抗体-T2毒素缀合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种抗体‑T2毒素缀合物及其用途，所述的抗体‑T2毒素缀合物由T2毒素通过第二连接子和第一连接子与抗体相连，其中第一连接子与抗体通过两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键，本发明专利技术提供的抗体‑T2毒素缀合物稳定性强，在血液中不易降解，DAR值均一，产品纯度高，临床上治疗窗口大，毒副作用小，对肿瘤有显著的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
抗体-T2毒素缀合物及其用途
本专利技术涉及一种抗体药物缀合物及其用途，具体涉及一种抗体-T2毒素缀合物及其用途。
技术介绍
抗体药物缀合物属于一类新型生物导弹药物，由以下三部分组成：抗体、细胞毒素和连接两者的接头。抗体药物缀合物具有抗体的靶向性和小分子毒素的强毒性，能够精确的识别靶向部位并释放毒素，极大的增强了药效，并减少了毒副作用。目前在抗体药物缀合物中用到的毒素，主要有MMAE及其衍生物、MMAF及其衍生物、DM1、DM4、PBD、Duocamycin、Duomycins、Calicheamicin、Doxorubicin、VincaAlkaloids、Metrotrexate、Vinblastine、Daunorubicin等，但依然需要开发新的细胞毒素，用于药物筛选，从而制备出更有优势的药物。T2毒素是由多种镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物中毒性较强的一种毒素，其毒性表现在以下方面：1.抑制细胞蛋白质与遗传物质的合成。2.引起氧化应激与DNA损伤。3.诱导细胞凋亡。有研究表明，T2毒素对于多种癌细胞具有较低的IC50值，在肿瘤治疗领域具有广阔的应用前景。中国专利CN107583058A公开了一种T-2毒素-抗体药物缀合物，与抗体连接所采用的连接子为6-马来酰亚胺基己酸、MC-Val-Cit-PAB、Fmoc-Val-Cit-PAB、MC-Val-Cit-PAB-PNP、Fmoc-Phe-Lys(Trt)-PAB-PNP中的一种，上述连接子与抗体均为单巯基偶联，结构相对不稳定，在血液中极易降解，异构体多，产物单一性差，纯化难度非常大，临床上治疗窗口狭窄，毒副作用较大。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗体-T2毒素缀合物，其中所述的抗体是通过双巯基桥接的方式与T2毒素缀合，具体的，本专利技术的技术方案为：一种抗体-T2毒素缀合物，其结构通式为如式I所示：其中：Ab为任一抗体；L为任一连接子，所述的连接子分为第一连接子部分L1和第二连接子部分L2，L1能够与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键，L2通过C-S键、酰胺键、酯键、C-C键或C-N键与L1共价连接；D为T2毒素；n为1、2、3、4任一整数。进一步的，所述抗体-T2毒素缀合物，其具有式II所示结构：其中：Ab为任一抗体；L1为第一连接子部分，能够与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键；L2为第二连接子部分，与L1共价连接；n为1、2、3、4任一整数。更进一步的，所述的L1具有式III所示结构：其中，两个与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基共价相连，另外一个与L2共价相连。更进一步的，所述的L2为空或者以下结构的一种：优选的，所述的抗体-T2毒素缀合物的结构为：其中Ab为任一抗体。优选的，所述的抗体-T2毒素缀合物的结构为：其中Ab为任一抗体。优选的，所述的抗体-T2毒素缀合物的结构为：其中Ab为任一抗体。进一步的，所述的抗体Ab优选为Her2单克隆抗体、CD19单克隆抗体、MSLN单克隆抗体、PD-1单克隆抗体、PD-L1单克隆抗体的一种。本专利技术还涉及一种抗体-T2毒素缀合物在制备抗癌症药物中的用途。进一步的，所述的癌症选自白血病、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、骨肉癌、结肠癌、直肠癌、鼻咽癌和胃癌。本专利技术提供的抗体-T2毒素缀合物，毒素通过连接子与抗体上的两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键，稳定性强，在血液中不易降解；DAR值均一，产品纯度高，临床上治疗窗口大，毒副作用小。附图说明图1显示了抗体-T2毒素缀合物VI的偶联情况，利用疏水高效液相色谱(HIC-HPLC)法对抗体-T2毒素缀合物VI的偶联情况进行检测，检测结果为DAR值为3.81。图2显示了抗体-T2毒素缀合物VII的偶联情况，利用疏水高效液相色谱(HIC-HPLC)法对抗体-T2毒素缀合物VII的偶联情况进行检测，检测结果为DAR值为4.08。