一种脆江蓠多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种脆江蓠多糖及其制备方法和应用。该脆江蓠多糖的制备方法包括以下步骤：脆江篱经无水乙醇进行预处理并且烘干后采用热水提取，重复三次，提取液合并经真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入三氯乙酸溶液，在4℃静置过夜，离心除去沉淀，得到上清液，然后将上清液调节至中性并进行醇沉至乙醇浓度为50～60％，收集沉淀后加入无水乙醇振荡洗涤后静置离心，透析冻干后制得脆江蓠多糖。本发明专利技术还提供了脆江蓠多糖在抗炎或抗肿瘤化疗药增效剂方面的应用。本发明专利技术脆江蓠多糖制备方法简单稳定，制备的脆江蓠多糖在抗炎或者抗肿瘤化疗药增效方面效果明显，适合推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种脆江蓠多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种脆江蓠多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
脆江蓠为江蓠属的一种大型经济类养殖海藻，主产于我国浙江、福建、江苏等东南沿海地带，目前主要分布在广东省南澳沿海养殖成功并可大面积种植。新鲜的脆江蓠颜色为紫红色或浅红色，肥厚多汁，质脆，干燥后颜色变深。由于早期脆江篱产量稀少一直未被重视，因此国内外对脆江篱的研究很少，近年来随着脆江蓠的产量的不断增加，脆江篱的活性成分与生物学活性的研究也逐渐引起人们的关注。研究表明，脆江蓠富含多种活性多糖、藻红蛋白及膳食纤维和人体必须的营养元素等，具有免疫调节活性、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等多种生物学活性和药用保健功效，其中活性多糖作为一种高效低毒的有效成分吸引了研究者们的广泛关注。因此如何从脆江蓠中有效方便的提取出多糖类成分就尤为关键。多糖类成分普遍采用的提取方法包括热水浸提法、稀酸和稀碱提取法，新工艺包括酶法、超声波辅助、微波辅助浸提和超滤法等。例如鞠瑶瑶等人通过响应面试验对脆江蓠多糖(GCP)的提取工艺进行优化，并且研究了其对肿瘤细胞的抑制作用，采用的提取方法为常规的热水浸提法，制备的脆江蓠多糖可以有效地抑制肿瘤细胞的生产，但是该脆江蓠多糖的性质不稳定，且响应面优化试验工艺复杂。将提取出的脆江蓠多糖进一步研究和开发成药用多糖或保健品多糖，将有利于炎症及肿瘤病人的综合治疗和康复，同时没有常用的细胞毒类抗炎抗肿瘤药物的毒副作用，因此，脆江蓠多糖值得进一步研究和开发，提高脆江蓠的经济利用价值。基于目前脆江蓠多糖在制备方面存在着工艺复杂、稳定性差以及可重复性差的缺陷，并且在治疗炎症及肿瘤方面的作用，需要提供一种制备工艺简单、可大规模生产、制备的产品稳定性好质量佳的脆江蓠多糖及其制备方法和应用。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术存在的不足，提供了一种脆江蓠多糖及其制备方法和应用，该制备方法简单重复性好，制备的脆江蓠多糖具有显著的抗炎效果，并且可以作为抗肿瘤药物的增效剂，显著地提高了抗食管癌化疗药物的敏感性。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种脆江蓠多糖的制备方法，包括以下步骤：S1、脆江篱经冲洗沥干后，烘干后粉碎过筛称重，采用无水乙醇进行预处理，烘干，得到脆江蓠干燥粉末；S2、将脆江蓠干燥粉末用纯水浸泡，固液比为1：(7～15)，80～90℃下提取3～4h，提取期间进行间歇性地搅拌，重复三次，过滤后的提取液合并，提取液经旋转蒸发仪真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入质量浓度为3～7％的三氯乙酸，在4℃静置过夜，离心25～35min除去沉淀，得到上清液；S3、将所述上清液采用氢氧化钠调节至中性，加入无水乙醇至乙醇浓度为50～60％，4℃静置过夜后离心25～35min，收集沉淀，将沉淀加入无水乙醇振荡洗涤后静置离心，重复三次，制得脆江蓠粗多糖。