AktIV的新用途制造技术

本发明专利技术涉及Akt IV在制备缓解炎性疼痛药物中的应用。本发明专利技术将三个剂量的Akt IV在BmK I注射前30分钟注入大鼠鞘内L5‑L6骶骨间隙，研究不同剂量Akt IV在实验性自发痛、阵发性痛觉大发作、双侧机械痛敏和单侧热痛敏等现象中的缓解作用。该项发明专利技术建立在实验性动物炎症痛模型上，为研究Akt信号途径相关的镇痛分子机制及研发新型镇痛药物提供了依据。

【技术实现步骤摘要】
AktIV的新用途
本专利技术涉及AktIV的新用途。
技术介绍
疼痛分为生理性疼痛和病理性疼痛。前者是机体保护机制，而病理性疼痛通常发病机制复杂，病程长，恢复慢，往往长期持续，因此也可称为慢性痛，可由外伤、感染、炎症和肿瘤等各种病因引起，导致患者机体功能失调、康复困难以及精神抑郁，已成为当前危害人们健康和影响人们生活质量的重要原因。其临床症状表现为自发痛（Spontaneouspain），痛觉过敏(Hyperalgesia)和异常疼痛(Allodynia)等。自发痛指无外来刺激自发产生的疼痛；痛觉过敏为机体对伤害性刺激产生夸大的痛反应；而异常疼痛则指非伤害性刺激（如轻触）便可产生强烈的疼痛感受。此外，发生于损伤区的痛敏称为原发性痛敏（Primaryhyperalgesia），包括机械和热痛敏；发生于邻近损伤区的痛敏称为继发性痛敏(Senconderyhyperalgesia)；机体损伤对侧的痛觉过敏称为镜像痛敏(Mirrorimagehyperalgesia)。炎症是引起慢性痛的最主要的病因之一，导致损伤区红（redness）、肿（swelling）、热（warmth）、痛（pain）等表征，有时病灶去除或损伤痊愈后疼痛依然存在。目前慢性痛在临床上仍然缺乏有效的缓解策略，现有的药物如吗啡、非甾体类抗炎药等存在成瘾、镇痛效果不佳及毒副作用等问题。然而，当前镇痛新药的开发存在新药物分子发现困难，分子机理难以阐述及临床前评估推进缓慢等问题，使得开发现有药物库，利用已知药物寻求新的镇痛策略成为亟待之策。为了模拟人类慢性痛的临床症状，前人建立了若干不同类型的炎症痛和神经病理痛实验动物模型。虽然不同动物模型所模拟的临床症状有所不同，其致病机制也可能有着天壤之别。但其临床症状主要都表现为自发痛、痛觉过敏和触诱发痛。我们从东亚钳蝎粗毒中分离纯化得到单一成份BmKI，经大鼠足底皮下注射可剂量依赖性地诱发大鼠产生痛反应。经长期研究积累，已成为国内外认可的经典炎症痛模型。利用这一炎症痛模型，可同时模拟诸多临床病征，并为理解致病机制，筛选新型抗炎镇痛药物提供良好的研究载体。Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，又被称为蛋白激酶B（proteinkinaseB，PKB）。Akt是PI3K/Akt信号通路的重要因子，在细胞生长与存活中起着关键作用，与多种肿瘤的发生密切相关。临床上已经将阻断该通路作为治疗癌症的新策略，因此已筛选出多个有效的小分子Akt抑制剂。辉瑞、默克公司等公司均有报道已经展开Akt抑制剂作为治疗药物的临床前实验，虽然还未有此类药物上市，但是其已是药物开发的重点方向。AktIV一种具有细胞渗透性的脂类小分子，能够可逆性地结合于Akt上的ATP结合位点，阻止Akt与PI3K（磷脂酸肌醇-3-激酶，phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）的结合，从而阻断Akt信号通路。目前报道表明Akt激酶在多种疼痛动物模型中存在异常表达的现象。由此我们认识到Akt信号通路除了参与肿瘤发生，其在痛觉的中枢调控中也有关键性的作用。我们的研究已经证实了Akt信号通路参与BmKI诱导的炎症痛，AktIV作为Akt激酶的抑制剂可以有效抑制BmKI诱导炎症痛动物模型的疼痛反应。表明AktIV能够为治疗炎症痛提供新的治疗策略和药物设计依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种AktIV在制备缓解炎性疼痛药物中的应用。上述的炎症痛模型涉及实验性自发痛相关反应、实验性镜像机械痛敏和热痛敏。本专利技术将Akt抑制剂AktIV在BmKI注射前30分钟鞘内注入大鼠脊髓L5-L6间隙，观察AktIV对大鼠自发痛行为、双侧机械痛敏和热痛敏的缓解情况。实验表明，5μg/10μl和10μg/10μl浓度剂量的AktIV均可显著抑制大鼠的每5分钟自发缩足反射次数，2小时总的缩足反射次数，2小时总的添咬抬足时间以及2小时内的痛觉大发作次数。