FLT3结合蛋白及使用方法技术

本文提供了FLT3结合蛋白，包含此类蛋白质或其片段的药物组合物，以及用于制备此类FLT3结合蛋白的核酸、重组表达载体和宿主细胞。还公开了使用所公开的FLT3结合蛋白预防和/或治疗疾病、病况和病症的方法。病况和病症的方法。病况和病症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FLT3结合蛋白及使用方法
交叉引用
[0001]本申请要求2020年2月21日提交的美国临时申请号62/980,051的权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文。序列表
[0002]本申请包含按ASCII格式以电子方式提交并特此以引用的方式整体并入的序列表。创建于2021年2月19日的所述ASCII副本名称为47517
‑
744_601_SL.txt并且大小为532,727字节。援引并入
[0003]本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均以引用的方式并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均以引用的方式并入一般。

技术介绍

[0004]FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是I型跨膜蛋白，其在正常造血中起重要作用且在人类正常造血干细胞(HSC)以及淋巴、髓性和粒细胞/巨噬细胞祖细胞上进行生理表达，并且被认为在早期造血中起重要作用。在成熟的造血细胞中，已报道FLT3在树突状细胞和自然杀伤细胞的亚群中表达。由于其在调节造血细胞(B和T细胞)的存活、增殖和分化中的重要作用，所以异常FLT3活性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种FLT3结合结构域，其包含至少三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其中
‑
所述CDR1包含选自SEQ ID No.77
‑
108的序列，或在选自SEQ ID No.77
‑
108的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列；
‑
所述CDR2包含选自SEQ ID No.109
‑
154和393
‑
394的序列，或在选自SEQ ID No.109
‑
154和393
‑
394的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列；
‑
所述CDR3包含选自SEQ ID No.155
‑
195的序列，或在选自SEQ ID No.155
‑
195的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列。2.如权利要求1所述的FLT3结合结构域，其包含以下序列集(CDR1、CDR2和CDR3)中的至少一个：SEQ ID No.77、109和155；SEQ ID No.78、109和155；SEQ ID No.79、110和156；SEQ ID No.80、111和155；SEQ ID No.81、112和155；SEQ ID No.77、113和157；SEQ ID No.82、110和156；SEQ ID No.77、114和158；SEQ ID No.80、111和155；SEQ ID No.83、115和155；SEQ ID No.84、111和155；SEQ ID No.79、116和156；SEQ ID No.85、111和155；SEQ ID No.86、110和156；SEQ ID No.87、110和156；SEQ ID No.88、117和159；SEQ ID No.88、118和160；SEQ ID No.88、119和161；SEQ ID No.88、120和162；SEQ ID No.88、121和163；SEQ ID No.88、122和164；SEQ ID No.88、121和165；SEQ ID No.88、121和166；SEQ ID No.88、122和167；SEQ ID No.88、122和168；SEQ ID No.88、121和169；SEQ ID No.88、118和165；SEQ ID No.88、123和170；SEQ ID No.88、124和171；SEQ ID No.88、117和172；
SEQ ID No.89、125和173；SEQ ID No.90、126和174；SEQ ID No.90、127和175；SEQ ID No.90、125和176；SEQ ID No.90、128和175；SEQ ID No.90、128和177；SEQ ID No.91、129和178；SEQ ID No.91、130和178；SEQ ID No.92、131和178；SEQ ID No.93、132和178；SEQ ID No.94、133和179；SEQ ID No.91、134和178；SEQ ID No.95、135和180；SEQ ID No.96、136和181；SEQ ID No.97、137和182；SEQ ID No.97、138和183；SEQ ID No.98、139和184；SEQ ID No.99、139和185；SEQ ID No.100、140和186；SEQ ID No.101、141和187；SEQ ID No.102、142和188；SEQ ID No.103、143和189；SEQ ID No.104、144和190；SEQ ID No.105、145和191；SEQ ID No.106、146和192；SEQ ID No.107、147和193；SEQ ID No.108、148和194；SEQ ID No.91、149和195；SEQ ID No.91、150和195；SEQ ID No.100、151和186；SEQ ID No.92、152和195；SEQ ID No.93、153和195；SEQ ID No.91、154和195；SEQ ID No.89、393和173；以及SEQ ID No.89、394和173。3.如权利要求1或2所述的FLT3结合结构域，其包含以下序列集(CDR1、CDR2和CDR3)中的至少一个：SEQ ID No.89、393和173；SEQ ID No.89、394和173；