S4、将所述脆江蓠粗多糖用纯水溶解，装在分子截留量为8～10kDa的透析袋中，将透析袋浸泡在纯水中，4℃透析过夜，重复透析5～10次，待透析纯水pH为中性时，停止透析，收集袋内的透析液；S5、将透析液于-20℃冰箱冰冻24h，然后用真空冷冻干燥机冻干，制得脆江蓠多糖，保存于干燥器内。进一步地，所述步骤S1中采用无水乙醇进行预处理的操作为冷凝回流加热处理，重复两次。进一步地，所述固液比为1：10。进一步地，所述提取温度为85℃，所述提取时间为3.5h。进一步地，所述步骤S1中三氯乙酸的加入体积为浓缩液体积的0.3～0.5倍，所述三氯乙酸的质量浓度为5％。进一步地，所述离心条件为6000g、4℃。进一步地，所述步骤S3中加入无水乙醇至乙醇浓度为55％。进一步地，所述步骤S4中透析袋的分子截留量为9kDa。本专利技术还提供了所述脆江篱多糖的制备方法获得的脆江蓠多糖。本专利技术还提供了所述脆江蓠多糖在制备抗炎药物中的应用。本专利技术还提供了所述脆江蓠多糖在制备治疗食管癌药物中的应用。本专利技术还提供了一种治疗食管癌的药物组合物，所述药物组合物包括本专利技术脆江蓠多糖和5-氟尿嘧啶。进一步地，所述脆江蓠多糖和5-氟尿嘧啶的重量比为(1～5)：1。更进一步地，所述脆江蓠多糖和5-氟尿嘧啶的重量比为2.5：1与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术脆江篱多糖制备工艺简单，条件温和耗时短，得率高，稳定性好，适合大规模生产。(2)本专利技术脆江蓠多糖能显著地抑制小鼠的耳肿胀，表现出良好的抗炎效果，同时脆江蓠多糖对食管癌细胞ECA109生长和增殖有一定的抑制作用，将化疗药物5-氟尿嘧啶与脆江蓠多糖联合使用能显著提高5-氟尿嘧啶对食管癌细胞ECA109的杀伤力，提高化疗药物5-氟尿嘧啶的抗癌敏感性，可作为一种新型抗炎抗肿瘤药物制剂或增敏剂应用到生物医药以及防癌保健品中，具有很高的开发价值和应用前景附图说明图1为脆江蓠多糖对RAW264.7巨噬细胞和人单核细胞的存活率的影响的测定结果；图2为脆江蓠多糖对食管癌细胞ECA109的增殖抑制作用测定结果；图3为实施例4药物组合物对食管癌细胞ECA109的增殖抑制作用测定结果。具体实施方式以下所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本专利技术5-氟尿嘧啶(5-Fu)国药准字H10980069，购自北京协和药厂。实施例1、本专利技术脆江蓠多糖及其制备方法本专利技术实施例1脆江蓠多糖及其制备方法，包括以下步骤：S1、新鲜的脆江蓠经冲洗沥干后，烘干后粉碎过筛，采用无水乙醇进行冷凝回流加热处理，重复两次，过滤，滤渣烘干，得到脆江蓠干燥粉末；S2、将所述脆江蓠干燥粉末采用纯水浸泡，固液比为1：7，80℃下提取3h，提取期间进行间歇性地搅拌，重复三次，过滤后的提取液合并，提取液经旋转蒸发仪真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入体积为浓缩液体积0.3倍的质量浓度为3％的三氯乙酸，混合均匀后在4℃静置过夜，离心30min后除去沉淀，得到上清液；S3、将所述上清液采用氢氧化钠调节至中性，加入无水乙醇至乙醇浓度为50％，4℃静置过夜后离心30min，收集沉淀，将沉淀加入无水乙醇振荡洗涤后静置离心，重复三次，制得脆江蓠粗多糖。