【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单链可变片段CD3结合蛋白质交叉引用本申请要求2016年5月20日提交的美国临时申请号62/339,685的权益，该临时申请通过引用以其全文并入本文。序列表本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交，并且通过引用以其全文并入本文。所述ASCII副本于2017年5月19日创建，命名为47517-704_601_SEQ.TXT，并且大小为66,042字节。援引并入本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入，并且如同以其全文进行说明。专利技术背景CD3是与T细胞受体复合物(TCR)缔合的在T细胞上表达的同型二聚体或异二聚体抗原，并且是T细胞活化所必需的。抗CD3抗体具有涉及T细胞活化的治疗目的。本公开内容提供了单链可变片段CD3结合蛋白质，包括含有该单链可变片段CD3结合蛋白质的多特异性抗体。
技术实现思路
在一个实施方案中，本文公开了一种单链可变片段CD3结合蛋白质，其包含可变重链区(VH)、可变轻链区(VL)和接头，其中VH包含互补决定区HCCDR1、HCCDR2和HCCDR3，其中VL包含互补决定区LCCDR1、LCCDR2和LCCDR3，其中(a)HCCDR1的氨基酸序列如GX1X2X3NX4YX5X6N(SEQIDNO.2)所示，X1是苯丙氨酸或天冬酰胺，X2是苏氨酸、谷氨酸或甲硫氨酸，X3是苯丙氨酸或酪氨酸，X4是赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、天冬酰胺或谷氨酸，X5是丙氨酸或脯氨酸，X6是甲硫氨酸、亮氨酸、缬氨酸或异亮氨酸；(b)HCCDR2的氨基酸序...
【技术保护点】
1.一种单链可变片段CD3结合蛋白质，其包含可变重链区(VH)、可变轻链区(VL)和接头，其中VH包含互补决定区HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，其中VL包含互补决定区LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其中(a)HC CDR1的氨基酸序列如GX1X2X3NX4YX5X6N(SEQ ID NO.2)所示，X1是苯丙氨酸或天冬酰胺，X2是苏氨酸、谷氨酸或甲硫氨酸，X3是苯丙氨酸或酪氨酸，X4是赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、天冬酰胺或谷氨酸，X5是丙氨酸或脯氨酸，X6是甲硫氨酸、亮氨酸、缬氨酸或异亮氨酸；(b)HC CDR2的氨基酸序列如RIRSX7X8NX9YX10TX11YX12DX13VK(SEQ ID NO.3)所示，X7是赖氨酸或甘氨酸，X8是酪氨酸或丝氨酸，X9是天冬酰胺或赖氨酸，X10是丙氨酸或谷氨酸，X11是酪氨酸或谷氨酸，X12是丙氨酸或赖氨酸，X13是丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺；(c)HC CDR3的氨基酸序列如HX14NFX15X16SX17ISYWAX18(SEQID NO.4)所示，X14是甘氨酸、丙氨酸或苏氨酸，X15是甘氨酸...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.20 US 62/339,6851.一种单链可变片段CD3结合蛋白质，其包含可变重链区(VH)、可变轻链区(VL)和接头，其中VH包含互补决定区HCCDR1、HCCDR2和HCCDR3，其中VL包含互补决定区LCCDR1、LCCDR2和LCCDR3，其中(a)HCCDR1的氨基酸序列如GX1X2X3NX4YX5X6N(SEQIDNO.2)所示，X1是苯丙氨酸或天冬酰胺，X2是苏氨酸、谷氨酸或甲硫氨酸，X3是苯丙氨酸或酪氨酸，X4是赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、天冬酰胺或谷氨酸，X5是丙氨酸或脯氨酸，X6是甲硫氨酸、亮氨酸、缬氨酸或异亮氨酸；(b)HCCDR2的氨基酸序列如RIRSX7X8NX9YX10TX11YX12DX13VK(SEQIDNO.3)所示，X7是赖氨酸或甘氨酸，X8是酪氨酸或丝氨酸，X9是天冬酰胺或赖氨酸，X10是丙氨酸或谷氨酸，X11是酪氨酸或谷氨酸，X12是丙氨酸或赖氨酸，X13是丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺；(c)HCCDR3的氨基酸序列如HX14NFX15X16SX17ISYWAX18(SEQIDNO.4)所示，X14是甘氨酸、丙氨酸或苏氨酸，X15是甘氨酸或天冬酰胺，X16是天冬酰胺或天冬氨酸，X17是酪氨酸、组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸或甘氨酸，X18是酪氨酸或苏氨酸；(d)LCCDR1的氨基酸序列如X19X20X21X22GX23VX24X25GX26YPN(SEQIDNO.5)所示，X19是甘氨酸或丙氨酸，X20是丝氨酸或谷氨酸，X21是丝氨酸或酪氨酸，X22是苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸或丝氨酸，X23是丙氨酸或酪氨酸，X24是苏氨酸或缬氨酸，X25是丝氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸或缬氨酸，X26是天冬酰胺或酪氨酸；(e)LCCDR2的氨基酸序列如GX27X28X29X30X31P(SEQIDNO.6)所示，X27是苏氨酸或异亮氨酸，X28是赖氨酸、谷氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或丝氨酸，X29是苯丙氨酸、亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸，X30是亮氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X31是丙氨酸或缬氨酸；并且(f)LCCDR3的氨基酸序列如X32LWYX33NX34WX35(SEQIDNO.7)所示，X32是缬氨酸、苏氨酸或丙氨酸，X33是丝氨酸、天冬氨酸或丙氨酸，X34是精氨酸或丝氨酸，X35是缬氨酸、异亮氨酸或丙氨酸，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34和X35不同时分别是苯丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、酪氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丝氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、苏氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、精氨酸和缬氨酸。2.如权利要求1所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4-r4-f5-r5-f6-r6-f7其中，r1是SEQIDNO:2；r2是SEQIDNO:3；r3是SEQIDNO:4；r4是SEQIDNO:5；r5是SEQIDNO:6；并且r6是SEQIDNO:7；并且其中f1、f2、f3、f4和f5是选定的框架残基，使得所述蛋白质与SEQIDNO:22所示的氨基酸序列至少80％相同。3.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1包含SEQIDNO.29、SEQIDNO.30、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.33、SEQIDNO.34、SEQIDNO.35、SEQIDNO.36、SEQIDNO.37、SEQIDNO.38、SEQIDNO.39或SEQIDNO.40。4.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r2包含SEQIDNO.41、SEQIDNO.42、SEQIDNO.43、SEQIDNO.44、SEQIDNO.45、SEQIDNO.46、SEQIDNO.47、SEQIDNO.48、SEQIDNO.49或SEQIDNO.50。5.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r3包含SEQIDNO.51、SEQIDNO.52、SEQIDNO.53、SEQIDNO.54、SEQIDNO.55、SEQIDNO.56、SEQIDNO.57、SEQIDNO.58、SEQIDNO.50或SEQIDNO.60。6.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r4包含SEQIDNO.61、SEQIDNO.62、SEQIDNO.63、SEQIDNO.64、SEQIDNO.65、SEQIDNO.66、SEQIDNO.67、SEQIDNO.68、SEQIDNO.69、SEQIDNO.70、SEQIDNO.71、SEQIDNO.72或SEQIDNO.73。7.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r5包含SEQIDNO.74、SEQIDNO.75、SEQIDNO.76、SEQIDNO.77、SEQIDNO.78、SEQIDNO.79、SEQIDNO.80、SEQIDNO.81、SEQIDNO.82、SEQIDNO.83、SEQIDNO.84、SEQIDNO.85或SEQIDNO.86。8.