薄壳山核桃品种Sioux的特征序列、标记引物及鉴定方法技术

本发明专利技术涉及薄壳山核桃品种Sioux的多对高特异性的特征序列、分子特异性标记引物、以及一种能对薄壳山核桃品种Sioux进行快速、准确地鉴定的方法。所述分子特异性标记引物组序列如下：1)上游引物：5′‑AGTCAGAGTCGGAGTCGGAT‑3′下游引物：5′‑AGCCTAGCCTTGCAACCTTT‑3′2)上游引物：5′‑TGGTTCCTGCATAACACTCACA‑3′下游引物：5′‑GGTTCCAGATCACTTCCGCA‑3′3)上游引物：5′‑AGCGTGCGATTTCCTACGAA‑3′下游引物：5′‑AATTTTACCTGGGGTGGCGT‑3′本发明专利技术分子特异性标记引物可对薄壳山核桃品种Sioux进行快速的早期鉴别，方法简单、快捷、准确，是表观特征辨别薄壳山核桃品种所不可替代的分子手段。

Characteristic Sequence, Marker Primers and Identification Method of Carya pekinensis Sioux

The present invention relates to multiple highly specific characteristic sequences, molecular specific marker primers and a method for rapid and accurate identification of thin-shelled hickory Sioux. The sequence of the molecular-specific marker primer group was as follows: 1) upstream primer: 5'AGTCAGAGTCGTCGATCGTCGTCGTCGATGATGATGATGAT 3'downstream primer: 5 'AGCCTAGCCCCTAGCCTTGCCTTGCCTTGCCTTGCACAACCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAACACACACACACACA 3'downstream primer: 5' GGGGGTTGGGGGTTGATGATGATGATCATCTCTCCAGGGGCAGGCAGCAGTACGAA 3'downstream primers: 5 AATTTTACCTGGGGGGTGGGGGT The molecular specific marker primers of the invention can quickly identify the thin-shelled hickory cultivar Sioux in early stage. The method is simple, fast and accurate, and is an irreplaceable molecular means for identifying the thin-shelled hickory cultivar by its apparent characteristics.

