糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法，涉及生物技术领域。该提取试剂盒由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：所述清洗液A的成分如下：缓冲液PH7.0、氯化钠、氯化钾、叠氮钠；所述清洗液B的成分如下：HEPS Buffe、氯化锂、硫酸镁、TCEP；所述洗脱液的成分如下：硫酸铵、氯化铵、曲拉通、乙二醇；所述储存液的成分如下：甘油、TCEP、稳定剂、叠氮钠。本发明专利技术对操作设备要求低，且提取的糖化血红蛋白可以长期保存。

Extraction kit and method of glycosylated hemoglobin

The invention discloses a glycosylated hemoglobin extraction kit and an extraction method, which relates to the field of biotechnology. The extraction kit consists of cleaning solution A, cleaning solution B, eluent and storage solution, in which the components of the cleaning solution A are as follows: buffer solution PH7.0, sodium chloride, potassium chloride and sodium azide; the components of the cleaning solution B are as follows: HEPS Buffe, lithium chloride, magnesium sulfate, TCEP; the components of the eluent are as follows: ammonium sulfate, ammonium chloride, Tranton and ethylene glycol; The components are as follows: glycerol, TCEP, stabilizer and sodium azide. The present invention has low requirement for operating equipment, and the extracted glycated hemoglobin can be preserved for a long time.

