一种霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用，属于兽用药物技术领域。本发明专利技术所述应用能够为进一步控制口蹄疫的传播提供一类高效、安全且质量可控的抗口蹄疫病毒药物。

Application of Mycophenolate Ester in the Preparation of Drugs for Preventing or Treating Foot and Mouth Disease Virus Infection

The invention relates to the application of mycophenolate mofetil in the preparation of drugs for preventing or treating foot-and-mouth disease virus infection, and belongs to the technical field of veterinary medicine. The application of the invention can provide a kind of highly effective, safe and controllable anti-foot-and-mouth disease virus drug for further controlling the spread of foot-and-mouth disease.

【技术实现步骤摘要】
一种霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用
本专利技术涉及兽用药物
，具体涉及一种霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。
技术介绍
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性烈性传染病，主要感染猪、牛、羊等偶蹄兽和多种野生动物，造成了巨大的经济损失。因其影响的严重性，世界动物卫生组织将口蹄疫列在A类传染病的第一位，我国农业部也将其列在一类动物疾病的首位。口蹄疫的病原，口蹄疫病毒(FMDV)是一种无包膜单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属。现已发现该病毒包括A型、O型、C型、亚洲I型和南非Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型等7种血清型，同时各血清型又分为多个亚型，给特异性治疗口蹄疫带来巨大困难。此外，近几年来，境外毒株传入风险增加，对我国口蹄疫防控构成重大威胁。因此，开发可供选择的控制口蹄疫的新策略就显得很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。所述应用能够为进一步控制口蹄疫的传播提供一类高效、安全且质量可控的抗口蹄疫病毒药物。本专利技术提供了霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。优选的是，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。优选的是，所述霉酚酸酯在应用时其浓度＞12μmol/L。本专利技术还提供了一种口蹄疫病毒抑制剂，所述抑制剂包括霉酚酸酯和药学上可接受的辅料。优选的是，所述抑制剂中霉酚酸酯的浓度＞60μg/g。优选的是，所述辅料包括淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油中的一种或多种。本专利技术提供了霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。霉酚酸酯对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒诱导的细胞病变均有抑制作用，抑制病毒的复制，延长感染动物的生存时间，本专利技术将霉酚酸酯作为有效组分制备得到的药物能够抑制口蹄疫病毒(FMDV)，防控口蹄疫。细胞试验显示，霉酚酸酯毒性低，对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒均具有抑制作用；进一步的实验证实，霉酚酸酯是在FMDV复制早期起作用；体内实验表明霉酚酸酯能够降低口蹄疫病毒对乳鼠的致死率。霉酚酸酯能够作为抗FMDV感染的候选药物。附图说明图1为本专利技术实施列1提供的不同浓度的MMF对IBRS-2细胞的细胞毒性图；图2为本专利技术实施列1提供的不同浓度的MMF对O型FMDV感染IBRS-2细胞的抑制作用图；图3为本专利技术实施列1提供的不同浓度的MMF对A型FMDV感染IBRS-2细胞的抑制作用图；图4为本专利技术实施列1提供的不同浓度的MMF对O型FMDV感染IBRS-2细胞中的FMDVmRNA抑制作用图；图5为本专利技术实施列1提供的不同浓度的MMF对O型FMDV感染IBRS-2细胞中的FMDVVP1蛋白抑制作用图；图6为本专利技术实施列1提供的IFA检测不同浓度的MMF对O型FMDV感染细胞的FMDV蛋白表达抑制作用图；图7为本专利技术实施列1提供的MMF在不同时间段对病毒感染细胞的FMDVmRNA表达水平抑制作用图；图8为本专利技术实施列1提供的MMF在不同时间段对病毒感染细胞的VP1蛋白表达水平抑制作用图；图9为本专利技术实施列1提供的MMF对FMDV感染乳鼠死亡时间的影响。