一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒及检测方法，属于病毒检测技术领域；所述检测试剂盒包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液；所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得。所述检测试剂盒使用方便、快速，能够实现可视化检测，特异性好。

A Kit for Detecting Foot and Mouth Disease Virus Asia1 and Its Detection Method

The invention provides a detection kit and a detection method for Foot and Mouth Disease Virus Asia1, belonging to the technical field of virus detection; the detection kit comprises a coated enzyme plate, a washing liquid, a serum dilution solution, a substrate chromogenic liquid, an enzyme-labeled antibody and a terminating liquid; the coated enzyme plate is obtained by coating the antibody of Foot and Mouth Disease Virus Asia1 as the coated antigen. The detection kit is convenient and fast to use, can realize visual detection, and has good specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于病毒检测
，尤其涉及一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
口蹄疫是一种由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性的、热性的、高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，经常在羊、牛、猪等动物中传播。发病时易感动物的唇和蹄部出现水疱，同时伴有发烧、食欲不振等症状，患病动物体重和产奶量大幅下降。口蹄疫病毒易通过空气传播，传染性强，流行快速，易感动物在抵抗力较弱的情况下也会导致死亡，给养殖户造成巨大的经济损失，严重阻碍了养殖业的发展。目前对于Asia1型口蹄疫病毒的诊断方法和疫苗免疫效果的评价方法只能在实验室完成，不适合基层检测，需要建立更为灵敏、快捷和简便的可视化的检测方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒及检测方法；所述检测试剂盒能够实现快速、可视化检测Asia1型口蹄疫病毒，检测结果准确可靠。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗和终止液；所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得。优选的，所述洗涤液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液，所述吐温-20为所述磷酸盐缓冲液质量的0.05％；所述洗涤液的pH值为7.1～7.3。优选的，所述底物显色液为含有过氧化氢和四甲基联苯胺的混合溶液，所述过氧化氢为所述底物显色液质量的0.8～1.2％；所述四甲基联苯胺的浓度为0.8～1.2mol/L。优选的，所述血清稀释液为含45～55g/L脱脂奶粉的所述洗涤液。优选的，所述检测试剂盒还包括阳性标准品和阴性标准品。优选的，所述终止液为SDS溶液。本专利技术还提供了一种利用上述检测试剂盒进行Asia1型口蹄疫病毒的检测方法，包括以下步骤：1)用血清稀释液稀释待检血清得到稀释血清；2)向所述包被酶标板中加步骤1)中所述稀释血清，进行第一孵育、第一洗涤获得待检测酶标板；3)向所述待检测酶标板中加入酶标二抗，进行第二孵育、第二洗涤获得待显色酶标板；4)向所述待显色酶标板加入底物显色液，进行显色获得显色酶标板；观察所述显色酶标板的颜色，当所述显色酶标板显示蓝色则为阳性，当所述显色酶标板显示无色则为阴性。优选的，步骤1)中所述血清稀释液与待检血清的体积比为(35～45):1。优选的，步骤3)所述酶标二抗的稀释倍数为1:18000～22000。优选的，步骤1)和步骤2)中所述的第一孵育和第二孵育的时间独立为45～65min；所述第一孵育和第二孵育的温度独立为20～30℃。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗和终止液；所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得。本专利技术提供的检测试剂盒能够实现可视化检测，阳性血清检测结果呈蓝色，阴性血清检测结果呈无色；所述检测试剂盒使用方便、快速；对本专利技术提供的检测试剂盒进行特异性评价，使用所述检测试剂盒检测猪流行性腹泻病毒、猪瘟病毒、乙脑病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒和蓝耳病病毒阳性血清样品，检测结果均呈无色，检测Asia1型口蹄疫病毒阳性血清样品，检测结果呈蓝色；可见所述检测试剂盒特异性好。附图说明图1为本专利技术实施例2的实验结果图。具体实施方式本专利技术提供了一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗和终止液。