The present invention provides a method for preparing purified cell binding cytotoxic agent conjugates, including passing a mixture containing cell binding cytotoxic agent conjugates and one or more impurities through a polydifluoroethylene (PVDF) membrane to remove at least part of the impurities from the mixture, thereby providing purified cell binding cytotoxic agent conjugates.
【技术实现步骤摘要】
使用PVDF膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物本申请是申请号为201380061552.7、申请日为2013年10月4日、专利技术名称为“使用PVDF膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2013/063480的中国国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2012年10月4日的美国临时申请号61/709,891的优先权。相关申请的交叉引用本专利申请要求2012年10月4日提交的美国临时专利申请号61/709,891的权益，其以引用方式并入本文。电子方式递交的材料以引用方式并入与此同时递交的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表以引用方式整体并入本文并且如下识别：2013年10月3日创建的名称为“714287SequenceListing.TXT”的8，259字节的一个ASCII(文本)文件。专利技术背景用于治疗癌症和其他疾病的抗体-药物缀合物通常由三个不同的成分构成：细胞结合剂、接头和细胞毒性剂。一种常用的制造方法包括：修饰步骤，其中细胞结合剂与双官能接头反应以形成与具有反应基团的接头共价连接的细胞结合剂；纯化步骤，其中从修饰反应的其他组分纯化经修饰的抗体；缀合步骤，其中经修饰的细胞结合剂与细胞毒性剂反应以形成从接头(使用反应基团)至细胞毒性剂的共价化学键；以及第二纯化步骤，其中从缀合反应的其他组分纯化缀合物。最近的临床试验已显示对抗体-药物缀合物在治疗许多不同类型的癌症中有希望的作用。因此，有必要产生可以用来治疗患者的高纯度和高稳定性的缀合物。尽管在制备抗体-药物缀合物方面有进步，但是目前的方法受若干因素的...
【技术保护点】
1.一种用于制备纯化的细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的方法，其包括使包含细胞结合剂细胞毒性剂缀合物和一种或多种杂质的混合物经过聚二氟乙烯(PVDF)膜，以从所述混合物除去至少一部分的所述杂质，从而提供纯化的细胞结合剂细胞毒性剂缀合物。
【技术特征摘要】
2012.10.04 US 61/709,8911.一种用于制备纯化的细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的方法，其包括使包含细胞结合剂细胞毒性剂缀合物和一种或多种杂质的混合物经过聚二氟乙烯(PVDF)膜，以从所述混合物除去至少一部分的所述杂质，从而提供纯化的细胞结合剂细胞毒性剂缀合物。2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法顺次重复两次、三次或四次。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物经过离子交换色谱膜以从所述混合物中除去至少一部分的所述杂质。4.如权利要求3所述的方法，其中使所述混合物经过离子交换色谱膜之前使所述混合物经过PVDF膜。5.如权利要求3所述的方法，其中使所述混合物经过PVDF膜之前使所述混合物经过离子交换色谱膜。6.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括：(a)使细胞结合剂与细胞毒性剂接触，以形成包含所述细胞结合剂和所述细胞毒性剂的第一混合物，然后使所述第一混合物与包含接头的双官能交联试剂在pH为约4至约9的溶液中接触，以提供包含所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物和一种或多种杂质的第二混合物，所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物包含经由所述接头与所述细胞毒性剂化学偶联的所述细胞结合剂；(b)使所述第二混合物经过聚二氟乙烯(PVDF)膜，以除去至少一部分的所述杂质，从而提供所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第二混合物；以及(c)使步骤(b)之后的所述纯化的第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，以从所述杂质中进一步纯化所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物，从而制备所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第三混合物，其中相较于所述纯化的第二混合物所述纯化的第三混合物包含减少量的所述杂质。7.如权利要求6所述的方法，其中在步骤(c)之前顺次重复步骤(b)两次、三次或四次。8.如权利要求6或7所述的方法，其中吸附色谱在步骤(c)中使用。9.如权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述吸附色谱选自羟磷灰石色谱、疏水电荷诱导色谱(HCIC)、疏水作用色谱(HIC)、离子交换色谱、混合模式离子交换色谱、固定化金属亲和色谱(IMAC)、染料配位体色谱、亲和色谱、反相色谱及其组合。10.如根据权利要求9所述的方法，其中所述吸附色谱是离子交换色谱。11.如根据权利要求10所述的方法，其中所述离子交换色谱是陶瓷羟磷灰石(CHT)色谱。12.如权利要求6或7所述的方法，其中切向流过滤在步骤(c)中使用。13.如权利要求6-12中任一项所述的方法，其中通过以下实现步骤(a)中的所述接触：在反应容器中提供所述细胞结合剂，将所述细胞毒性剂加入到所述反应容器中以形成包含所述细胞结合剂和所述细胞毒性剂的所述第一混合物，然后将所述双官能交联试剂加入到所述第一混合物中。14.如权利要求6-13中任一项所述的方法，其还包括在步骤a-b或步骤b-c之间保持所述混合物以从所述细胞结合剂释放所述不稳定结合的接头。15.如权利要求14所述的方法，其中所述混合物在约2℃至约8℃的温度下保持约20小时。16.如权利要求6-15中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)-(b)之间淬灭所述第二混合物以淬灭任何未反应的细胞毒性剂和/或未反应的双官能交联试剂。17.如权利要求16所述的方法，其中通过使所述第二混合物与淬灭剂接触来淬灭所述混合物，所述淬灭剂与所述游离细胞毒性剂反应。18.如权利要求17所述的方法，其中所述淬灭剂选自4-马来酰亚胺基丁酸、3-马来酰亚胺基丙酸、N-乙基马来酰亚胺、碘乙酰胺和碘乙酰胺丙酸。19.如权利要求6-18中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(a)和(b)之间经过离子交换色谱膜。20.如权利要求6-19中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(b)和(c)之间经过离子交换色谱膜。21.