如权利要求2所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r6包含SEQIDNO.87、SEQIDNO.88、SEQIDNO.89、SEQIDNO.90、SEQIDNO.91、SEQIDNO.92或SEQIDNO.93。9.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.39，r2是SEQIDNO.49，r3是SEQIDNO.51，r4是SEQIDNO.61，r5是SEQIDNO.86，并且r6是SEQIDNO.87。10.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.30，r2是SEQIDNO.43，r4是SEQIDNO.64，并且r6是SEQIDNO.89。11.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r3是SEQIDNO.55，r4是SEQIDNO.67，r5是SEQIDNO.77，并且r6是SEQIDNO.92。12.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.31，r2是SEQIDNO.42，r3是SEQIDNO.60，r4是SEQIDNO.64，r5是SEQIDNO.79，并且r6是SEQIDNO.91。13.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.35，r2是SEQIDNO.46，r3是SEQIDNO.56，r4是SEQIDNO.68，并且r5是SEQIDNO.75。14.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.32，r2是SEQIDNO.47，r3是SEQIDNO.56，r4是SEQIDNO.65，r5是SEQIDNO.80，并且r6是SEQIDNO.87。15.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.29，r2是SEQIDNO.44，r3是SEQIDNO.52，r4是SEQIDNO.73，并且r5是SEQIDNO.76。16.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.33，r2是SEQIDNO.48，r3是SEQIDNO.57，r4是SEQIDNO.69，并且r5是SEQIDNO.74。17.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.38，r4是SEQIDNO.62，并且r5是SEQIDNO.81。18.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.37，r3是SEQIDNO.53，r4是SEQIDNO.70，r5是SEQIDNO.82，并且r6是SEQIDNO.88。19.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.34，r2是SEQIDNO.47，r3是SEQIDNO.56，r4是SEQIDNO.68，并且r5是SEQIDNO.75。20.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.29，r3是SEQIDNO.54，r4是SEQIDNO.71，并且r5是SEQIDNO.83。21.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.33，r2是SEQIDNO.41，r4是SEQIDNO.63，r5是SEQIDNO.84，并且r6是SEQIDNO.90。22.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.30，r2是SEQIDNO.44，r3是SEQIDNO.58，r4是SEQIDNO.66，并且r5是SEQIDNO.85。23.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.40，r2是SEQIDNO.45，r3是SEQIDNO.56，r5是SEQIDNO.78，并且r6是SEQIDNO.93。24.如权利要求2-8中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中r1是SEQIDNO.36，r2是SEQIDNO.50，r3是SEQIDNO.59，r4是SEQIDNO.72，并且r5是SEQIDNO.75。25.如权利要求1所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有选自SEQIDNO.8、SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20、SEQIDNO.21、SEQIDNO.94和SEQIDNO.95的氨基酸序列。26.如权利要求1所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述接头包含如GGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:1)所示的氨基酸序列。27.如权利要求1-26中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质与选自人CD3和食蟹猴CD3的CD3结合。28.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人CD3和食蟹猴CD3结合。29.如权利要求1-28中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以约1nM至约200nM的人Kd(hKd)与人CD3结合并且以约1nM至约300nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合。30.如权利要求1-29中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM、约6nM至约10nM、约11nM至约20nM、约25nM至约40nM、约40nM至约60nM、约70nM至约90nM、约100nM至约120nM、约125nM至约140nM、约145nM至约160nM、约170nM至约200nM、约210nM至约250nM、约260nM至约300nM。31.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。32.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约1.5倍至约2倍。33.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至5倍。34.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约6倍至约15倍。35.如权利要求1-27中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约20倍至约50倍。36.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.8所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。37.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.8所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM。38.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.9所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。39.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.9所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM。40.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。41.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM。42.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.11所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。43.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.11所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM。44.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.12所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约1.5倍至约2倍。45.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.12所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约6nM至约10nM。46.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.13所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约1.5倍至约2倍。47.