【技术实现步骤摘要】
薄壳山核桃品种Sioux的特征序列、标记引物及鉴定方法本专利技术涉及薄壳山核桃品种Sioux的特征序列、分子特异性标记引物组合以及利用该分子特异性标记引物组合对薄壳山核桃品种Sioux进行特异性鉴定的方法。
技术介绍
薄壳山核桃（Caryaillinoënsis(Wangenh.)K.Koch）是胡桃科山核桃属中最有经济价值的树种；薄壳山核桃是典型的异交植物，现有生产实践发现，薄壳山核桃的品种配置是影响其产量的主要因素之一；美国是薄壳山核桃的原产地之一，也是中心产区，多年来，美国已选育命名的栽培品种约1000个；我国引种薄壳山核桃已有100多年历史，目前生产上常用的品种有几十个，多年的生产实践证明我国广大亚热带地区是薄壳山核桃的适生区；但是，我国现有薄壳山核桃产区面临的主要问题是产量低下和不稳定，造成这一现象的原因有多个方面，其中之一就是现有引进的品种尚缺乏明确的亲缘关系分析，再加上一些杂交后代定名的混乱，导致难以进行有效的亲本选择和合理配置，不便于品种鉴定、推广、交流及新品种的培育，因此着力从分子水平上开发出一些稳定、特异的DNA品种指纹标记是实现薄壳山核桃品种准确快速鉴定的科学途径；国内外已报导一些用于薄壳山核桃品种鉴定和亲缘关系分析的分子标记方法，比较好的有SSR分子标记法，但这些旧有的检测方法较为繁琐，且结果不稳定。
技术实现思路
本专利技术目的是提供薄壳山核桃品种Sioux的特征序列、分子特异性标记引物组合以及利用该分子特异性标记引物组合对薄壳山核桃品种Sioux进行特异性鉴定的方法；本专利技术采用的技术方案是：薄壳山核桃品种Sioux的特征序列组，其序列组如下：1)5′-AATTCAGTCAGAGTCGGAGTCGGATTTCATATTTAAACTTTGACAAAATCTGAGTCAAAATCAGATTTAGGGGATATCGACTCTGACTCTATCAGTGCTCAACCCTATGGTGAAACGTCACTTCCCCCTTGCTTGTGTCCGTCAATACATGTCCATGAACATATCATCAAATATTCTTAAGTCGAAACTGATGAAACATAAAGGTTGCAAGGCTAGGCTCTAAATGAGAGTCTTGCTTGACTCATACTTTGCTCAATCATACGCATGCTCTCAAT-3′2)5′-AATTCAATGGTTCCTGCATAACACTCACATAGTGTTTCCTCCCAATCCTTTATAATGCTTAATAATTTCTCCAAGTTTGTTTTGGCTCGTTTCATGAAATCCATGAGATATCTCACTTTATACTTTTCCATGGTTTGCAATTTTTCACTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACTGCGCAGTAGGTCAGCTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACCCGAGGAGTGTAAGCTTCTTCATTCATTTTGCGGAAGTGATCTGGAACCTTGTAGATACAACATCCAGGTGATAGTAGAGGCCTCGAACTTTCTATCATTTCCTTGATTTCAATTAC-3′3)5′-AATTCGAACAACCTCTTTCTACCCTATAATATTACACTATATAAAGCCCATGAAAGCGTGCGATTTCCTACGAAATTTACAAAGCATCTCTCCTCCGTCAAAACCATTAGACTGTTTCTCGGCCGACTTAGAGGTGGTTTTCCTGTGACATGGACTCGCACTTTCTGACCCTTCAAACTGGTTCGTGGACCAACGAGAAGCACTTGCTGTTCTTAAACACCATGGAGGCCTCCTTTGTGCGTGCAATGTTTGAGAGCAACGGTCGGATTGCTCTCCGCCTGGACCGTGACTTGCCGGACAGCTCGGAGTCGACATTAGATTCGAAGACGCATAGAAGAGAAAAACACGCCACCCCAGGTAAAATTAATATCAA-3′本专利技术还涉及薄壳山核桃品种Sioux的分子特异性标记引物组，所述引物序列为：1)上游引物：5′-AGTCAGAGTCGGAGTCGGAT-3′下游引物：5′-AGCCTAGCCTTGCAACCTTT-3′2)上游引物：5′-TGGTTCCTGCATAACACTCACA-3′下游引物：5′-GGTTCCAGATCACTTCCGCA-3′3)上游引物：5′-AGCGTGCGATTTCCTACGAA-3′下游引物：5′-AATTTTACCTGGGGTGGCGT-3′上述3对引物组合的来源：首先，从常见的24个品种中筛选出性状差异较大的5个品种进行简化基因的测序和比较分析；接着，根据分析结果设计1000多对引物，在24个样品中进行筛选和验证，获得薄壳山核桃品种Sioux的特异性DNA片段；然后，将该片段克隆测序，再经过三次以上重复性取样的复筛，最终获得的分子特异性标记引物组合；以上述特异性引物组合对薄壳山核桃品种进行PCR扩增，仅Sioux可获得分别为214bp、268bp、311bp大小的3条特异性片段，其他薄壳山核桃品种均不能获得选出引物组合的特异性片段；需要说明的是，本专利技术的分子特异性标记引物组合仅限于薄壳山核桃品种的鉴定，即待测样品仅限于薄壳山核桃；针对上述特征序列，设计的3对特异性引物，所扩增的3个产物分别为：1)214bp:5’-AGTCAGAGTCGGAGTCGGATTTCATATTTAAACTTTGACAAAATCTGAGTCAAAATCAGATTTAGGGGATATCGACTCTGACTCTATCAGTGCTCAACCCTATGGTGAAACGTCACTTCCCCCTTGCTTGTGTCCGTCAATACATGTCCATGAACATATCATCAAATATTCTTAAGTCGAAACTGATGAAACATAAAGGTTGCAAGGCTAGGCT-3′2)268bp:5’-TGGTTCCTGCATAACACTCACATAGTGTTTCCTCCCAATCCTTTATAATGCTTAATAATTTCTCCAAGTTTGTTTTGGCTCGTTTCATGAAATCCATGAGATATCTCACTTTATACTTTTCCATGGTTTGCAATTTTTCACTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACTGCGCAGTAGGTCAGCTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACCCGAGGAGTGTAAGCTTCTTCATTCATTTTGCGGAAGTGATCTGGAACC-3′3)311bp:5’-AGCGTGCGATTTCCTACGAAATTTACAAAGCATCTCTCCTCCGTCAAAACCATTAGACTGTTTCTCGGCCGACTTAGAGGTGGTTTTCCTGTGACATGGACTCGCACTTTCTGACCCTTCAAACTGGTTCGTGGACCAACGAGAAGCACTTGCTGTTCTTAAACACCATGGAGGCCTCCTTTGTGCGTGCAATGTTTGAGAGCAACGGTCGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.薄壳山核桃品种Sioux的特征序列组，其序列组如下：5′‑AATTCAGTCAGAGTCGGAGTCGGATTTCATATTTAAACTTTGACAAAATCTGAGTCAAAATCAGATTTAGGGGATATCGACTCTGACTCTATCAGTGCTCAACCCTATGGTGAAACGTCACTTCCCCCTTGCTTGTGTCCGTCAATACATGTCCATGAACATATCATCAAATATTCTTAAGTCGAAACTGATGAAACATAAAGGTTGCAAGGCTAGGCTCTAAATGAGAGTCTTGCTTGACTCATACTTTGCTCAATCATACGCATGCTCTCAAT‑3′5′‑AATTCAATGGTTCCTGCATAACACTCACATAGTGTTTCCTCCCAATCCTTTATAATGCTTAATAATTTCTCCAAGTTTGTTTTGGCTCGTTTCATGAAATCCATGAGATATCTCACTTTATACTTTTCCATGGTTTGCAATTTTTCACTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACTGCGCAGTAGGTCAGCTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACCCGAGGAGTGTAAGCTTCTTCATTCATTTTGCGGAAGTGATCTGGAACCTTGTAGATACAACATCCAGGTGATAGTAGAGGCCTCGAACTTTCTATCATTTCCTTGATTTCAATTAC‑3′5′‑AATTCGAACAACCTCTTTCTACCCTATAATATTACACTATATAAAGCCCATGAAAGCGTGCGATTTCCTACGAAATTTACAAAGCATCTCTCCTCCGTCAAAACCATTAGACTGTTTCTCGGCCGACTTAGAGGTGGTTTTCCTGTGACATGGACTCGCACTTTCTGACCCTTCAAACTGGTTCGTGGACCAACGAGAAGCACTTGCTGTTCTTAAACACCATGGAGGCCTCCTTTGTGCGTGCAATGTTTGAGAGCAACGGTCGGATTGCTCTCCGCCTGGACCGTGACTTGCCGGACAGCTCGGAGTCGACATTAGATTCGAAGACGCATAGAAGAGAAAAACACGCCACCCCAGGTAAAATTAATATCAA‑3′。...