SEQ ID No.100、151和186；以及SEQ ID No.91、149和195。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述结合结构域进一步包含构架区1、构架区2、构架区3和构架区4，其中所述构架区1包含选自SEQ ID No.273
‑
301的序列，所述构架区2包含选自SEQ ID No.302
‑
322、395和406
‑
407的序列，所述构架区3包含选自SEQ ID No.323
‑
365和396的序列，并且所述构架区4包含选自SEQ ID No.366
‑
371的序列。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的FLT3结合结构域，其包含与选自SEQ ID No.1
‑
76和389
‑
390的序列至少约60％相同的序列。6.如权利要求5所述的FLT3结合结构域，其包含与选自SEQ ID No.71
‑
76和389
‑
390的序列至少约70％相同的序列。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是抗体或其抗原结合片段。8.如权利要求7所述的FLT3结合结构域，其中所述抗体或其抗原结合片段包括以下至少一种：单克隆抗体(mAb)、双特异性抗体、三特异性抗体、单价抗体、多价抗体、hcIgG、Fv、Fd、Fab、F(ab
’
)2、F(ab
’
)、Fab2、Fab3、scFab、scFv、scFvFc、scFv
‑
拉链、二
‑
scFv、串联scFv、sdFv、sdAb、VH结构域、VL结构域、VHH结构域、半抗体、双抗体、单链双抗体、串联双抗体、串联二
‑
scFv或串联三
‑
scFv。9.如权利要求8所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是sdAb。10.如权利要求1
‑
6中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是所述抗体或其抗原结合片段的一部分。11.如权利要求10所述的FLT3结合结构域，其中所述抗体或其抗原结合片段包括以下至少一种：单克隆抗体(mAb)、双特异性抗体、多特异性抗体、单价抗体、多价抗体、hcIgG、Fv、Fd、Fab、F(ab
’
)2、F(ab
’
)、Fab2、Fab3、scFab、scFv、scFvFc、scFv
‑
拉链、二
‑
scFv、串联scFv、半抗体、双抗体、单链双抗体、串联双抗体、串联二
‑
scFv或串联三
‑
scFv。12.如权利要求11所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是所述抗体或其抗原结合片段的一部分并且其中所述抗体或其抗原结合片段包括双特异性抗体。13.如权利要求12所述的FLT3结合结构域，其中所述双特异性抗体包含(i)所述FLT3结合结构域(抗FLT3)和(ii)CD3结合结构域。14.如权利要求13所述的FLT3结合结构域，其中所述CD3包括人CD3。15.如权利要求13或14所述的FLT3结合结构域，其中所述抗FLT3结构域是sdAb。16.如权利要求13
‑
15中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗CD3结构域是scFv。17.如权利要求11所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是所述抗体或其抗原结合片段的一部分并且其中所述抗体或其抗原结合片段包括多特异性抗体。18.如权利要求17所述的FLT3结合结构域，其中所述多特异性抗体包含(i)所述FLT3结合结构域(抗FLT3)；(ii)CD3结合结构域(抗CD3)；以及(iii)白蛋白结合结构域(抗ALB)。19.如权利要求18所述的FLT3结合结构域，其中所述CD3包括人CD3。20.如权利要求18或19所述的FLT3结合结构域，其中所述白蛋白包括血清白蛋白。21.如权利要求20所述的FLT3结合结构域，其中所述血清白蛋白是人血清白蛋白。
22.如权利要求18
‑
21中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域(抗FLT3)、所述CD3结合结构域(抗CD3)和所述白蛋白结合结构域(抗ALB)从N端到C端呈以下形式中的至少一种：抗ALB:抗FLT3:抗CD3；抗CD3:抗FLT3:抗ALB；抗FLT3:抗CD3:抗ALB；抗ALB:抗CD3:抗FLT3；抗FLT3:抗ALB:抗CD3；以及抗CD3:抗ALB:抗FLT3。23.如权利要求18
‑
22中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗FLT3结构域是sdAb。24.如权利要求18
‑
23中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗CD3结构域是scFv。25.如权利要求18
‑
24中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗ALB结构域是sdAb。26.如权利要求18
‑
25中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗CD3结构域包含与SEQ ID No.373中列出的序列至少约90％相同的氨基酸序列。27.如权利要求18
‑
26中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗ALB结构域包含与SEQ ID No.372中列出的序列至少约90％相同的氨基酸序列。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域结合至人FLT3和食蟹猴FLT3。29.一种FLT3结合结构域，其在T细胞依赖性细胞毒性测定中具有至少约0.5pM至约6000pM的半最大有效浓度(EC
50
)，其中所述测定测量所述FLT3结合结构域在FLT
‑
3表达细胞的T细胞介导杀伤中的EC
50
。30.如权利要求29所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT
‑
3表达细胞是白血病细胞。31.如权利要求30所述的FLT3结合结构域，其中所述白血病细胞来自细胞系，其中所述细胞系是MV
‑4‑
11、EOL1、THP1、MOLM3或HL60。32.如权利要求29
‑
31中任一项所述的FLT3结合结构域，其包含至少三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其中
‑
