一种激活潜伏HIV病毒的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及医药领域，具体涉及一种激活HIV潜伏病毒的组合物及其应用。该组合物由单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂组成，其中单克隆抗体药物选自抗人CD3单克隆抗体和抗人CD28单克隆抗体，组蛋白去乙酰化酶抑制剂选自伏立诺他和丙戊酸中的至少一种，PKC激活剂为12‑脱氧佛波醇‑13‑乙酸(Prostratin)。HIV难以治愈的主要障碍是HIV在感染极早期就在机体内建立起隐秘的病毒“储藏库”，本发明专利技术的组合物具有显著激活潜伏的HIV感染的CD4+T细胞的作用，能同时从细胞水平、染色质水平和HIV病毒特异性的转录因子水平激活HIV潜伏病毒，能够充分激活静息CD4+T细胞中的HIV前病毒，且不会产生明显的细胞毒副作用，是迈向HIV功能性治愈的必要途径。

【技术实现步骤摘要】
一种激活潜伏HIV病毒的组合物及其应用
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种激活HIV潜伏病毒的组合物及其应用。
技术介绍
艾滋病是一种重大威胁人类生命安全的传染病，目前尚无有效疫苗且现有药物不能彻底治愈。随着HIV研究的不断深入，研究发现目前HIV不能治愈的主要障碍是HIV在感染极早期就在机体内建立起隐秘的病毒“储藏库”(Latentreservoir)，以清除病毒储藏库为出发点的新型艾滋病治疗策略-“激活再杀灭”“(ShockandKill)正逐渐成为HIV研究的热点，并为治愈HIV带来了希望，称为HIV/AIDS治疗的第二次革命。同时，不可忽视的现实是，随着HIV感染的进程，作为体内主要的能直接杀伤HIV感染细胞和分泌细胞因子抑制HIV复制的效应细胞，细胞毒性T细胞(CTL)出现数量减少和功能缺陷。甚至连CTL激活依赖的树突状细胞(DC)也出现类似的功能损伤，而且这些缺陷即使经过cART治疗也无法恢复。这预示着通过抗逆转录病毒治疗重建的机体免疫系统将不能有效的清除那些被激活的细胞，必需要通过联合增强机体HIV特异性免疫应答的方法来增强对HIV储藏库的清除效果。因此，对HIV潜伏性病毒“储藏库”的形成及激活策略和以重建机体免疫功能的治疗性疫苗的探索都是迈向治愈HIV时代极有价值的研究方向。在病人接受联合高效抗逆转录病毒治疗(HAART)时，潜伏的HIV病毒储藏库能在体内长期稳定存在并缓慢更新，半衰期大约为6个月。一旦停药，体内的病毒储藏库细胞则快速释放艾滋病病毒。HIV形成潜伏的机制主要有：1)组蛋白去乙酰化，形成异染色质，使HIVDNA更紧地缠绕在组蛋白上，不利于转录而维持HIV的潜伏状态；2)组蛋白甲基化可促进或抑制HIV转录；3)DNA甲基化，进一步招募组蛋白去乙酰化酶(HDACs)，不利于转录。此外还有转录干扰﹑起始抑制和延长抑制等。HIV形成潜伏机制的多样性决定了激活的多样性，首先是细胞激活水平，细胞激活促进异质二聚体p50/RelA进入细胞核而启动细胞基因转录，而NF-κB也是HIV最重要的转录因子。研究表明，无论是HIV潜伏感染细胞模型还是从HIV感染病人体内分离到的潜伏感染细胞同样在体外细胞激活后能产生具有感染性的病毒。另外，临床研究中对于激活潜伏HIV时，是否需要细胞水平激活及其细胞毒性的认知上则存在较大争议。一些临床研究表明不同程度的细胞激活有助于激活并清除潜伏的HIV，但会产生明显的细胞毒副作用。最新研究证明，双特异性抗体VRC07-a-rhesusCD3，在猕猴能有效激活并清除潜伏感染的CD4+T细胞，在停止cART后病毒没有反弹，并未出现毒副作用。分析认为不同的试验结果可能在于激活方案和剂量等因素不同。其次是在染色质水平，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)可以打开染色质，使潜伏的HIV前病毒更易于被转录。伏立诺他(SAHA)主要抑制一类HDAC的抑制剂，是目前激活HIV潜伏储藏库的首选药物。体外实验证明单剂SAHA可使静息CD4+T细胞中的HIVRNA的转录增强4.8倍，然而对SAHA激活HIV潜伏感染的临床价值也存在争议。有研究发现SAHA的临床剂量仅能激活0.079％静息CD4+T细胞中的HIV前病毒，尚不能达到充分激活HIV储藏库的目的。这些提示我们需要发现更强有效的药物或联合其他方法以更有效的激活病毒储藏库。第三，HIV病毒特异性的转录因子水平，多种转录因子如NF-κB﹑激活T细胞核因子(NFAT)刺激蛋白1(Sp1)等对调节HIV转录非常重要，而NF-κB是HIV复制过程中最重要的转录因子。蛋白激酶C(PKC)是NF-κB关键调节因子，PKC激活剂激活PKC途径减少IκBα，致使转录因子释放并穿透进入胞核与HIVLTR结合启动转录。Prostratin和Bryostatin1是PKC激活剂，体外实验表明能明显增加潜伏HIV转录和表达，而且后者效果优于前者，但目前尚未看到有关动物体内实验或临床研究的相关报道。