【技术特征摘要】
1.薄壳山核桃品种Sioux的特征序列组，其序列组如下：5′-AATTCAGTCAGAGTCGGAGTCGGATTTCATATTTAAACTTTGACAAAATCTGAGTCAAAATCAGATTTAGGGGATATCGACTCTGACTCTATCAGTGCTCAACCCTATGGTGAAACGTCACTTCCCCCTTGCTTGTGTCCGTCAATACATGTCCATGAACATATCATCAAATATTCTTAAGTCGAAACTGATGAAACATAAAGGTTGCAAGGCTAGGCTCTAAATGAGAGTCTTGCTTGACTCATACTTTGCTCAATCATACGCATGCTCTCAAT-3′5′-AATTCAATGGTTCCTGCATAACACTCACATAGTGTTTCCTCCCAATCCTTTATAATGCTTAATAATTTCTCCAAGTTTGTTTTGGCTCGTTTCATGAAATCCATGAGATATCTCACTTTATACTTTTCCATGGTTTGCAATTTTTCACTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACTGCGCAGTAGGTCAGCTCCCATGGTGGAAAGGCCCCATGGAAATAACCCGAGGAGTGTAAGCTTCTTCATTCATTTTGCGGAAGTGATCTGGAACCTTGTAGATACAACATCCAGGTGATAGTAGAGGCCTCGAACTTTCTATCATTTCCTTGATTTCAATTAC-3′5′-AATTCGAACAACCTCTTTCTACCCTATAATATTACACTATATAAAGCCCATGAAAGCGTGCGATTTCCTACGAAATTTACAAAGCATCTCTCCTCCGTCAAAACCATTAGACTGTTTCTCGGCCGACTTAGAGGTGGTTTTCCTGTGACATGGACTCGCACTTTCTGACCCTTCAAACTGGTTCGTGGACCAACGAGAAGCACTTGCTGTTCTTAAACACCATGGAGGCCTCCTTTGTGCGTGCAATGTTTGAGAGCAACGGTCGGATTGCTCTCCGCCTGGACCGTGACTTGCCGGACAGCTCGGAGTCGACATTAGATTCGAAGACGCATAGAAGAGAAAAACACGCCACCCCAGGTAAAATTAATATCAA-3′。2.薄壳山核桃品种Sioux的分子特异性标记引物组，所述引物序列如下：1)上游引物：5′-AGTCAGAGTCGGAGTCGGAT-3′...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33