The invention relates to the field of protein and biotechnology, in particular to the preparation and application of an artificial metal hydrolase based on a metal ion myoglobin mutant complex. The invention takes myoglobin as protein molecular design skeleton, introduces glutamic acid around active center heme, adds Mn II or Co II ions to form metal ion protein complex, and constructs an artificial metal enzyme with catalytic function, namely a novel artificial metal hydrolase. The L29E Mb+MnII (or CoII) metalloproteinases in the present invention have better ability of hydrolysis and cleavage of DNA than wild type Mb or single L29E Mb protein reported in literature, and the catalytic efficiency is greatly improved, and the catalytic function is not disturbed by O2 in the air.
【技术实现步骤摘要】
一种基于金属离子-肌红蛋白突变体复合物的人工金属水解酶的制备及应用
本专利技术涉及蛋白质与生物
，尤其涉及一种肌红蛋白突变体与金属离子复合物作为核酸水解酶的应用。
技术介绍
核酸是生物体中最重要的组成物质，是由核苷酸通过磷酸二酯键聚合形成的多核苷酸长链。核酸的切割是通过化学反应将长链的核酸分子断裂成较短的碎片。人工核酸切割剂的研究是上世纪八十年代发展起来的生物无机化学领域的重要分支，人工核酸切割试剂可作为多种天然核酸酶的模型，也可作为化疗药物用于治疗肿瘤及遗传疾病，还可以作为DNA结构探针用于研究DNA结构及蛋白质与DNA的相互作用等。在体外重新组合成具有某种新功能或比原DNA序列更为有效的重组DNA分子的过程，涉及到对DNA序列进行切割、修饰和连接等复杂操作。然而在生理和非酶条件下，DNA的磷酸二酯键非常稳定，不易被水解。在过去的几十年，基因工程和蛋白质工程技术的迅猛发展，多核金属配合物用作核酸切割试剂的研究取得了引人注目的进展。据研究，约1/3蛋白质与特定金属离子结合来维持其结构和生物功能，这类蛋白称之为金属蛋白。金属酶的活性部位一般都含有两个或多个协同...
【技术保护点】
1.一种肌红蛋白突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.一种肌红蛋白突变体，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。2.权利要求1所述的肌红蛋白突变体与金属离子复合物在制备裂解核酸的制剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核酸为DNA。4.一种裂解核酸的制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的肌红蛋白突变体和金属离子，所述金属离子为Zn2+、Cu2+、Ni2+、Co2+或Mn2+。5.根据权利要求4所述的制剂，其特征在于，权利要求1所述的肌红蛋白突变体与金属离子的摩尔比为1:(0.5～2)。6.根据权利要求4所述的制剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：林英武，史振华，杜可杰，
申请(专利权)人：南华大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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