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.13所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约6nM至约10nM。48.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.14所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至约5倍。49.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.14所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约11nM至20nM。50.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.15所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约6倍至约15倍。51.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.15所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约25nM至约40nM。52.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.16所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至约5倍。53.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.16所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约11nM至20nM。54.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.17所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约6倍至约15倍。55.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.17所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约40nM至约60nM。56.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.18所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至约5倍。57.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.18所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约11nM至20nM。58.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约6倍至约15倍。59.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约40nM至60nM。60.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.20所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至约5倍。61.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.20所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约11nM至约20nM。62.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.21所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约20倍至约50倍。63.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.21所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约125nM至约140nM。64.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.94所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约20倍至约50倍。65.如权利要求1-30中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.94所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约100nM至约120nM。66.如权利要求1-27和31-35中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.95所示的氨基酸序列，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约20倍至约50倍。67.如权利要求1-29中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质具有如SEQIDNO.95所示的氨基酸序列，其中所述hKd和所述cKd为约100nM至约120nM。68.一种单链可变片段CD3结合蛋白质，其包含SEQIDNO.22(野生型抗CD3)所示的序列，其中选自氨基酸位置27、28、29、31、33、34、54、55、57、59、61、63、65、102、105、106、108、114、163、164、165、166、168、170、171、173、193、194、195、196、197、231、235、237和239的一个或多个氨基酸残基被置换，其中氨基酸位置27被天冬酰胺置换，氨基酸位置28被谷氨酸或甲硫氨酸置换，氨基酸位置29被酪氨酸置换，氨基酸位置31被天冬酰胺、甘氨酸、谷氨酸或苏氨酸置换，氨基酸位置33被脯氨酸置换，氨基酸位置34被缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸置换，氨基酸位置54被甘氨酸置换，氨基酸位置55被丝氨酸置换，氨基酸位置57被赖氨酸置换，氨基酸位置59被谷氨酸置换，氨基酸位置61被谷氨酸置换，氨基酸位置63被赖氨酸置换，氨基酸位置65被天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺置换，氨基酸位置102被丙氨酸或苏氨酸置换，氨基酸位置105被天冬酰胺置换，氨基酸位置106被天冬氨酸置换，氨基酸位置108被组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸或亮氨酸置换，氨基酸位置114被苏氨酸置换，氨基酸位置163被丙氨酸置换，氨基酸位置164被谷氨酸置换，氨基酸位置165被酪氨酸置换，氨基酸位置166被苯丙氨酸、赖氨酸或丝氨酸置换，氨基酸位置168被酪氨酸置换，氨基酸位置170被缬氨酸置换，氨基酸位置171被天冬氨酸、赖氨酸、缬氨酸或组氨酸置换，氨基酸位置173被酪氨酸置换，氨基酸位置193被异亮氨酸置换，氨基酸位置194被谷氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或丝氨酸置换，氨基酸位置195被亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸置换，氨基酸位置196被天冬酰胺或甘氨酸置换，氨基酸位置197被缬氨酸置换，氨基酸位置231被苏氨酸或丙氨酸置换，氨基酸位置235被天冬氨酸或丙氨酸置换，氨基酸位置237被丝氨酸置换，并且氨基酸位置239被丙氨酸或异亮氨酸置换。69.如权利要求68所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在除位置27、28、29、31、33、34、54、55、57、59、61、63、65、102、105、106、108、114、163、164、165、166、168、170、171、173、193、194、195、196、197、231、235、237和239之外的氨基酸位置处包含一个或多个另外的置换。70.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置27处包含置换。71.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置28处包含置换。72.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置29处包含置换。73.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置31处包含置换。74.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置33处包含置换。75.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置34处包含置换。76.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置54处包含置换。77.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置55处包含置换。78.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置57处包含置换。79.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置59处包含置换。80.