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括包被酶标板，所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得；所述包被抗原的浓度优选为1.5～2.5μg/mL，更优选为2.0μg/mL；本专利技术中，所述包被酶标板为脱脂奶粉封闭后的包被酶标板；本专利技术中，所述脱脂奶粉优选为脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液；所述脱脂奶粉的质量浓度优选为45～55g/L，更优选为50g/L。本专利技术所述包被酶标板的包被液优选为0.05M碳酸盐缓冲液；所述包被液的制备方法优选包括：将Na2CO31.59g和，NaHCO32.93g加蒸馏水定容至1000mL，pH为9.6。本专利技术中，所述包被酶标板的制备方法包括以下步骤：用pH为9.6的碳酸盐缓冲液按1:1000-2000的比例稀释抗体，约2～3μg/mL，4℃过夜，更优选为1:1500。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括洗涤液，所述洗涤液优选的为含吐温-20的磷酸盐缓冲液，所述吐温-20在所述磷酸盐缓冲液中的质量百分含量为0.05％，所述洗涤液的pH值优选为7.1～7.3，更优选为7.2。本专利技术中，所述洗涤液以1L计，优选的包括以下组分：NaCl8～9g，NaH2PO4·2H2O0.3～0.4g，NaH2PO4·12H2O2.5～3.0g，吐温-200.4～0.6mL；更优选的包括以下组分：NaCl8.5g，NaH2PO4·2H2O0.356g，NaH2PO4·12H2O2.772g，吐温-200.5mL。本专利技术中所述洗涤液的制备方法优选的如下：将NaCl、NaH2PO4·2H2O、NaH2PO4·12H2O混合后，用蒸馏水溶解并定容至999.5mL，再向其中加入0.5mL吐温-20。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括血清稀释液，所述血清稀释液优选为含45～55g/L脱脂奶粉的洗涤液，更优选为含50g/L脱脂奶粉的洗涤液。在本专利技术中，所述血清稀释液的作用是稀释待检血清。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括底物显色液；本专利技术中所述底物显色液优选为含有过氧化氢的四甲基联苯胺溶液；所述过氧化氢优选为所述底物显色液质量的0.8～1.2％，更优选为0.9～1.1％，最优选为1％；所述四甲基联苯胺的浓度优选为0.8～1.2mol/L，更优选为0.9～1.1mol/L，最优选为1mol/L。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括酶标二抗，所述酶标二抗优选的辣根过氧化物酶标二抗；本专利技术中所述酶标二抗在使用过程中的稀释比例优选为1:18000～22000，更优选为1:20000。本专利技术所述酶标二抗购于sigma公司。在本专利技术中，所述检测试剂盒包括终止液，本专利技术中，所述终止液优选为SDS溶液或硫酸溶液；本专利技术中，所述SDS溶液的质量浓度优选为0.8～1.2％，更优选为1.0％。本专利技术中，所述硫酸溶液的浓度优选为1.8～2.2mol/L，更优选为2.0mol/L。本专利技术中，所述终止液的作用为终止显色反应。在本专利技术中，所述检测试剂盒优选的还包括阳性标准品和阴性标准品。所述阳性标准品优选为含有Asia1型口蹄疫病毒抗体的血清；所述阴性标准品优选为不含Asia1型口蹄疫病毒抗体的血清。本专利技术提供了一种利用所述的检测试剂盒进行Asia1型口蹄疫病毒的检测方法，包括以下步骤：1)用血清稀释液稀释待检血清得到稀释血清；2)向所述包被酶标板中加步骤1)中所述稀释血清，进行第一孵育、第一洗涤获得待检测酶标板；3)向所述待检测酶标板中加入酶标二抗，进行第二孵育、第二洗涤获得待显色酶标板；4)向所述待显色酶标板加入底物显色液，进行显色获得显色酶标板；观察所述显色酶标板的颜色，当所述显色酶标板显色为蓝色则为阳性，当所述显色酶标板显色为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗和终止液；所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得。

【技术特征摘要】
1.一种Asia1型口蹄疫病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗和终止液；所述包被酶标板是以Asia1型口蹄疫病毒抗体作为包被抗原包被后获得。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液，所述吐温-20为所述磷酸盐缓冲液质量的0.05％；所述洗涤液的pH值为7.1～7.3。3.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液为含有过氧化氢和四甲基联苯胺的混合溶液，所述过氧化氢为所述底物显色液质量的0.8～1.2％；所述四甲基联苯胺的浓度为0.8～1.2mol/L。4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液为含45～55g/L脱脂奶粉的所述洗涤液。5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括阳性标准品和阴性标准品。6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为SDS溶液。7.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈豪泰，张永光，孙跃峰，祁林林，张杰，潘丽，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62