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术的上述不足，提供了一种能激活HIV潜伏病毒的组合物，该组合物能同时从细胞水平、染色质水平和HIV病毒特异性的转录因子水平激活HIV潜伏病毒，能够充分激活静息CD4+T细胞中的HIV前病毒，且不会产生明显的细胞毒副作用。本专利技术的另一目的是提供一种能激活HIV潜伏病毒的组合物应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种激活HIV潜伏病毒的组合物，该组合物由单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂组成。进一步地，所述单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：(10-5～10-4):(1～10):(0.05～0.01)。该组合物中，考滤到激活效果和细胞毒性，单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂均要求在一个合理的范围内。进一步地，所述单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：6×10-5:5:0.05。进一步地，所述单克隆抗体药物选自抗人CD3单克隆抗体和抗人CD28单克隆抗体。进一步地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂选自伏立诺他和丙戊酸中的至少一种。进一步地，所述PKC激活剂为12-脱氧佛波醇-13-乙酸。本专利技术还提供了上述任一项所述的一种激活HIV潜伏病毒的组合物的应用，所述组合物应用于激活潜伏的HIV感染的CD4+T细胞。进一步地，所述组合物应用于制备激活潜伏的HIV感染的CD4+T细胞的药物。具体而言，本专利技术的组合物在激活静息CD4+T细胞中的HIV前病毒表达后，潜伏病毒被激活。同时结合高效抗逆转录病毒疗法及在人免疫系统作用下，来杀死激活的潜伏感染的细胞，以此加速病毒库的清除，最终达到体内HIV的清除。进一步地，所述药物中单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：(10-5～10-4):(1～10):(0.05～0.01)。进一步地，所述药物中单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：6x10-5:5:0.05。本专利技术的有益效果在于：1.该组合物的设计考虑同时从细胞水平、染色质水平和HIV病毒特异性的转录因子水平激活HIV潜伏病毒，研究结果显示，该病毒能够充分激活静息CD4+T细胞中的HIV前病毒，具有高的诱导激活作用，且效果持续时间长。2.本专利技术的组合物用于激活潜伏的HIV感染的CD4+T细胞时，与同类阳性药物相比，不会产生明显的细胞毒副作用。3、本专利技术的组合物可应用于制备激活潜伏的HIV感染的CD4+T细胞的药物，钙药物与多种抗HIV药物联合使用将为HIV潜伏感染病毒激活和最终清除提供了新的途径和手段。附图说明图1为实施例1中EcoHIV潜伏病毒激活策略示意图。图2为实施例2中用到的EcoHIV嵌合病毒的结构示意图。图3为实施例3中建立多种品系小鼠的HIV感染动物模型。图4为实施例4中EcoHIV病毒在小鼠体内建立系统性感染结果示意图。图5为实施例5中EcoHIV在小鼠CD4+T中建立潜伏性的感染示意图，其中图5a为EcoHIV病毒整合DNA和vifRNA表达水平，图5b为病毒蛋白的表达水平。图6为实施例6中EcoHIV感染小鼠的病毒“储藏库”的体外激活结果示意图。图7为实施例7中Eco本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种激活潜伏HIV病毒的组合物，其特征在于，该组合物由单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂组成。

【技术特征摘要】
1.一种激活潜伏HIV病毒的组合物，其特征在于，该组合物由单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂组成。2.根据权利要求1所述的一种激活HIV潜伏病毒的组合物，其特征在于，所述单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：(10-5～10-4):(1～10):(0.05～0.01)。3.根据权利要求2所述的一种激活HIV潜伏病毒的组合物，其特征在于，所述单克隆抗体药物、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和PKC激活剂的摩尔比为：6×10-5:5:0.05。4.根据权利要求1所述的一种激活HIV潜伏病毒的组合物，其特征在于，所述单克隆抗体药物选自抗人CD3单克隆抗体和抗人CD28单克隆抗体。5.根据权利要求1所述的一种激活HIV潜伏病毒的组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾潮江，张同存，于琪英，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42