【技术实现步骤摘要】
糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
正常人血液中血红蛋白共有三种形式：HbA，HbF，HbA2，一般成人红细胞中HbA是主要成分。通过使用层析法进行血红蛋白分离，可分离出三种含糖血红蛋白：HbAla、HbAlb和HbAlc，这三种糖化血红蛋白共同组成了糖化血红蛋白。糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白和血糖结合产生，当糖化血红蛋白值越高，表明血红蛋白和血糖结合越多，糖尿病病情愈发严重。人体内红细胞一般能够持续存在120天，糖化血红蛋白水平一般情况下反应了检测前120天平均血糖水平。目前针对糖化血红蛋白提取方法主要是有非固定化胶条与聚丙烯酰胺等电聚焦的融合技术分离纯化糖化血红蛋白，离子交换层析分离提取糖化血红蛋白，自由流等电聚焦技术提取糖化血红蛋白等。但是上述三种技术对设备的要求高，并且提取的糖化血红蛋白回收后不可长时间保存，不利于科学研究。
技术实现思路
本专利技术提供一种对操作设备要求低，且提取的糖化血红蛋白可以长期保存的糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供技术方案如下：本专利技术提供一种糖化血红蛋白提取试剂盒，由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：所述清洗液A的成分和含量如下：所述清洗液B的成分和含量如下：所述洗脱液的成分和含量如下：所述储存液的成分和含量如下：进一步的，所述清洗液A和清洗液B的最终PH值为6.95。进一步的，所述清洗液A的成分和含量如下：进一步的，所述缓冲液为磷酸钠或磷酸钾。进一步的，所述清洗液B的成分和含量如下：本专利技术还提供一种糖化血红蛋白提取方法，采用权利要求1至5中任一所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，所述提取方法包括：步骤1：对采取的血液进行室温放置半小时；步骤2：在采取的血浆中加入所述清洗液A进行37度处理，之后加入所述清洗液B，颠倒混匀进行离心弃上清，重复操作至上清无色，得到第一沉淀物，其中，所述血浆、清洗液A和清洗液B三者之间的体积比为：血浆：清洗液A：清洗液B＝1:2：3；步骤3：在所述第一沉淀物中加入清洗液B进行混匀处理，之后进行离心弃上清，得到第二沉淀物，其中，所述第一沉淀物与清洗液之间的体积比为1：2；步骤4：在所述第二沉淀物中加入所述洗脱液进行混匀处理，离心上清，得到第三沉淀物，其中，所述第二沉淀物与洗脱液的比例为1:3；步骤5：在所述第三沉淀物中加入储存液进行37度处理，离心保留上清，其中，所述第二沉淀物与洗脱液的比例为1:10；步骤6：对所述步骤5中的上清进行混匀操作，离心保留上清，最后得到的上清即为糖化血红蛋白溶液。进一步的，所述步骤2和步骤3中的离心条件为5000转/分，15～25min。进一步的，所述步骤4中的离心条件为2000转/分，8～15min。进一步的，所述步骤5中的离心条件为8000转/分，15～25min。进一步的，所述步骤6中的离心条件为12000转/分，15～25min。。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法，通过制备一种提取糖化血红蛋白检测试剂盒，利用分子间压力涨破红细胞释放糖化血红蛋白，并利用洗脱液将糖化血红蛋白洗脱下来，利用储存液进行溶解，得到的糖化血红蛋白组分均一，能够达到检测要求。具体实施方式为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。实施例1：本专利技术的糖化血红蛋白提取试剂盒主要有由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：清洗液A的成分和含量如下：清洗液B的成分和含量如下：洗脱液的成分和含量如下：储存液的成分和含量如下：实施例2：本专利技术的糖化血红蛋白提取试剂盒主要有由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：清洗液A的成分和含量如下：清洗液B的成分和含量如下：洗脱液的成分和含量如下：储存液的成分和含量如下：实施例3：本专利技术的糖化血红蛋白提取试剂盒主要有由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：清洗液A的成分和含量如下：清洗液B的成分和含量如下：洗脱液的成分和含量如下：储存液的成分和含量如下：采用上述三个实施例的试剂盒对糖化血红蛋白进行提取，提取方法可以采用以下步骤：步骤1：对采取的血液进行室温放置半小时；步骤2：在采取的血浆中加入所述清洗液A进行37度处理，之后加入所述清洗液B，颠倒混匀进行离心弃上清，重复操作至上清无色，得到第一沉淀物，其中，所述血浆、清洗液A和清洗液B三者之间的体积比为：血浆：清洗液A：清洗液B＝1:2：3；该步骤中离心条件优选为5000转/分，离心时间15～25min，优选20min。步骤2一般重复两次，两次之后如果发现上清显示红色可以增加次数。步骤3：在所述第一沉淀物中加入清洗液B进行混匀处理，之后进行离心弃上清，得到第二沉淀物，其中，所述第一沉淀物与清洗液之间的体积比为1：2；该步骤中离心条件优选为5000转/分，离心时间15～25min，优选20min。步骤4：在所述第二沉淀物中加入所述洗脱液进行混匀处理，离心上清，得到第三沉淀物，其中，所述第二沉淀物与洗脱液的比例为1:3；步骤4中的离心条件优选为2000转/分，离心时间8～15min，优选为10min。步骤5：在所述第三沉淀物中加入储存液进行37度处理，离心保留上清，其中，所述第二沉淀物与洗脱液的比例为1:10；步骤5中的离心条件优选为8000转/分，离心时间15～25min，优选20min。步骤6：对所述步骤5中的上清进行混匀操作，离心保留上清，最后得到的上清即为糖化血红蛋白溶液。步骤6中的离心条件优选为12000转/分，离心时间15～25min，优选20min。糖化血红蛋白均一性检测：对采用上述3个实施例的提取试剂盒提取的糖化血红蛋白分别进行均一性分析，利用全自动生化分析仪日立7180进行操作，糖化血红蛋白检测试剂盒为日本藤仓糖化血红蛋白检测试剂盒(胶乳增强法)，具体操作按照说明书进行，得到的结果如表1所示：表1由表1可以看出，实施例1～3提取的糖化血红蛋白的变异系数均不超过0.5％，则提取的糖化血红蛋白组分均一，能够达到检测标准要求。糖化血红蛋白稳定性能检测：对采用上述3个实施例提取的糖化血红蛋白进行稳定性检测，对照物层析法提取的糖化血红蛋白，两者均在2-8度条件下放置，利用全自动生化分析仪日立7180进行操作，糖化血红蛋白检测试剂盒为日本藤仓糖化血红蛋白检测试剂盒(胶乳增强法)，具体操作按照说明书进行。检测结果如表2所示:表2本专利技术的提取试剂盒提取的糖化血红蛋白稳定性检测结果由表2可以看出，实施例1～3提取的糖化血红蛋白在2-8度条件下放置，可放置150天基本不发生变化，层析法提取物放置不到50天的时间就能发生约20％幅度的降低，进而表明本专利技术试剂盒取的糖化血红蛋白的稳定性超过了其他方式提取物。稳定性检测通过购买的糖化血红蛋白标准品，将实施例1～2中的提取试剂盒放在不同条件下处理的进行统一处理和操作，分别对复融后的糖化血红蛋白标准品进行提取，为了保证检测结果准确性，我们将试剂盒按照统一校准品进行校准，然后检测标准品提取回收率，检测结果如表3、表4所示：表3本专利技术的提取试剂盒37度和零下-20度处理后检测结果表4本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：所述清洗液A的成分和含量如下：

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：所述清洗液A的成分和含量如下：所述清洗液B的成分和含量如下：所述洗脱液的成分和含量如下：所述储存液的成分和含量如下：2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液A和清洗液B的最终PH值为6.95。3.根据权利要求2所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液A的成分和含量如下：4.根据权利要求3所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸钠或磷酸钾。5.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液B的成分和含量如下：6.一种糖化血红蛋白提取方法，其特征在于，采用权利要求1至5中任一所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，所述提取方法包括：步骤1：对采取的血液进行室温放置半小时；步骤2：在采取的血浆中加入所述清洗液A进行37度处理，之后加入所述清洗液B，颠倒混匀进行离心弃上清，重复操作至上清无色，得到第一沉淀物，其中，所述血浆、清洗液A和清洗液B三者之间的体积比为：血浆：清洗液A：清洗液B＝...

【专利技术属性】
技术研发人员：李静，李建营，甘宜梧，罗维晓，李志明，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37