一种肌红蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长500nm处吸光度变化的速度，从而测算出肌红蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
，具体地说涉及一种检测人肌红蛋白的检测试剂盒。
技术介绍
肌红蛋白存在于肌肉中，心肌中含量特别丰富，肌红蛋白是目前人类研究最多的蛋白质之一。肌红蛋白是哺乳动物肌肉中运输氧的蛋白质。它由一条多肽链构成，有153个氨基酸残基和一个血红素辅基，分子量为17 800。具有在肌细胞内转运和贮存氧的功能。人体心肌、骨骼肌内含有大量肌红蛋白，正常人的血液中很少，主要由肾脏代谢并排泄。肌 红蛋白增高见于急性心肌梗死早期、急性肌损伤、肌营养不良、肌萎缩、多发性肌炎、急性或慢性肾功能衰竭、严重充血性心力衰竭和长期休克等。肌红蛋白更是检测急性心肌梗死(AMI)的早期指标，在AMI后1_2小时，在患者血清中的浓度即迅速增加，6-9 h达到高峰。一旦患者诊断为AMI且已进行相应治疗，主要的是进一步评价患者在住院期间是否有并发症及再梗死。此时用肌钙蛋白可能是不适宜的，因为疾病发作后肌钙蛋白的长期释放模式可能掩饰发生额外新的损伤。而肌红蛋白在发作后第一天内即返回到基线浓度，当有再梗死时，则又迅速上升，形成"多峰"现象，可以反映局部缺血心肌周期性自发的冠脉再梗塞和再灌注。肌红蛋白测定方法很多，其敏感性和特异性不同。分光光度法是1963年Reynafarje等首先建立，将待测肌红蛋白转变为CO化合物，测其中两个最大吸收峰(538nm，568nm)，计算肌红蛋白含量，但敏感度较差，故仅适用于含量较高标本的检测。用HPLC法测定血清或尿肌红蛋白最低检测限为2mg/L，线性范围为2(T3000mg/L。但需特殊设备，不适合中、小型医院开展。超滤法在测定肌红蛋白回收率时出现高度差异，而免疫检测法不受尿中其它蛋白质或颗粒性物质的影响，并且能准确地测定尿中肌红蛋白含量。用超滤-浸溃片法定性地检测尿肌红蛋白，对肌红蛋白继发肾功能障碍的患者可能造成误诊，特别是在尿肌红蛋白< 60000 μ g/L时，上述方法均不适用于临床常规应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肌红蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。本专利技术的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。为实现上述目的，本专利技术提供的试剂盒组成为 试剂Rl :缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白； 试剂R2:缓冲液、结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。本专利技术提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下 (a)按下列比例配制好试剂试剂Rl Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 叠氮钠1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200-220mmol/L 结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v) 吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠O. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l_5mmol/L (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸光度变化值计算出样本中肌红蛋白的浓度。具体实施例方式下述实施例是为了更详细的解释本专利技术，但不应理解为本专利技术局限于此。实施例I : 本专利技术的试剂盒举例是双试剂，其中 试剂Rl Tris 缓冲液 200mmol/L 聚乙二醇8 mmol /I, 叠氮钠5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200mmol/L 结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v) 吐温 _20Smmol /I, 叠氮钠3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。实施例2 :试剂盒使用方法。I.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中 试剂Rl Tris 缓冲液 200mmol/L 聚乙二醇8 mmol /I,叠氮钠5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200mmol/L 结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v) 吐温 _20Smmol /I, 叠氮钠3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。2.全自动生化仪参数设置 (a)检测温度37°C (b)检测波长主波长为500nm;副波长为700 nm ； (c)反应时间8分20秒，其中，温育时间3分钟，反应时间100秒，检测时间220秒。3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成) (a)取150μ L试剂I和10 μ L血清样本混匀； (b)将混匀后的溶液在37°C温育3分钟；(c)添加50μ L试剂2，反应100秒后，在500nm条件下检测220秒的吸光度变化。4.通过读取的连词吸光度值的计算出肌红蛋白的浓度。本专利技术具有的优点 该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。权利要求1.一种肌红蛋白检测试剂盒，其组成为试剂R1、试剂R2， 其中 a、试剂Rl 包括200-220mmol/L Tris 缓冲液、5-10 mmol/L 聚乙二醇、1_5 mmol/L 叠氮钠、l-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、l_5mmol/L牛血清白蛋白； b、试剂R2200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、l_5mmol/L 吐温 _20、0. 5-3 mmol/L 叠氣纳、l_5mmol/L 乙二胺四乙酸纳、l-5mmol/L 牛血清白蛋白。2.权利要求I的试剂盒，其特征在于试剂R2中的肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为10. 5mg/ml的肌红蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒(直径50_100nm),加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至O. 5%，并加入O. 1-0. 3 mmol/L叠氮钠。3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为 (a)按下列比例配制好试剂 试剂Rl Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 叠氮钠1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200-220mmol/L 结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v) 吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠0. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l_5mmol/L (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肌红蛋白检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：a、试剂R1包括：200？220mmol/L？Tris缓冲液、5？10？mmol/L聚乙二醇、1？5？mmol/L叠氮钠、1？5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1？5mmol/L牛血清白蛋白；b、试剂R2：200？220mmol/L？Tris缓冲液、结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、1？5mmol/L吐温？20、0.5？3？mmol/L叠氮钠、1？5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1？5mmol/L牛血清白蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢兵，
申请(专利权)人：北京恩济和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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