所述CDR1包含选自SEQ ID No.89、91、92、93和100的序列，或在选自SEQ ID No.89、91、92、93和100的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列；
‑
所述CDR2包含选自SEQ ID No.149、150、151、152、153、154、393和394的序列，或在选自SEQ ID No.149、150、151、152、153、154、393和394的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列；
‑
所述CDR3包含选自SEQ ID No.173、186和195的序列，或在选自SEQ ID No.173、186和195的序列中包含一个或多个氨基酸置换的序列。33.如权利要求32所述的FLT3结合结构域，其包含以下序列集(CDR1、CDR2和CDR3)中的至少一个：SEQ ID No.91、149和195；SEQ ID No.91、150和195；SEQ ID No.100、151和186；
SEQ ID No.92、152和195；SEQ ID No.93、153和195；SEQ ID No.91、154和195；SEQ ID No.89、393和173；以及SEQ ID No.89、394和173。34.如权利要求29
‑
33中任一项所述的FLT3结合结构域，其包含与选自SEQ ID No.71
‑
76和389
‑
390的序列至少约70％相同的序列。35.如权利要求29
‑
34中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域是多特异性抗体的一部分。36.如权利要求35所述的FLT3结合结构域，其中所述多特异性抗体包含(i)所述FLT3结合结构域(抗FLT3)；(ii)CD3结合结构域(抗CD3)；以及(iii)白蛋白结合结构域(抗ALB)。37.如权利要求36所述的FLT3结合结构域，其中所述CD3包括人CD3。38.如权利要求36或37所述的FLT3结合结构域，其中所述白蛋白包括血清白蛋白。39.如权利要求38所述的FLT3结合结构域，其中所述血清白蛋白是人血清白蛋白。40.如权利要求36
‑
39中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域(抗FLT3)、所述CD3结合结构域(抗CD3)和所述白蛋白结合结构域(抗ALB)从N端到C端呈以下形式中的至少一种：抗ALB:抗FLT3:抗CD3；抗CD3:抗FLT3:抗ALB；抗FLT3:抗CD3:抗ALB；抗ALB:抗CD3:抗FLT3；抗FLT3:抗ALB:抗CD3；以及抗CD3:抗ALB:抗FLT3。41.如权利要求29
‑
40中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗FLT3结构域是sdAb。42.如权利要求36
‑
41中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗CD3结构域是scFv。43.如权利要求36
‑
42中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗ALB结构域是sdAb。44.如权利要求36
‑
43中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗CD3结构域包含与SEQ ID No.373中列出的序列至少约90％相同的氨基酸序列。45.如权利要求36
‑
44中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述抗ALB结构域包含与SEQ ID No.372中列出的序列至少约90％相同的氨基酸序列。46.如权利要求36
‑
45中任一项所述的FLT3结合结构域，其中所述FLT3结合结构域结合至人FLT3、食蟹猴FLT3或两者。47.一种以相同的亲和力或相差高达约58倍的亲和力结合至人FLT3和食蟹猴FLT3的FLT3结合结构域。48.一种靶向FLT3的三特异性蛋白，其包含(A)结合人CD3的第一结构域；(B)结合人血清白蛋白的第二结构域；以及(C)结合人FLT3或食蟹猴FLT3的第三结构域，
其中所述结构域根据以下取向中的任一种连接，从N端到C端为：H2N
‑
(A)
‑
(C)
‑
(B)
‑
COOH、H2N
‑
(B)
‑
(A)
‑
(C)
‑
COOH、H2N
‑
(C)
‑
(B)
‑
(A)
‑
COOH、H2N
‑
(C)
‑
(A)
‑
(B)
‑
COOH、H2N
‑
(A)
‑
(B)
‑
(C)
‑
COOH或H2N
‑
(B)
‑
(C)
‑
(A)
‑
COOH；或经由接头L1和L2连接，从N端到C端为：H2N
‑
(A)
‑
L1
‑
(C)
‑
L2
‑
(B)
‑
COOH、H2N
‑
(B)
‑
L1
‑
(A)
‑
L2
‑
(C)
‑
COOH、H2N
‑
(C)
‑
L1
‑
(B)
‑
L2
‑
(A)
‑
COOH、H2N
‑
(C)
‑
L1
‑
(A)
‑
L2
‑
(B)
‑
COOH、H2N
‑
(A)
‑
L1
‑
(B)
‑
L2
‑
(C)
‑
COOH或H2N
‑
(B)
‑
L1
‑
(C)
‑
L2
‑
(A)
‑
COOH。49.如权利要求48所述的靶向FLT3的三特异性蛋白，其中所述第一结构域是scFv，其包含含有HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3的重链和含有LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3的轻链，其中所述HC CDR1包含SEQ ID NO:397的氨基酸序列或在SEQ ID NO:397的序列中包含一个或多个置换的氨基酸序列；所述HC CDR2包含SEQ ID NO:398的氨基酸序列或在SEQ ID NO:398的序列中包含一个或多个置换的氨基酸序列；所述HC CDR3包含SEQ ID NO:399的氨基酸序列或在SEQ ID NO:399的序列中包含一个或多个置换的氨基酸序列；所述LC CDR1包含SEQ ID NO:400的氨基酸序列或在SEQ ID NO:400的序列中包含一个或多个置换的氨基酸序列；所述LC CDR2包含SEQ ID NO:401的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：霍尔格，
申请(专利权)人：哈普恩治疗公司，
类型：发明
国别省市：