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括：(a)使细胞结合剂与双官能交联试剂接触以共价连接接头与所述细胞结合剂，从而制备包含具有与其结合的接头的细胞结合剂的第一混合物，(b)使所述第一混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，从而制备具有与其结合的接头的细胞结合剂的纯化的第一混合物，(c)通过使具有与其结合的接头的所述细胞结合剂与细胞毒性剂在pH为约4至约9的溶液中反应，使细胞毒性剂与具有与其结合的接头的所述细胞结合剂在纯化的所述第一混合物中缀合，以制备包含所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物和一种或多种杂质的第二混合物，所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物包含经由所述接头与所述细胞毒性剂化学偶联的所述细胞结合剂，(d)使所述第二混合物经过聚二氟乙烯(PVDF)膜，以除去至少一部分的所述杂质，从而提供所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第二混合物；以及(e)使步骤(d)之后的所述纯化的第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，以从所述杂质中进一步纯化所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物，从而制备所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第三混合物，其中相较于所述纯化的第二混合物所述纯化的第三混合物包含减少量的所述杂质。22.如权利要求21所述的方法，其中在步骤(e)之前顺次重复步骤(d)两次、三次或四次。23.如权利要求21或22的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(c)和(d)之间经过离子交换色谱膜。24.如权利要求21或22所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(d)和(e)之间经过离子交换色谱膜。25.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中吸附色谱在步骤(b)和(d)中使用。26.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中切向流过滤在步骤(b)中使用并且吸附色谱在步骤(d)中使用。27.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中吸附色谱在步骤(b)中使用并且切向流过滤在步骤(d)中使用。28.如权利要求21-27中任一项所述的方法，其中所述吸附色谱选自羟磷灰石色谱、疏水电荷诱导色谱(HCIC)、疏水作用色谱(HIC)、离子交换色谱、混合模式离子交换色谱、固定化金属亲和色谱(IMAC)、染料配位体色谱、亲和色谱、反相色谱及其组合。29.如权利要求28所述的方法，其中所述吸附色谱是离子交换色谱。30.如权利要求29所述的方法，其中所述离子交换色谱是陶瓷羟磷灰石(CHT)色谱。31.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中切向流过滤在步骤(b)和(d)中使用。32.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中非吸附色谱在步骤(b)和(d)中使用。33.如权利要求21-32中任一项所述的方法，其中步骤(c)中的所述溶液包含蔗糖。34.如权利要求21-33中任一项所述的方法，其中步骤(c)中的所述溶液包含选自柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液的缓冲剂。35.如权利要求21-33中任一项所述的方法，其中步骤(c)中的所述溶液包含选自以下的缓冲剂：HEPPSO(N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-羟基丙磺酸))、POPSO(哌嗪-1,4-双(2-羟基-丙磺酸)脱水物)、HEPES(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)、HEPPS(EPPS)(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸)、TES(N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸)及其组合。36.如权利要求21-35中任一项所述的方法，其还包括(f)在步骤a-b、步骤b-c、步骤c-d和步骤d-e中的至少一个之间保持所述混合物，以从所述细胞结合剂释放所述不稳定结合的接头。37.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括：(a)使细胞结合剂与双官能交联试剂接触以共价连接接头与所述细胞结合剂，从而制备包含具有与其结合的接头的细胞结合剂的第一混合物，(b)通过使具有与其结合的接头的所述细胞结合剂与细胞毒性剂反应，使细胞毒性剂与具有与其结合的接头的所述细胞结合剂在所述第一混合物中缀合，以制备包含所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物和一种或多种杂质的第二混合物，所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物包含经由所述接头与所述细胞毒性剂化学偶联的所述细胞结合剂，(c)使所述第二混合物经过聚二氟乙烯(PVDF)膜，以除去至少一部分的所述杂质，从而提供所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第二混合物；以及(d)使步骤(c)之后的所述纯化的第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，以从所述杂质中进一步纯化所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物，从而制备所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的纯化的第三混合物，其中相较于所述纯化的第二混合物所述纯化的第三混合物包含减少量的所述杂质。38.如权利要求37所述的方法，其中所述第一混合物在步骤(a)和(b)之间在不经历纯化。39.如权利要求37或38所述的方法，其中在步骤(d)之前顺次重复步骤(c)两次、三次或四次。40.如权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(b)和(c)之间经过离子交换色谱膜。41.如权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述方法还包括使所述混合物在步骤(c)和(d)之间经过离子交换色谱膜。42.如权利要求37-41中任一项所述的方法，其中吸附色谱在步骤(d)中使用。43.如权利要求42所述的方法，其中所述吸附色谱选自羟磷灰石色谱、疏水电荷诱导色谱(HCIC)、疏水作用色谱(HIC)、离子交换色谱、混合模式离子交换色谱、固定化金属亲和色谱(IMAC)、染料配位体色谱、亲和色谱、反相色谱及其组合。44.如根据权利要求43所述的方法，其中所述吸附色谱是离子交换色谱。45.如根据权利要求44所述的方法，其中所述离子交换色谱是陶瓷羟磷灰石(CHT)色谱。46.如权利要求37-41中任一项所述的方法，其中切向流过滤在步骤(d)中使用。47.如权利要求37-41中任一项所述的方法，其中非吸附色谱在步骤(d)中使用。48.如权利要求37-47中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述溶液包含蔗糖。49.如权利要求37-48中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述溶液包含选自柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液和磷酸盐缓...
【专利技术属性】
技术研发人员：X·K·陈，X·李，
申请(专利权)人：伊缪诺金公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。