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置61处包含置换。81.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置63处包含置换。82.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置65处包含置换。83.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置102处包含置换。84.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置105处包含置换。85.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置106处包含置换。86.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置108处包含置换。87.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置114处包含置换。88.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置163处包含置换。89.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置164处包含置换。90.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置165处包含置换。91.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置166处包含置换。92.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置168处包含置换。93.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置170处包含置换。94.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置171处包含置换。95.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置173处包含置换。96.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置193处包含置换。97.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置194处包含置换。98.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置195处包含置换。99.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置196处包含置换。100.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置197处包含置换。101.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置231处包含置换。102.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置235处包含置换。103.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置237处包含置换。104.如权利要求68或69所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其在位置239处包含置换。105.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置34、65、102、163、197和231被置换。106.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置28、57、166和235被置换。107.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置108、168、194和239被置换。108.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置28、55、114、166、195和237被置换。109.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置31、63、108、170和194被置换。110.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置29、65、108、166、195和231被置换。111.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置27、59、102、173和194被置换。112.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置31、65、108、171和193被置换。113.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置34、164和195被置换。114.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置33、105、171、195和231被置换。115.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置31、65、108、170和194被置换。116.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置27、106、171和195被置换。117.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置31、54、165、196和235被置换。118.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置28、59、108、166和196被置换。119.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置34、61、108、194和239被置换。120.如权利要求68-104中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置31、65、108、171和194被置换。121.如权利要求68-120中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质与选自人CD3和食蟹猴CD3的CD3结合。122.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以相当的结合亲和力(Kd)与人CD3和食蟹猴CD3结合。123.如权利要求68-122中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以约1nM至约200nM的人Kd(hKd)与人CD3结合，并且以约1nM至约300nM的食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合。124.如权利要求123中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述hKd和所述cKd为约3nM至约5nM、约6nM至约10nM、约11nM至约20nM、约25nM至约40nM、约40nM至约60nM、约70nM至约90nM、约100nM至约120nM、约125nM至约140nM、约145nM至约160nM、约170nM至约200nM、约210nM至约250nM、约260nM至约300nM。125.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力大致相同。126.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约1.5倍至约2倍。127.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约3倍至约5倍。128.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约6倍至约15倍。129.如权利要求68-121中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中所述蛋白质以人Kd(hKd)与人CD3结合，以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴CD3结合，并且其中所述hKd和所述cKd是具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对CD3的结合亲和力的约20倍至约50倍。130.如权利要求68-121和125-129中任一项所述的单链可变片段CD3结合蛋白质，其中氨基酸位置34、65、102、163、197和231被置换，并且其中所述hKd和所述cKd与具有如野生型抗CD3(SEQIDNO.22)所示序列的蛋白质对...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·B·杜布里奇，濑户培，理查德·J·奥斯汀，卢克·伊弗宁，吉恩玛丽·盖诺，布莱恩·D·莱蒙，
申请(专利权)人：哈普恩治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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