第三部分，备用；（4）取步骤（3）所得三部分洗脱液，分别经制备HPLC分离，既得十三种化合物。2.根据权利要求1所述的提取分离方法，其特征在于，所述步骤（4）制备HPLC分离，第一部分洗脱液的色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱，流动相：甲醇—水，梯度洗脱：0~10min，40~50%甲醇，10~30min,50%甲醇，30~50min，50~60%甲醇，50~60min，60~90%甲醇，60~65min，90~40%甲醇，65~75min,40%甲醇，每次进样体积为100-500μL，得到化合物1和化合物2；所述步骤（4）制备HPLC分离，第二部分洗脱液的色谱条件为：色谱柱：C18制备色谱柱，流动相：甲醇—水，梯度洗脱：0~15min，30~40%，15~25min，40~50%，25~55min，50~90%，55~65min，90~30%，65~75min，30%，每次进样体积为100-500μL，得到化合物7，化合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋丛恺，
申请(专利权)人：青岛凯玉盈商贸有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37