一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法技术

本发明专利技术公开了一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，包括如下步骤：(1)提取：洋刀豆研磨成粉，筛分后加入提取液，充分搅拌，使洋刀豆粉末中脲酶全部浸提，将浸提液在室温下离心，收集上清液；(2)粗沉淀：将上清液静置冷藏，离心，收集沉淀，得到脲酶粗沉淀；(3)冷却结晶：将脲酶粗沉淀溶于柠檬酸钠缓冲液中，搅拌至完全溶解，离心，收集上清液，得到蛋白质溶液；向蛋白质溶液中缓慢加入沉淀剂溶液，混合均匀后开始结晶，得到结晶溶液，将结晶溶液离心分离，收集脲酶晶体沉淀，冷冻干燥，得到纯度超过96％的脲酶产品。本发明专利技术操作简单，工艺过程时间短，能耗低，制备过程均采用常规固液分离手段，脲酶总活性回收率达到60％以上。

A Crystallization Extraction Method of Urease from Canadian Bean

The invention discloses a method for crystallization extraction of urease in carambola beans, which comprises the following steps: (1) extraction: grinding carambola beans into powder, adding extract after sieving, fully stirring, so that urease in carambola beans powder can be completely extracted, centrifuging the extract at room temperature, collecting supernatant; (2) crude precipitation: static storage, centrifugation, collection and precipitation, obtaining crude precipitation of urease;\uff08 3) Cooling crystallization: the crude precipitation of urease is dissolved in sodium citrate buffer solution, stirred until completely dissolved, centrifuged, supernatant is collected, protein solution is obtained; the precipitator solution is slowly added to the protein solution, the mixture is evenly mixed, and then crystallization solution is obtained. The crystallization solution is centrifuged and separated, the urease crystals are collected, and the purity of urease is over 96% is obtained by freeze-drying. Products. The method has the advantages of simple operation, short process time, low energy consumption, conventional solid-liquid separation method is used in the preparation process, and the total activity recovery rate of urease reaches more than 60%.

【技术实现步骤摘要】
一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法
本专利技术涉及结晶
，尤其是一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法。
技术介绍
脲酶作为一种重要的生物制剂，广泛分布于植物的种子中，以大豆和洋刀豆中的含量最为丰富。脲酶是一种寡聚酶，能特异性地催化尿素水解释放出氨和二氧化碳，其催化反应速率比无脲酶存在时的非催化反应速率高出1000多倍，广泛应用于农业，医药行业等领域。在畜牧业方面，脲酶在牛羊等反刍动物的尿素氮循环中发挥着关键的作用；在医药行业，脲酶是临床诊断血清中尿素含量试剂盒中的一种重要组分；在食品行业，利用脲酶将尿素分解可检出牛乳粉中0.1％大豆粉含量；此外，在环保要求日益严格的今天，脲酶还可用于处理含有尿素的废水。随着我国经济发展，固定化脲酶技术的飞速进步，对脲酶的需求量也越来越大。脲酶的研究始于1926年，美国科学家萨姆纳从洋刀豆种子中首次提取出脲酶晶体，该工作也获得了诺贝尔奖的认可。我国豆类资源丰富，目前国内针对脲酶提取的研究报道主要集中于从大豆，黄豆等植物中提取和纯化脲酶，有研究报道关于黄豆脲酶的提取，是以干黄豆为原料，采用分级沉淀的方法对脲酶进行分离，最后进行SephadexG～150凝胶层本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，包括如下步骤：(1)提取：秤取洋刀豆研磨成粉，筛分后加入提取液，室温下将洋刀豆粉末和提取液充分搅拌，使洋刀豆粉末中脲酶全部浸提，然后将浸提液在室温下离心，收集上清液；(2)粗沉淀：将所述步骤(1)中的上清液静置冷藏，离心，收集沉淀，得到脲酶粗沉淀；(3)冷却结晶：将所述步骤(2)的脲酶粗沉淀溶于柠檬酸钠缓冲液中，搅拌至完全溶解，离心，收集上清液，得到蛋白质溶液；向蛋白质溶液中缓慢加入沉淀剂溶液，混合均匀后开始结晶，得到结晶溶液，将结晶溶液离心分离，收集脲酶晶体沉淀，冷冻干燥，得到纯度超过96％的脲酶产品。

【技术特征摘要】
1.一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，包括如下步骤：(1)提取：秤取洋刀豆研磨成粉，筛分后加入提取液，室温下将洋刀豆粉末和提取液充分搅拌，使洋刀豆粉末中脲酶全部浸提，然后将浸提液在室温下离心，收集上清液；(2)粗沉淀：将所述步骤(1)中的上清液静置冷藏，离心，收集沉淀，得到脲酶粗沉淀；(3)冷却结晶：将所述步骤(2)的脲酶粗沉淀溶于柠檬酸钠缓冲液中，搅拌至完全溶解，离心，收集上清液，得到蛋白质溶液；向蛋白质溶液中缓慢加入沉淀剂溶液，混合均匀后开始结晶，得到结晶溶液，将结晶溶液离心分离，收集脲酶晶体沉淀，冷冻干燥，得到纯度超过96％的脲酶产品。2.如权利要求1所述的一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，步骤(1)中所述提取液是质量分数为25～35％的丙酮溶液或乙醇溶液，其中溶剂为0.025mol/LpH6.0～7.0的柠檬酸钠缓冲溶液；所述提取液与洋刀豆粉末量的比例为：1L提取液：1kg洋刀豆粉末。3.如权利要求2所述的一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，所述步骤(1)中的洋刀豆研磨成粉后，用振动筛进行筛分，以除去颗粒度较大的不溶性杂质，洋刀豆粉末和提取液采用机械搅拌混合，搅拌速率为700rpm，搅拌时长为10～20min，所述机械搅拌的搅拌桨采用玻璃材质，浸提液在8000rpm下离心30min。4.如权利要求1所述的一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，步骤(2)中所述上清液的静置条件是：温度为4～6℃下静置4h；离心条件为4000rpm下离心60min。5.如权利要求1所述的一种洋刀豆中脲酶的结晶提取方法，其特征是，步骤(3)中所述柠檬酸钠缓冲液的pH值为6.0～7.0，离子强度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：于筱溪，杨宇平，黄方，吴一宁，刘敬平，孙永鹏，
申请(专利权)人：中国石油大学华东，
类型：发明
国别省市：山东,37