本发明专利技术提供了检测与冠状动脉粥样硬化显著相关的易感区域chr9p21单核苷酸多态性位点的引物和方法。检测的单核苷酸多态性位点是位于染色体9p21上的rs1333049、rs2383206、rs10757278、rs2383207、rs10757274。根据本发明专利技术染色体9p21上一系列SNP位点的突变情况，可以提供冠状动脉硬化临床预测、诊断和预后评估，并为患者提供个性化治疗策略以及风险预测，降低冠心病与心肌梗死的发病率。
【技术实现步骤摘要】
检测冠状动脉硬化相关单核苷酸多态性位点的引物和方法
本专利技术属于医学及生物
，特别涉及一种使用PCR及Sanger测序法检测与冠状动脉硬化相关的单核苷酸多态性位点突变的引物和方法。技术背景冠心病(coronaryarterydisease，CAD)是发达国家排名第一的死亡原因，也即将成为发展中国家健康的头号杀手。目前，冠心病被认为是一种由遗传因素和环境因素共同作用而发病的多基因遗传性疾病，然而，只有少数与冠心病相关的遗传因素得到了确定。近年来，大规模单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)相关性研究已成为阐明疾病发病机制的重要研究手段之一。最近，利用成百上千个标志物或者重点相关基因的重新测序的全基因组相关研究(genome-wideassociationstudies，GWAS)促进了冠心病的易患基因研究。近年来，GWAS研究发现，冠心病相关易感基因位于染色体9p21上，并且相继在不同的研究人群中得到印证，为冠心病遗传研究提供新的证据，引起了各国研究者的广泛关注。因此鉴定出与冠心病相关的易感基因或致病基因，在人群中进一步筛选增加疾病风险的易感基因确定易感个体，将有助于冠心病的发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗。从基础到临床，人们对此进行了大量的研究，并在冠心病的危险因素和冠心病发生的病理生理学方面积累了大量的知识，但是关于冠心病与心肌梗死的确切遗传分子机制却知之甚少，对于怎样鉴定遗传易感基因以及鉴定受试者的冠心病遗传易感性，一直缺乏全面系统有效的识别方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述现有技术的不足，提供与冠状动脉硬化关联最显著的代表性单核苷酸多态性位点，继而通过单核苷酸多态位点突变情况用于评估冠心病易感性的用途。所述检测与冠状动脉硬化相关单核苷酸多态性的引物，包括：扩增单核苷酸多态性位点的引物，其碱基序列为：rs1333049-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTAGATCATACCCGAAGTAGAGCTG-3’rs1333049-R5’-AACAGCTATGACCATGTTGTCCAATTTACATTTCCTTCAC-3rs2383206-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGAGCCATGTCATTGAAAGAG-3’rs2383206-R5’-AACAGCTATGACCATGAGCCTAACTTTAAGCCACCAAG-3rs10757278-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCATTAAGAAAGGGATGG-3’rs10757278-R5’-AACAGCTATGACCATGGCTAGACTCCACGCTGTTCC-3’rs2383207-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGATTATTGGTGGTTTTCTA-3’rs2383207-R5’-AACAGCTATGACCATGTCATGGGGAGTACAGACTACCTT-3rs10757274-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTTGAATTGATCCCTTACC-3’rs10757274-R5’-AACAGCTATGACCATGTTTCCCAGATGCACTGTATTGTT-3’，进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13-R：AACAGCTATGACCATG。进一步地，引物序列rs1333049-F/rs1333049-R是扩增rs1333049位点的引物，引物序列rs2383206-F/rs2383206-R是扩增rs2383206位点的引物，引物序列rs10757278-F/rs10757278-R是扩增rs10757278位点的引物，引物序列rs2383207-F/rs2383207-R是扩增rs2383207位点的引物，引物序列rs10757274-F/rs10757274-R是扩增rs10757274位点的引物。本专利技术还提供了检测与冠状动脉硬化相关的单核苷酸多态性位点的方法，包括以下步骤：(5)抽提外周血中的基因组DNA；(6)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；(7)对步骤2中的扩增产物进行测序；(8)对测序结果进行判断，确定相关的单核苷酸多态性位点是否发生突变；其中PCR扩增引物为：rs1333049-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTAGATCATACCCGAAGTAGAGCTG-3’rs1333049-R5’-AACAGCTATGACCATGTTGTCCAATTTACATTTCCTTCAC-3rs2383206-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGAGCCATGTCATTGAAAGAG-3’rs2383206-R5’-AACAGCTATGACCATGAGCCTAACTTTAAGCCACCAAG-3rs10757278-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCATTAAGAAAGGGATGG-3’rs10757278-R5’-AACAGCTATGACCATGGCTAGACTCCACGCTGTTCC-3’rs2383207-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGATTATTGGTGGTTTTCTA-3’rs2383207-R5’-AACAGCTATGACCATGTCATGGGGAGTACAGACTACCTT-3rs10757274-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTTGAATTGATCCCTTACC-3’rs10757274-R5’-AACAGCTATGACCATGTTTCCCAGATGCACTGTATTGTT-3’。