且AktIV对大鼠自发痛行为的抑制作用可持续至少2小时。而1μg/10μl浓度的AktIV对上述痛行为无明显抑制效应。诱发痛方面，5μg/10μl和10μg/10μl的AktIV均可剂量依赖性地抑制BmKI诱导的镜像机械痛敏和单侧热痛敏，而不影响对侧热痛敏。1μg/10μl的AktIV对诱发痛的抑制差异不显著。本专利技术中采用天然蝎毒素BmKI构建的诱导实验性炎症痛模型，新颖之处在于该模型不仅能够稳定的模拟临床常见的自发痛、热痛敏、机械痛敏等症状，更能很好的模拟临床镜像机械痛症状和阵发性痛觉大发作症状，较其他模型的镇痛研究有着更高的研究价值。附图说明：图1为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后缓解自发缩足反应持续时程。图2为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后减少痛觉大发作总次数。图3为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后减少自发缩足总次数。图4为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后减少抬足舔咬总时间。图5为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后缓解损伤侧机械痛敏。图6为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后缓解对侧机械痛敏。图7为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后缓解损伤侧热痛敏。图8为大鼠鞘内注射不同剂量AktIV后不影响对侧正常热痛敏。具体实施方式：BmKI诱导炎症痛模型建立实验请参见BaiZT,LiuT,JiangF,ChengM,PangXY,HuaLM,ShiJ,ZhouJJ,ShuXQ,ZhangJW,JiYH.Phenotypesandperipheralmechanismsunderlyinginflammatorypain-relatedbehaviorsinducedbyBmKI,amodulatorofsodiumchannels.Exp.Neurol.,226(2010)159–172.实施例一：不同剂量AktIV缓解大鼠自发痛觉相关反应的观察在铺有一面玻璃镜的桌上放一高75cm支架，架上置一20×20×30cm3透明有机玻璃盒子，自桌上的镜中观察大鼠足底给药后的反应。药物注射前，将大鼠提前30分钟置于盒中适应实验环境。足底注射BmKI后，动物放回检测盒，持续观测自发痛行为。以每5分钟自发抬足次数、痛觉大发作（如嘶叫等）次数、抬脚总次数、舔咬抬足时间来评价伤害性自发痛反应。AktIV给药方式为BmKI注射前30分钟分别在大鼠鞘内L5-L6间隙注射剂量分别为1μg、5μg、10μg的10μl药品体系。AktIV对大鼠每5分钟自发抬足次数、痛觉大发作行为、抬脚总次数以及抬足添咬总时间的缓解情况详见图1~图4。结果表明，5μg/10μl和10μg/10μl浓度剂量的AktIV均可显著抑制大鼠的自发缩足反射次数，抬脚总次数、舔咬抬足时间以及痛觉大发作次数。AktIV对大鼠自发痛行为的抑制作用可持续至少2小时。1μg/10μl浓度的AktIV对上述痛行为无明显抑制效应。自发痛相关反应可很好的模拟临床急性痛症状，阵发性痛觉大发作行为可以很好的模拟临床阵发性痛觉发作症状。实施例二：不同剂量AktIV缓解大鼠双侧机械痛的观察实例一中自发痛基本消失后，将大鼠置于在钢丝网格(1cm2)上的有机玻璃盒(20×20×30cm3)中。用一系列VonFrey纤维(58011,StoeltingCo.,USA)（从0.6到26g）来本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Akt IV在制备缓解炎症疼痛药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.AktIV在制备缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：上海国际医学中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31