【技术实现步骤摘要】
基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法、检测方法和试剂盒
本专利技术涉及微生物检测
，具体涉及一种基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法、检测方法和试剂盒。
技术介绍
急性脑炎脑膜炎等中枢系统感染症候群包括各种病原所致，以脑实质和/或脑膜感染为病理表现的系列急性炎症性疾病。它是严重威胁人类健康的疾病，据世界卫生组织估算全球病毒性脑炎发病率约为3.5/10万-7.4/10万。全世界每年约有12.5万婴幼儿死于细菌性脑膜炎，细菌性脑膜炎的致残率高达25％-50％。对脑炎脑膜炎症候群致病病原的及早有效诊断可有效避免由于迟诊误诊导致的预后不良甚至死亡。脑炎脑膜炎病原诊断方法有镜检、细菌培养、抗原抗体检测、生化反应、分子生物学方法等。传统的方法耗时比较长、漏检率高，经验性用药一方面加重病人经济负担，且易耽误病人的最佳诊疗时间。基于培养的病原鉴定方法所需时间长，最快也要三到四天时间，且只能针对细菌进行分析，无法鉴别病毒、真菌、寄生虫病原，而在细菌中不同种类也要求不同的培养条件，其中一部分较难通过培养方法学鉴定。基于PCR等分子生物学方法靶点有限，只能...
【技术保护点】
1.一种基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：从样本中提取DNA并将所述DNA片段化得到片段化的DNA序列；将所述片段化的DNA序列加入末端修复体系中进行末端修复反应，末端修复反应完成后，直接向反应体系中添加接头序列、连接酶、ATP以及聚乙二醇，在所述连接酶作用下以ATP为辅酶，催化所述接头序列连接到末端修复反应产物的两端，得到接头连接产物；纯化所述接头连接产物后，加入与所述接头序列两端互补的核酸单链作为引物进行PCR扩增，得到所述文库；优选地，所述聚乙二醇为PEG 8000。
【技术特征摘要】
1.一种基于高通量测序的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：从样本中提取DNA并将所述DNA片段化得到片段化的DNA序列；将所述片段化的DNA序列加入末端修复体系中进行末端修复反应，末端修复反应完成后，直接向反应体系中添加接头序列、连接酶、ATP以及聚乙二醇，在所述连接酶作用下以ATP为辅酶，催化所述接头序列连接到末端修复反应产物的两端，得到接头连接产物；纯化所述接头连接产物后，加入与所述接头序列两端互补的核酸单链作为引物进行PCR扩增，得到所述文库；优选地，所述聚乙二醇为PEG8000。2.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述样本是疑似含有中枢系统感染病原微生物的样本；优选地，所述中枢系统感染病原微生物包括细菌、病毒、真菌和寄生虫；优选地，所述中枢系统感染病原微生物包括肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、单纯疱疹病毒1型(Herpessimplexvirus1，HSV1)、水痘-带状疱疹病毒(Varicellazostervirus，VAV)、人巨细胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)、黄曲霉、烟曲霉、白色念珠菌、恶性疟原虫和人隐孢子虫。3.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述样本是脑脊液样本。4.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，进行片段化的所述DNA含量为0.2-1000ng；优选为50ng。5.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述片段化的DNA序列的平均长度为150-300bp；优选为200bp。6.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述末端修复体系中含有多核苷酸激酶，以及具有5’-3’的聚合酶活性、3’-5’的外切酶活性和末端转移酶活性的多种聚合酶；优选地，所述多核苷酸激酶为T4多核苷酸激酶；优选地，所述多种聚合酶为Taq聚合酶、T4DNA聚合酶和Klenow片段。7.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述引物中有一条引物5’末端具有磷酸化修饰，所述PCR扩增得到双链DNA，其中一条链的5’端具有磷酸基团。8.根据权利要求1所述的中枢系统感染病原检测文库构建方法，其特征在于，所述接头序列包括SEQIDNO：1和SEQIDNO：2；所述引物包括SEQIDNO：3和S...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘华勇，萧卓，袁剑颖，吴红龙，
申请(专利权)人：广州华大基因医学检验所有限公司，华大生物科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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