一种提高槐角中染料木素含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高槐角中染料木素含量的方法，所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30‑35℃、100‑200r/min的振荡条下转化24‑72h(优选30℃、24h)，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉GDMCC No:60145发酵液过滤除去菌体获得的滤液。槐角中的染料木素含量提高幅度大，最高可达21.5倍，含量由原来的2.34mg/g提高到52.7mg/g；本发明专利技术具有专一性好、产物结构不会被破坏、生物催化剂的成本低，且可使槐角中多种糖苷转化为染料木素，其含量提高幅度大。

A Method for Increasing Genistein Content in Sophora japonica

The invention discloses a method for increasing genistein content in Sophora japonica. The method comprises adding Sophora japonica to the crude enzyme solution of glycosidase, transforming it into 24 to 72 hours (optimum 30 to 24 hours) under the oscillating strip of 30 35 (?) and 100 200 r/min, filtering and removing the crude enzyme solution, filtering and drying the biscuit, and obtaining the rich genistein. The crude enzyme solution of the glycosidase is filtered by Rhizopus oryzae GDMCC No:145 fermentation liquid. The filtrate obtained by removing the bacterium. The content of genistein in Sophora japonica L. increases greatly, up to 21.5 times, from 2.34 mg/g to 52.7 mg/g. The invention has good specificity, product structure can not be destroyed, low cost of biocatalyst, and can convert various glycosides in Sophora japonica L. into genistein, with a large increase in content.