S4、将所述脆江蓠粗多糖用纯水溶解，装在分子截留量为8kDa的透析袋中，将透析袋浸泡在纯水中，4℃透析过夜，重复透析8次，待透析纯水pH为中性时，停止透析，收集袋内的透析液；S5、将透析液于-20℃冰箱冰冻24h，然后用真空冷冻干燥机冻干，制得脆江蓠多糖，保存于干燥器内。实施例2、本专利技术脆江蓠多糖及其制备方法本专利技术实施例2脆江蓠多糖及其制备方法，包括以下步骤：S1、新鲜的脆江蓠经冲洗沥干后，烘干后粉碎过筛，采用无水乙醇进行冷凝回流加热处理，重复两次，过滤，滤渣烘干，得到脆江蓠干燥粉末；S2、将所述脆江蓠干燥粉末采用纯水浸泡，固液比为1：10，85℃下提取3.5h，提取期间进行间歇性地搅拌，重复三次，过滤后的提取液合并，提取液经旋转蒸发仪真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入体积为浓缩液体积0.4倍的质量浓度为5％的三氯乙酸，混合均匀后在4℃静置过夜，离心30min后除去沉淀，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脆江蓠多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、脆江篱经冲洗沥干后，烘干后粉碎过筛称重，采用无水乙醇进行预处理，烘干，得到脆江蓠干燥粉末；S2、将脆江蓠干燥粉末用纯水浸泡，固液比为1：(7～15)，80～90℃下提取3～4h，提取期间进行间歇性地搅拌，重复三次，过滤后的提取液合并，提取液真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入质量浓度为3～7％的三氯乙酸，在4℃静置过夜，离心25～35min除去沉淀，得到上清液；S3、将所述上清液采用氢氧化钠调节至中性，加入无水乙醇至乙醇浓度为50～60％，4℃静置过夜后离心25～35min，弃去上清液，收集沉淀，将沉淀加入无水乙醇振荡洗涤后静置离心，重复三次，制得脆江蓠粗多糖。S4、将所述脆江蓠粗多糖用纯水溶解，装在分子截留量为8～10kDa的透析袋中，将透析袋浸泡在纯水中，4℃透析过夜，重复透析5～10次，待透析纯水pH为中性时，停止透析，收集袋内的透析液；S5、将透析液于‑20℃冰箱冰冻24h，然后用真空冷冻干燥机冻干，制得脆江蓠多糖，保存于干燥器内。

【技术特征摘要】
1.一种脆江蓠多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、脆江篱经冲洗沥干后，烘干后粉碎过筛称重，采用无水乙醇进行预处理，烘干，得到脆江蓠干燥粉末；S2、将脆江蓠干燥粉末用纯水浸泡，固液比为1：(7～15)，80～90℃下提取3～4h，提取期间进行间歇性地搅拌，重复三次，过滤后的提取液合并，提取液真空浓缩后得到浓缩液，向浓缩液中边搅拌边加入质量浓度为3～7％的三氯乙酸，在4℃静置过夜，离心25～35min除去沉淀，得到上清液；S3、将所述上清液采用氢氧化钠调节至中性，加入无水乙醇至乙醇浓度为50～60％，4℃静置过夜后离心25～35min，弃去上清液，收集沉淀，将沉淀加入无水乙醇振荡洗涤后静置离心，重复三次，制得脆江蓠粗多糖。S4、将所述脆江蓠粗多糖用纯水溶解，装在分子截留量为8～10kDa的透析袋中，将透析袋浸泡在纯水中，4℃透析过夜，重复透析5～10次，待透析纯水pH为中性时，停止透析，收集袋内的透析液；S5、将透析液于-20℃冰箱冰冻24h，然后用真空冷冻干燥机冻干，制得...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵振岭，王一飞，
申请(专利权)人：广州暨南生物医药研究开发基地有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44