测序引物碱基序列为：M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13-R：AACAGCTATGACCATG。进一步的，所述方法还包括本专利技术还提供了一种检测冠状动脉硬化相关单核苷酸多态性位点的试剂盒，所述试剂盒包括检测体系PCR扩增反应液、测序体系反应液，所述检测体系PCR扩增反应液包括以下扩增引物对：rs1333049-F/rs1333049-R、rs2383206-F/rs2383206-R、rs10757278-F/rs10757278-R、rs2383207-F/rs2383207-R、rs10757274-F/rs10757274-R。进一步的，还包括测序引物M13F和M13R。有益效果：本专利技术设计了扩增与冠状动脉硬化相关的单核苷酸多态性位点的特异性引物。采用PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。本专利技术所述引物能将所述的多态性位点都扩增出来，保证无论这些多态性位点的何处位置发生突变，都不会出现漏检的情况。检测过程快速灵敏，操作简单且准确性高，检测结果明确清晰；检测特异性强，采用目前最准确的基因突变检测方法，目的性强；检测标本采血量少，使用的实验器材较少，节约成本。附图说明图1是使用本专利技术引物测序方法对一个待检血液样本进行筛查rs1333049位点的测序图。图2是使用本专利技术引物测序方法对一个待检血液样本进行筛查rs2383206位点的测序图。图3是使用本专利技术引物测序方法对一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测冠状动脉硬化相关单核苷酸多态性位点的引物，其特征在于，包括有：rs1333049‑F 5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTAGATCATACCCGAAGTAGAGCTG‑3’rs1333049‑R 5’‑AACAGCTATGACCATGTTGTCCAATTTACATTTCCTTCAC‑3rs2383206‑F 5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGAGCCATGTCATTGAAAGAG‑3’rs2383206‑R 5’‑AACAGCTATGACCATGAGCCTAACTTTAAGCCACCAAG‑3rs10757278‑F 5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCATTAAGAAAGGGATGG‑3’rs10757278‑R 5’‑AACAGCTATGACCATGGCTAGACTCCACGCTGTTCC‑3’rs2383207‑F 5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGATTATTGGTGGTTTTCTA‑3’rs2383207‑R 5’‑AACAGCTATGACCATGTCATGGGGAGTACAGACTACCTT‑3rs10757274‑F 5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTTGAATTGATCCCTTACC‑3’rs10757274‑R 5’‑AACAGCTATGACCATGTTTCCCAGATGCACTGTATTGTT‑3’，所述测序引物的核苷酸序列包括：M13‑F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13‑R：AACAGCTATGACCATG。...
【技术特征摘要】
1.一种检测冠状动脉硬化相关单核苷酸多态性位点的引物，其特征在于，包括有：rs1333049-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTAGATCATACCCGAAGTAGAGCTG-3’rs1333049-R5’-AACAGCTATGACCATGTTGTCCAATTTACATTTCCTTCAC-3rs2383206-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGAGCCATGTCATTGAAAGAG-3’rs2383206-R5’-AACAGCTATGACCATGAGCCTAACTTTAAGCCACCAAG-3rs10757278-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCATTAAGAAAGGGATGG-3’rs10757278-R5’-AACAGCTATGACCATGGCTAGACTCCACGCTGTTCC-3’rs2383207-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGATTATTGGTGGTTTTCTA-3’rs2383207-R5’-AACAGCTATGACCATGTCATGGGGAGTACAGACTACCTT-3rs10757274-F5’-TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTTGAATTGATCCCTTACC-3’rs10757274-R5’-AACAGCTATGACCATGTTTCCCAGATGCACTGTATTGTT-3’，所述测序引物的核苷酸序列包括：M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13-R：AACAGCTATGACCATG。2.根据权利要求1所述的检测与冠状动脉硬化相关的单核苷酸多态性位点的引物，其特征在于，引物序列rs1333049-F/rs1333049-R是扩增rs1333049位点的引物，引物序列rs2383206-F/rs2383206-R是扩增rs2383206位点的引物，引物序列rs10757278-F/rs10757278-R是扩增rs10757278位点的引物，引物序列rs2383207-F/rs2383207-R是扩增rs2383207位点的引物，引物序列rs10757274-F/rs10757274-R是扩增r...
【专利技术属性】
技术研发人员：桑志高，吴鹏飞，王淑一，
申请(专利权)人：杭州艾迪康医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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