具体实施方式本专利技术提供了霉酚酸酯(MMF)在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。在本专利技术中，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。霉酚酸酯对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒诱导的细胞病变均有抑制作用，抑制病毒的复制，延长感染动物的生存时间，霉酚酸酯是在FMDV复制早期起作用。本专利技术将霉酚酸酯作为有效组分制备得到的药物毒性低，对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒均具有抑制作用，能够抑制口蹄疫病毒(FMDV)，防控口蹄疫。在本专利技术中，所述霉酚酸酯在应用时其浓度＞12μmol/L。本专利技术还提供了一种口蹄疫病毒抑制剂，所述抑制剂包括霉酚酸酯和药学上可接受的辅料。在本专利技术中，所述抑制剂中霉酚酸酯的浓度＞60μg/g。在本专利技术中，所述辅料包括淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油中的一种或多种。在本专利技术中，所述甘油优选为注射用甘油。本专利技术对所述辅料的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油的市售产品即可。下面结合具体实施例对本专利技术所述的一种霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例11.实验材料1.1细胞、动物、病毒和药物IBRS-2细胞由本课题组保存；3日龄乳鼠购自中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场。FMDV(O/MY98/BY/2010和A/GDMM/CHA/2013)由国家口蹄疫参考实验室保存并提供；MMF购自MCE公司，以DMSO进行配制。1.2试剂DMEM、胎牛血清FBS、胰蛋白酶培养基购自Gibco公司；MTS检测试剂盒购自Abcam公司；TRIZOL购自Invitrogen公司；SYBRPremixExTaqⅡ试剂盒均购自宝生物工程(大连)有限公司；RIPA裂解液、BCA法蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、ECL购自碧云天公司；BSA、PVDF膜购自BioRad公司；Tween-20、Tween-80购自上海生工生物工程公司；TritonX-100、DMSO购自Sigma公司；小鼠抗β-actin多克隆抗体、HRP标记抗兔或抗鼠IgG抗体均购自Abcam公司；兔抗O型FMDVVP1多克隆抗体由国家口蹄疫参考实验室郑海学博士惠赠；兔抗O型FMDV高免血清由国家口蹄疫参考实验室周广青惠赠。2.实验方法和结果2.1MMF在IBRS-2细胞上的毒性实验：采用MTS法测定MMF对IBRS-2细胞的细胞毒性。待铺到96孔板IBRS-2细胞生长满单层后，弃掉细胞上层培养液，用新鲜的DMEM洗3次，最后加入用含2％FBS的DMEM培养液梯度稀释好的MMF100μL，以MMF的配制溶液相应DMSO浓度作为阴性对照孔，以不作任何处理作细胞对照孔。放入37℃持续培养72h，弃掉上层细胞培养液，用新鲜的DMEM洗三次，再加入100μL新鲜的DMEM，每孔加入20μLMTS溶液。37℃孵育4h后在酶标仪上测490nm处的吸光度值，根据公式“细胞活性率＝(OD药物-OD空白)/(OD阴性-OD空白)×100％”计算出不同浓度的MMF对IBRS-2细胞的毒性。实验独立重复三次。本实验结果如图1所示：MTS结果显示，随着药物浓度的不断增加，细胞的活性率仍在80％以上，说明MMF对IBRS-2细胞毒性极低。2.2MMF在IBRS-2细胞上抗口蹄疫病毒活性的评价：将含10％FBS的DMEM完全培养基上生长良好的IBRS-2细胞铺到96孔板，待IBRS-2细胞生长满单层后，弃掉细胞上层培养液，用新鲜的DMEM洗3次，接种100TCID50O/MY98/BY/2010。1h后，去掉病毒液，用新鲜的DMEM洗3次，加入用含2％FBS的DMEM培养液梯度稀释好的MMF100μL，以MMF的配制溶液相应DMSO浓度作为病毒对照孔，以无MMF、无病毒的作细胞对照孔。放入37℃持续培养48h，弃掉上层细胞培养液，用新鲜的DMEM洗三次，再加入100μL新鲜的DMEM，每孔加入20μLMTS溶液。37℃孵育4h后在酶标仪上测490n本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.霉酚酸酯在制备预防或治疗口蹄疫病毒感染的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述霉酚酸酯在应用时其浓度＞12μmol/L。4.一种口蹄疫病...

【专利技术属性】
技术研发人员：常惠芸，龚美娇，李世芳，邵军军，赵付荣，常艳燕，张永光，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62