【技术实现步骤摘要】
一种提高槐角中染料木素含量的方法(一)
本专利技术属于生物化工
，具体涉及一种采用生物转化法提高中药槐角中染料木素含量的方法。(二)
技术介绍
槐角(SophoraeFructus)为我国传统中药材，是豆科植物槐(SophorajaponicaL.)的干燥成熟果实(完整的豆荚)。槐角始载于《神农本草经》，列为上品。性寒、味苦，归肝、大肠经，具有清热泻火，凉血止血的功效，用于肠热便血，痔肿出血，肝热头痛，眩晕目赤。槐角是历版《中华人民共和国药典》均收载的中药品种，据统计，槐角为原料生产的槐角丸、地榆槐角丸、脏连丸达30多种，对治疗冠心病、高血压、脑血管栓塞等病症，疗效显著。槐角的主要药效成分为槐角苷(sophoricoside，CAS号152-95-4)，又名为槐苷、槐黄苷、染料木素-4'-葡萄糖苷(genistein-4'-glucoside)，是历版中国药典要求的质控成分，如2015版《中华人民共和国药典》要求槐角干燥品中，槐角苷含量不得低于4.0％。槐角除了含有槐角苷之外，还含有它的苷元染料木素(genistein，CAS号446-72-0)，以及染料木素的其他糖苷形式，包括染料木苷(genistin，genistein-7-glucoside，CAS号529-59-9)、槐角双苷(sophorabioside，genistein-4'-diglucoside，CAS号2945-88-2)、染料木素-7-双葡萄糖苷(genistein-7-diglucoside,genistein-7-cellobioside)和染料木素-7,4'-双葡萄糖苷(genistein-7,4'-diglucoside，CAS号36190-98-4)等。染料木素又称染料木黄酮、染料木因和金雀异黄素等，属于异黄酮类化合物，在槐角中的含量为0.2％左右。染料木素的结构与雌二醇类似，因此有植物雌激素之称，具有抗炎、抗生育和预防骨质疏松症的疗效，近年来不少学者对染料木素的生物活性进行了研究，发现其还具有抗氧化、降血脂和抗肿瘤等生物活性。现代药理学研究表明，槐角苷只有被体内肠道菌群转化为染料木素后才能发挥效用。但人体摄入的槐角苷，并不是都能被肠道菌群转化为染料木素而被吸收，如果肠道菌群产生的糖苷酶活性较弱，槐角苷进入肠道后，不能被转化，发挥的药效就较弱，甚至不能发挥作用。所以，如果在体外将槐角苷以及染料木素的其他糖苷都转化为染料木素，槐角的药理作用将显著提高。目前，已有文献报道采用酸水解或酶转化处理槐角，染料木素的提取率显著提高。但是，酸水解专一性差，容易破坏苷元的结构，导致产物收率低，并产生非药效物质等问题；而利用商品糖苷酶(如中国专利技术专利CN101760488.A采用的是淀粉酶、纤维素酶或β-葡萄糖苷酶等)转化处理槐角，只能转化少数种类的染料木素糖苷，存在效率低、成本高的缺点，致使这些技术工业化应用困难。由此可见，如果采用微生物发酵的复合糖苷酶处理槐角，可以将其中各种形式糖苷，都转化为染料木素(图1)，含量可大幅度提高，而且微生物产生的多糖水解酶对槐角组成结构的纤维素和半纤维素降解，使槐角质地疏松，从而有利于染料木素的释放。经过转化处理的槐角，既可作为中药材应用中药方剂，疗效将显著提高；也可以作为染料木素提取的原料，提取率将大幅度提高。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是采用微生物发酵制备的复合糖苷酶，生物转化法处理中药槐角，提高其染料木素的含量。经转化处理的槐角中，染料木素的含量显著提高，最高可达21.5倍。本专利技术工艺具有成本低、流程简单、转化率高等优点。本专利技术采用的技术方案是：本专利技术提供一种提高槐角中染料木素含量的方法，所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30-35℃、100-200r/min的振荡条下转化24-72h(优选30℃、24h)，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉(Rhizopusoryzae)GDMCCNo:60145发酵液过滤除去菌体获得的滤液。本专利技术所述的米根霉(Rhizopusoryzae)LJH3，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNo:60145，保藏日期2017年2月27日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编：510075，已在专利申请CN201710442332.9中公开。进一步，所述槐角的加入量以糖苷酶粗酶液体积计为10-50g/L，所述槐角在加入前需在85℃干燥并粉碎成粒径为0.2-10mm的颗粒。所述糖苷酶粗酶液中糖苷酶活力以β-葡萄糖苷酶计为1.0-1.2U/mL。进一步，所述糖苷酶粗酶液制备方法为：将米根霉GDMCCNo:60145接种于发酵培养基中，于28-30℃、200-250r/min恒温振荡条件下培养3-5d，发酵液过滤，滤液即为糖苷酶粗酶液；所述发酵培养基终浓度组成为：酵母浸出粉9-12g/L，蛋白胨5-7g/L，麦芽糖8-11g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，初始pH6.0-7.0。进一步，所述滤饼烘干条件为85-105℃、10-12h(更优选105℃、12h)。本专利技术所述米根霉GDMCCNo:60145在发酵前，通常需要先经平板培养基活化培养制备孢子，或经过种子培养基扩大培养制备种子液，然后用孢子或种子液接入发酵培养基进行产酶培养，所述米根霉GDMCCNo:60145发酵培养方法为：(1)活化培养：将米根霉GDMCCNo:60145接种于PDA平板培养基，于28-30℃恒温培养2-3d，获得米根霉GDMCCNo:60145孢子；所述的PDA平板培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)终浓度组成为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然(实测6.5)；(2)种子扩大培养：挑取步骤(1)活化培养后米根霉GDMCCNo:60145孢子接种至种子培养基中，于28-30℃、200-250r/min恒温振荡条件下培养2-3d，得种子液；所述种子培养基组成为：酵母浸出粉9-12g/L，蛋白胨5-7g/L，麦芽糖8-11g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，初始pH6.0-7.0；优选的种子培养基组成为：酵母浸出粉9g/L，蛋白胨5g/L，麦芽糖8g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，初始pH6.0；(3)发酵培养：用步骤(1)活化培养后米根霉GDMCCNo:60145孢子，或步骤(2)制备的种子液按体积浓度2-5％(优选5％)的接种量接入发酵培养基，于28-30℃、200-250r/min恒温振荡条件下培养3-5d，获得发酵液；所述发酵培养基终浓度组成为：酵母浸出粉9-12g/L，蛋白胨5-7g/L，麦芽糖8-11g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，初始pH6.0-7.0；优选的发酵培养基终浓度组成为：酵母浸出粉12g/L，蛋白胨7g/L，麦芽糖11g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，pH7.0。与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：(1)槐角中的染料木素含量提高幅度大，最高可达21.5倍，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30‑35℃、100‑200r/min的振荡条下转化24‑72h，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉(Rhizopus oryzae)GDMCC No:60145发酵液过滤除去菌体后获得的滤液。

【技术特征摘要】
1.一种提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30-35℃、100-200r/min的振荡条下转化24-72h，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉(Rhizopusoryzae)GDMCCNo:60145发酵液过滤除去菌体后获得的滤液。2.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述槐角的加入量以糖苷酶粗酶液体积计为10-50g/L。3.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述槐角在加入前需在85℃干燥并粉碎成粒径为0.2-10mm的颗粒。4.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述糖苷酶粗酶液中糖苷酶活力以β-葡萄糖苷酶计为1.0-1.2U/mL。5.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述糖苷酶粗酶液制备方法为：将米根霉GDMCCNo:60145接种于发酵培养基中，于28-30℃、200-250r/min恒温振荡条件下培养3-5d，发酵液过滤，取滤液即为糖苷酶粗酶液；所述发酵培养基终浓度组成为：酵母浸出粉9-12g/L，蛋白胨5-7g/L，麦芽糖8-11g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，溶剂为自来水，初始pH6.0-7.0。6.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述滤饼烘干条件为85-105℃、10-12h。7.如权利要求1所述提高槐角中染料木素含量的方法，其特征在于所述米根霉GDMCCNo:60145在发酵前，需要先经平板培养基活化培养制备孢子，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈翔，梅建凤，卢蓝天，陈才军，李彬，应国清，
申请(专利权)人：舟山市食品药品检验检测研究院，浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33