图3显示了抗体-T2毒素缀合物VIII的偶联情况，利用疏水高效液相色谱(HIC-HPLC)法对抗体-T2毒素缀合物VIII的偶联情况进行检测，检测结果为DAR值为4.02。图4显示了本专利技术提供的抗体-T2毒素缀合物的细胞毒作用，其中A图显示了抗体-T2毒素缀合物VI在人乳腺癌SK-BR-3细胞中的细胞毒作用曲线；B图显示了抗体-T2毒素缀合物VII在人乳腺癌SK-BR-3细胞中的细胞毒作用曲线；C图显示了抗体-T2毒素缀合物VIII在人乳腺癌SK-BR-3细胞中的细胞毒作用曲线。其中横坐标代表了药物的对数浓度，纵坐标代表了在对应药物对数浓度下的最大抑制率。抗体-T2毒素缀合物VI、抗体-T2毒素缀合物VII、抗体-T2毒素缀合物VIII在人乳腺癌SK-BR-3细胞中的最大抑制率为90％、90％和80％。具体实施方式实施例1抗体-T2毒素缀合物VI的制备按照如下路线制备：(1)化合物2的制备：将化合物1(3.74g,15mmol)和三乙胺(0.2mL,1.5mmol)用80mL二氯甲烷溶解，然后加入巯基乙酸(0.2mL,1.5mmol)，冰水浴搅拌反应24h，反应结束后，减压蒸除溶剂，粗品通过硅胶柱色谱纯化(甲醇：二氯甲烷＝1：10)，得到白色固体化合物2。LC-MSm/z(ES-),342.12(M-H)-。(2)化合物4的制备：将化合物2(137mg,0.4mmol)和羰基二咪唑(70mg,0.4mmol)用20mL乙腈溶解，室温搅拌反应24h。然后加入化合物3(152mg,0.4mmol)，室温搅拌反应24h，反应结束后，减压蒸除溶剂，粗品通过硅胶柱色谱纯化(甲醇：二氯甲烷＝1：10)，得到白色固体化合物4。LC-MSm/z(ES+),703.35(M+H)+。(3)化合物5的制备：将T2毒素(190mg,0.4mmol)和羰基二咪唑(70mg,0.4mmol)用20mL乙腈溶解，室温搅拌反应24h。然后加入乙醇胺(60mg,1mmol)，室温搅拌反应24h，反应结束后，减压蒸除溶剂，粗品通过硅胶柱色谱纯化(甲醇：二氯甲烷＝1：20)，得到白色固体化合物5。LC-MSm/z(ES+),576.25(M+Na)+。(4)化合物6的制备：将化合物4(71mg,0.1mmol)和三苯基膦(52mg,0.2mmol)用10mL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后加入偶氮二甲酸二乙酯(35mg,0.2mmol)，搅拌反应2h。将化合物5(55mg,0.1mmol)用2mL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入到反应液中，室温搅拌反应24h。减压蒸除溶剂，粗品通过硅胶柱色谱纯化(甲醇：二氯甲烷＝1：10)，得到白色固体化合物6。LC-MSm/z(ES+),1238.57(M+H)+。(5)抗体-T2毒素缀合物VI的制备：取100μLHer2抗体的溶液(10mg/mL，pH7.4)于PCR反应管中，加入DTPA(10μL，10mM)，振荡混匀，加入TCEP(5eq，10mM)，振荡混匀，37℃反应1h。在冰浴中加入25％(V/V)的DMSO，振荡混匀，加入化合物6的DMSO溶液(5eq，10mM)，振荡混匀，在混匀仪上反应12h。透析3次，除去残留的还原剂和药物小分子，得到抗体-T2毒素缀合物VI。用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体‑T2毒素缀合物，其结构通式为如式I所示：

【技术特征摘要】
2018.07.03 CN 20181071117701.一种抗体-T2毒素缀合物，其结构通式为如式I所示：其中：Ab为任一抗体；L为任一连接子，所述的连接子分为第一连接子部分L1和第二连接子部分L2，L1能够与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键，L2通过C-S键、酰胺键、酯键、C-C键或C-N键与L1共价连接；D为T2毒素；n为1、2、3、4任一整数。2.根据权利要求1所述抗体-T2毒素缀合物，其具有式II所示结构：其中：Ab为任一抗体；L1为第一连接子部分，能够与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基进行化学反应形成共价键；L2为第二连接子部分，与L1共价连接；n为1、2、3、4任一整数。3.根据权利要求1或2所述抗体-T2毒素缀合物，其特征在于，所述的L1具有式III所示结构：其中，两个与抗体Ab上的两个半胱氨酸的巯基共价相连，另外一个与L2共价相连。4.根据权利要求1-3任一项所述抗体-T...

【专利技术属性】
技术研发人员：李乐乐，黄长江，房健民，
申请(专利权)人：烟台迈百瑞国际生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37