The invention discloses a construction and application method of a lentivirus expression plasmid carrying cytochrome C gene. The cytochrome C gene was inserted at not I and BamH I polyclonal sites of pLenti Mcherry Puro vector. The constructed recombinant plasmid pLenti Cychrome C Emcherry Puro was used to transfect MDA MB 453 cells. The stable cytochrome C gene transfected cell lines were obtained through screening and identification of purinomycin. \u8be5\u91cd\u7ec4\u8d28\u7c92\u542b\u7ea2\u8272\u8367\u5149\u86cb\u767dmcherry\uff0c\u4fbf\u4e8e\u5728\u8367\u5149\u663e\u5fae\u955c\u4e0b\u89c2\u5bdf\u9633\u6027\u7ec6\u80de\uff1b\u8be5\u91cd\u7ec4\u8d28\u7c92\u5e26\u6709\u560c\u5464\u9709\u7d20\u6297\u6027\u57fa\u56e0\u3001\u6c28\u82c4\u897f\u6797\u6297\u6027\u57fa\u56e0\u6807\u7b7e\uff0c\u53ef\u5728\u539f\u6838\u8868\u8fbe\u65f6\u6216\u771f\u6838\u8868\u8fbe\u65f6\u52a0\u5165\u6c28\u82c4\u897f\u6797\u6216\u560c\u5464\u9709\u7d20\u8fdb\u884c\u7b5b\u9009\u3002 The plasmid lays a solid foundation for further study of the biological characteristics and functions of cytochrome C gene and for the development of anti-cancer drugs.
【技术实现步骤摘要】
一种携带cytochromeC基因慢病毒表达质粒的构建及应用方法
本专利技术属于医学分子生物学领域,具体涉及一种携带cytochromeC基因慢病毒表达质粒的构建及应用方法。
技术介绍
基因治疗是将目的基因通过基因转移技术导入靶细胞,利用其调节靶细胞发挥正常功能;相比于传统治疗方式,基因治疗极大的减轻了病人的痛苦,尤其在肿瘤基因治疗领域显示出了显著性的优势,是近年来肿瘤治疗领域的研究热点之一。从1989年美国批准了世界上首例基因治疗临床试验以来,全球共批准了1384项肿瘤基因治疗方案进入临床试验阶段。2004年1月,我国自主研发的用于头颈部肿瘤的基因治疗药物Gendicine被批准上市,它是全球第一个上市的基因治疗产品。此外,我国还有13个针对恶性肿瘤的基因治疗产品进入了临床试验,显示出肿瘤基因治疗是当前最热点、最重要的研究领域之一,将对传统制药业和疾病治疗模式产生深远的影响和冲击。目前应用于肿瘤基因治疗中的载体主要分为病毒载体和非病毒载体,非病毒载体的疗效和靶向性都较低。病毒载体中应用较多的主要有腺病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒载体等。腺病毒载体存在基因表达持续时间较短,重复给药易产生耐药性,且容纳外源基因片段较小等缺点;单纯疱疹病毒载体则具有高免疫原性等不足。与上述载体相比,慢病毒载体具有转染效率更高、外源基因可在宿主细胞内稳定存在和避免宿主细胞对外源基因的切割修饰等优点,也是基因治疗临床试验中广泛使用的载体,故本专利技术选择慢病毒载体作为介导外源基因转导靶细胞的“携带工具”。cytochromeC是由核基因编码,位于线粒体内外膜之间,是进化上最保守的蛋白 ...
【技术保护点】
1.一种携带cytochrome C基因慢病毒表达质粒的构建及应用方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)设计引物,进行cytochrome C基因的PCR扩增;(2)将pLenti‑Mcherry‑Puro载体用Not I和BamH I酶切,电泳,回收目的条带凝胶。(3)将cytochrome C基因与上述回收的载体pLenti‑Mcherry‑Puro目的条带凝胶连接,构建重组慢病毒表达质粒pLenti‑cytochrome C‑Emcherry‑Puro;(4)将重组慢病毒表达质粒pLenti‑cytochrome C‑Emcherry‑Puro转染乳腺癌MDA‑MB‑453细胞,对转染成功的阳性细胞株进行细胞免疫荧光鉴定。
【技术特征摘要】
1.一种携带cytochromeC基因慢病毒表达质粒的构建及应用方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)设计引物,进行cytochromeC基因的PCR扩增;(2)将pLenti-Mcherry-Puro载体用NotI和BamHI酶切,电泳,回收目的条带凝胶。(3)将cytochromeC基因与上述回收的载体pLenti-Mcherry-Puro目的条带凝胶连接,构建重组慢病毒表达质粒pLenti-cytochromeC-Emcherry-Puro;(4)将重组慢病毒表达质粒pLenti-cytochromeC-Emcherry-Puro转染乳腺癌MDA-MB-453细胞,对转染成功的阳性细胞株进行细胞免疫荧光鉴定。2.根据权利要求1所述一种携带cytochrome...
【专利技术属性】
技术研发人员:郭建军,檀军,田莹,赵帅,郑玉林,陈緖美,尹志勇,
申请(专利权)人:贵州大学,
类型:发明
国别省市:贵州,52
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