一种重组G-17蛋白及其单克隆抗体的制备制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域。本发明专利技术提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包含胃泌素‑17(以下称G‑17)全部抗原表位，并将全部抗原表位序列通过柔性片段(连续四个甘氨酸)连接后重复十次，形成重组G‑17蛋白氨基酸序列。为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组蛋白表达载体。本发明专利技术还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过抗原免疫、细胞融合及多轮筛选后得到单克隆细胞株。纯化的单克隆抗体经过蛋白分子相互作用仪筛选出优势抗体配对，分别标记荧光微球和包被NC膜，通过实验确定最佳单抗配对组合，可用于G‑17的定量检测。

Preparation of a Recombinant G-17 Protein and Its Monoclonal Antibody

The invention belongs to the field of biotechnology. The present invention provides a recombinant protein, which contains all antigenic epitopes of gastrin 17 (hereinafter referred to as G 17), and repeats all antigenic epitope sequences through flexible fragments (four consecutive glycines) ten times to form the amino acid sequence of the recombinant G 17 protein. In order to increase the yield of the recombinant protein in prokaryotic expression system, the amino acid sequence of the recombinant protein was transformed into the corresponding nucleotide sequence using E. coli preferred codon. The nucleotide sequence was synthesized by chemical synthesis and the recombinant protein expression vector was constructed. The invention also relates to the preparation of the monoclonal antibody to the recombinant protein, and the monoclonal cell line is obtained after antigen immunization, cell fusion and multiple rounds of screening. The purified monoclonal antibodies were screened by protein-molecule interaction instrument, and labeled with fluorescent microspheres and coated with NC membranes respectively. The optimum combination of monoclonal antibodies was determined by experiments, which can be used for quantitative detection of G_17.

【技术实现步骤摘要】
一种重组G-17蛋白及其单克隆抗体的制备
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组蛋白，编码该重组蛋白的核苷酸序列，含有上述核苷酸序列的质粒载体，转化含有上述质粒载体的菌株，还涉及使用上述重组蛋白制备G-17单克隆抗体并筛选G-17单克隆抗体配对，并将配对单抗应用于胃泌素定量检测。
技术介绍
我国是胃癌高发国家，胃癌每年新增67.91万例，平均46秒就有一人新患胃癌，居全球首位。胃癌是一种慢性疾病，通常从炎症发展而来。可以通过早期检测发现胃癌前疾病风险，通过及时就诊治疗，避免最终发展至胃癌。胃泌素是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中，95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34，其中80％～90％是G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标，其与胆囊收缩素受体(cholecystokininreceptor,CCKR)结合后通过一系列信号转导而发挥生物学效应，主要参与刺激胃酸分泌及营养胃肠道黏膜，近年研究表明G-17还有促进细胞增殖和抑制凋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列如序列表SEQIDNo:1所示。2.一种核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列如序列表SEQIDNo:2所示，可编码权利1所述的重组蛋白。3.一种质粒载体，其特征在于该质粒载体含有权利要求2所述的核苷酸序列。4.一种菌株，其特征在于该菌株包含采用权利要求3所述的质粒载体。5.权利要求1所述的重组蛋白用于G-17单克隆抗体的制备，包括：(a)化学合成权利要求2所述的核苷酸序列，并连接质...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘清泉，胡祥叶，朱伟，项美华，武戌青，王立童，吴琼杉，余铭恩，
申请(专利权)人：杭州贤至生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33