The invention discloses a N2a cell line knocking out zDHHC17 gene and its construction method and kit. The method is a construction method using CRISPR Cas9 system, which can take into account both quality and efficiency, and is accurate and efficient. Because zDHHC17 is an important palmitoyl modifying enzyme, it affects the function of the target protein by regulating the palmitoylation modification; zDHHC17, also known as Huntington Interaction Protein (Hip14), is closely related to the pathogenesis of Huntington disease. N2a cell lines knocked out of zDHHC17 gene are easy to amplify and culture, provide a large number of biological samples, and facilitate the discovery and study of target proteins. It is also easy to specifically study the regulatory function of target proteins and related signaling pathways. Therefore, the N2a cell line knocking out zDHHC17 gene can be used to study the function of palmitoylation substrates and the pathogenesis of Huntington disease.
【技术实现步骤摘要】
敲除zDHHC17基因的N2a细胞系及其构建方法和试剂盒
本专利技术属于生物
,涉及一种敲除zDHHC17基因的N2a细胞系及其构建方法和试剂盒。
技术介绍
N2a细胞全称mouseneuroblastomaN2acells,也被称为Neuro-2a,是小鼠来源神经瘤母细胞。该细胞贴壁良好,多数成神经元样,具有轴突样结构;该细胞系主要用于实验室培养该细胞系作为体外病理研究的细胞模型;用于神经突增生、神经毒性、阿尔兹海默症和哺乳动物细胞系不对称分裂的研究。棕榈酰化修饰是一种可逆的蛋白质翻译后脂化修饰,影响蛋白质的结构和稳定性,调节蛋白的互作,转运及蛋白质的膜定位。人的棕榈酰化修饰由23种棕榈酰转移酶(zDHHCs)介导。棕榈酰化修饰在神经细胞中广泛存在,调节神经细胞的生长发育、细胞分化、突触的可塑性,并参与多种神经系统疾病的发生。亨廷顿疾病(HD)是一种常染色体显性遗传疾病,来源于染色体4p16.3短臂亨廷顿基因(HTT)中延伸的CAG重复(36以上重复)。亨廷顿疾病(HD)对人的神经功能有广泛的影响,引起大脑神经细胞渐进性退化,通常表现为行动障碍,认知及精神障碍。zDHHC17是棕榈酰化酶DHHC家族的一个重要成员。DHHC家族蛋白是一类重要的翻译后棕榈酰化修饰酶,在调节蛋白质的膜定位,蛋白质的分拣及蛋白质折叠和稳定性等重要生理过程中起重要作用。相关研究表明DHHC活性紊乱与神经疾病相关。zDHHC17又称为亨廷顿蛋白互作蛋白(Hip14),能通过N端锚蛋白重复结构域(ANK)与亨廷顿蛋白(HTT)结合,调节HTT的棕榈酰化,参与亨廷顿疾病的发病过程 ...
【技术保护点】
1.构建敲除zDHHC17基因的N2a细胞系的方法,其特征在于,所述方法为基于CRISPR‑Cas9系统的构建方法。
【技术特征摘要】
1.构建敲除zDHHC17基因的N2a细胞系的方法,其特征在于,所述方法为基于CRISPR-Cas9系统的构建方法。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述方法以SEQIDNO:1所示zDHHC17基因序列中符合5′-20N-NGG-3′或5′-CCN-20N-3′序列排列规则的序列中的"20N"所示序列作为靶序列;N为A或T或C或G。3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述靶序列为SEQIDNO:1所示zDHHC17基因序列的第264-283位或第298-317位。4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤(A)和(B):(A)包括如下步骤(a1)-(a3):(a1)合成名称为正向单链DNA1和名称为反向单链DNA1的两个单链DNA;所述正向单链DNA1的序列如SEQIDNO:2所示;所述反向单链DNA1的序列如SEQIDNO:3所示;(a2)将所述正向单链DNA1和所述反向单链DNA1进行退火反应,得到双链DNA1;(a3)将所述双链DNA1连接到pX458质粒的限制性内切酶BbsI的切割位点处,得到的重组质粒记为pX458-zDHHC17-1;(B)包括如下步骤(b1)-(b4):(b1)合成名称为正向单链DNA2和名称为反向单链DNA2的两个单链DNA;所述正向单链DNA2的序列如SEQIDNO:4所示;所述反向单链DNA2的序列如SEQIDNO:5所示;(b2)将所述正向单链DNA2和所述反向DNA2进行退火反应,得到双链DNA2;(b3)将所述双链DNA1连接到pX458质粒的限制性内切酶BbsI的...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘慧聪,饶木顶,焦雪苗,吴灿,孔二艳,张中健,
申请(专利权)人:新乡医学院,
类型:发明
国别省市:河南,41
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