含有胶原酶的组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及酶工程领域，公开了含有胶原酶的组合物及其制备方法和应用。所述组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为100‑312.5:1‑5:5000‑25000:1。本发明专利技术公开的制备含有胶原酶的组合物的方法包括：混合VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶。本发明专利技术还公开了如上所述的组合物在从胰腺样品中分离单细胞中的应用。本发明专利技术能够实现单细胞的高收率和高活率提取，特别是胰腺组织，攻克了现有胰腺组织单细胞收率和活率较低的难题。

Composition Containing Collagenase and Its Preparation Method and Application

The invention relates to the field of enzyme engineering, and discloses a composition containing collagenase, a preparation method and application thereof. The composition comprises type VIII collagenase, neutral protease, trypsin inhibitor and deoxyribonuclease, in which the ratio of the enzymatic activity units of the type VIII collagenase, neutral protease, trypsin inhibitor and deoxyribonuclease is 100.5:1 5:5000 25000:1. The method for preparing compositions containing collagenase disclosed by the invention includes mixing type VIII collagenase, neutral protease, trypsin inhibitor and deoxyribonuclease. The invention also discloses the application of the above-mentioned composition in isolating single cells from pancreatic samples. The invention can realize high yield and high activity extraction of single cell, especially pancreatic tissue, and overcome the problem of low yield and low activity of single cell of existing pancreatic tissue.

【技术实现步骤摘要】
含有胶原酶的组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及酶工程领域，具体涉及含有胶原酶的组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
胰腺是人体中兼具内分泌和外分泌功能的器官。组织学上包含胰岛细胞、腺泡细胞、导管细胞以及间质细胞等多个细胞组分。胰腺产生分泌的胰液中含有胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶等多种消化酶。随着近年来单细胞分析技术的兴起，人们对与人体组织器官的研究从不同成分混合，互相干扰的整体组织分析逐渐深入到对构成组织器官的单个细胞的研究，其重要性不言而喻。而在胰腺研究领域，由于胰腺器官大体上柔软而脆弱、组织学上成分复杂且因为强效的胰酶而容易发生自身消化，使得胰腺单细胞研究往往止步于第一步——也即可供分析的胰腺组织单细胞的获取。人体或动物模型组织器官单细胞分离方法，从最初的毛细管吸取，到流式分选再到微流体技术，众多的单细胞分离技术在不同的组织当中或多或少都取得了较为满意的结果，但在胰腺组织上则差强人意。通过查阅文献可知，目前研究人员在分离小鼠胰腺癌单细胞时，大多采用以II型胶原酶为主的酶消化解离方法，但是，胰腺单细胞研究者均表示在胰腺单细胞分离时遇到了极大的挑战，要么单细胞收率不高，要么细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有胶原酶的组合物，其特征在于，该组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为100‑312.5:1‑5:5000‑25000:1。

【技术特征摘要】
1.一种含有胶原酶的组合物，其特征在于，该组合物含有VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶的酶活力单位之间的比值为100-312.5:1-5:5000-25000:1。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述中性蛋白酶为DispaseII；和/或，所述脱氧核糖核酸酶为DNaseI。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述组合物还含有溶剂，相对于每毫克的VIII型胶原酶，所述溶剂的含量为0.1-12.5mL。4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述溶剂为含有4-10体积％胎牛血清的磷酸盐缓冲液。5.一种制备含有胶原酶的组合物的方法，其特征在于，该方法包括：混合VIII型胶原酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂和脱氧核糖核酸酶，其中，所述VIII型胶原酶、中性...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文铭，彭俊雅，陈澔，黄丹，刘路路，洪夏飞，丛林，李冬晶，赵玉沛，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11