一种环状探针和基于环状探针捕获的测序文库构建方法技术

一种环状探针和基于环状探针捕获的测序文库构建方法，该方法包括：将环状探针与靶标核酸退火杂交，其中环状探针为线性核酸探针，其包括两个末端的特异性臂区和中间的通用序列，其中特异性臂区用于与靶标核酸杂交，杂交后探针的两个末端首尾相向，通用序列用于连接两个末端的特异性臂区并作为通用引物的识别区域；在聚合酶和连接酶的作用下，使环状探针的3’末端以靶标核酸为模板进行扩增并与5’末端连接形成环状分子；加入核酸外切酶将线性核酸分子消化。本发明专利技术利用扩增原理，解决捕获效率低和成本高昂的问题，利用环状探针解决引物对数量有限的问题，利用通用引物扩增解决多重扩增均一性差的问题。

A Construction Method of Sequencing Library Based on Ring Probe Capture and Ring Probe Capture

An annular probe and a sequencing library construction method based on annular probe capture include annealing hybridization of the annular probe with target nucleic acid, in which the annular probe is a linear nucleic acid probe. The annular probe consists of two terminal specific arm regions and a common sequence in the middle. The specific arm regions are used for hybridization with target nucleic acid. After hybridization, the two ends of the probe are in the direction of the head and tail. Sequences are used to connect specific arm regions of two ends and serve as recognition regions of universal primers. Under the action of polymerase and ligase, the 3'end of the ring probe is amplified using target nucleic acid as template and linked to 5'end to form a ring molecule. The linear nucleic acid molecule is digested by adding nucleic acid exonuclease. The invention utilizes the amplification principle to solve the problems of low capture efficiency and high cost, uses ring probe to solve the problem of limited number of primers, and uses universal primer amplification to solve the problem of poor homogeneity of multiple amplification.

【技术实现步骤摘要】
一种环状探针和基于环状探针捕获的测序文库构建方法
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种环状探针和基于环状探针捕获的测序文库构建方法。
技术介绍
随着测序技术发展，第二代测序(NGS)迅猛发展，依靠着高通量的特点，成为了研究DNA和RNA的主要工具。在NGS中，人们可以同时对高达1亿条核酸序列进行同步的测序，在碱基上的通量到达了Gb的数量级，对整个基因组进行测序(WGS)也变得越来越常规。尽管在技术上可以做到WGS，但是测序时间和测序花销却是限制其应用的因素。通过对特定感兴趣区域进行捕获，既可以避免不需的序列信息占据结果中的大部分，降低所需数据量最终节省成本，也可以提高特定区域的测序深度，从而提供更有价值的信息。对特定感兴趣区域进行捕获，现有主流技术方案有两种：NimbleGenSeqCap技术方案和Ampliseq技术方案。NimbleGenSeqCap技术方案，捕获对象为已经添加接头的文库，通过对目标区域设计长度为50-105bp的带标记线性探针，经杂交对目标区域片段进行富集，然后进行高通量测序。整个流程包括常规流程的文库构建、标记探针杂交、磁珠分离、目标文库洗脱、目标文本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于环状探针捕获的测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：将环状探针与靶标核酸退火杂交，其中所述环状探针为线性核酸探针，其包括两个末端的特异性臂区和中间的通用序列，其中所述特异性臂区用于与所述靶标核酸杂交，杂交后探针的两个末端首尾相向，所述通用序列用于连接两个末端的特异性臂区并作为通用引物的识别区域；在聚合酶和连接酶的作用下，使所述环状探针的3’末端以所述靶标核酸为模板进行扩增并与5’末端连接形成环状分子；和加入核酸外切酶将线性核酸分子消化。

【技术特征摘要】
1.一种基于环状探针捕获的测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：将环状探针与靶标核酸退火杂交，其中所述环状探针为线性核酸探针，其包括两个末端的特异性臂区和中间的通用序列，其中所述特异性臂区用于与所述靶标核酸杂交，杂交后探针的两个末端首尾相向，所述通用序列用于连接两个末端的特异性臂区并作为通用引物的识别区域；在聚合酶和连接酶的作用下，使所述环状探针的3’末端以所述靶标核酸为模板进行扩增并与5’末端连接形成环状分子；和加入核酸外切酶将线性核酸分子消化。2.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述通用引物是带有测序接头的引物；所述核酸外切酶将线性核酸分子消化之后，加入所述通用引物进行PCR扩增。3.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述通用引物是不带测序接头的引物；所述核酸外切酶将线性核酸分子消化之后，加入所述通用引物进行PCR扩增；所述PCR扩增之后，将扩增产物连接上测序接头；优选地，所述扩增产物连接上测序接头之后，环化并通过滚环复制制备DNA纳米球。4.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述核酸外切...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧卓，刘华勇，袁剑颖，石先灯，李英镇，
申请(专利权)人：深圳华大基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44