一种江蓠菜琼胶寡糖及其制备方法技术

本发明专利技术属于食品加工技术领域，涉及一种江蓠菜琼胶寡糖及其制备方法。 所述江蓠菜琼胶寡糖是利用蝙蝠弧菌（Vampirovibrio sp.）自身代谢合成的琼胶酶水解江蓠菜琼胶溶液，获得聚合度为六的新琼六糖。制备时将蝙蝠弧菌菌株接种至产琼胶酶液态培养基中，经搅拌培养、离心分离获得琼胶酶粗酶液，后将琼胶酶固定化到乙酰化的魔芋胶颗粒；以固定化琼胶酶颗粒为催化剂，水解由江蓠菜制得的琼胶溶液；琼胶水解液依次经超滤、纳滤制得江蓠菜琼胶寡糖，而固定化琼胶酶颗粒回收继续用于下一批琼胶水解反应。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于食品加工
，涉及。 所述江蓠菜琼胶寡糖是利用蝙蝠弧菌（ Vampirovibrio sp. ）自身代谢合成的琼胶酶水解江蓠菜琼胶溶液，获得聚合度为六的新琼六糖。制备时将蝙蝠弧菌菌株接种至产琼胶酶液态培养基中，经搅拌培养、离心分离获得琼胶酶粗酶液，后将琼胶酶固定化到乙酰化的魔芋胶颗粒；以固定化琼胶酶颗粒为催化剂，水解由江蓠菜制得的琼胶溶液；琼胶水解液依次经超滤、纳滤制得江蓠菜琼胶寡糖，而固定化琼胶酶颗粒回收继续用于下一批琼胶水解反应。 CCTCC M 2013638 20131208【专利说明】
本专利技术属于食品加工
，涉及，具体涉及一种利用蝙蝠弧菌(Vampirovibr1 sp.)自身代谢合成的琼胶酶经固定化后,水解由江蓠菜制得的琼胶溶液，制备琼胶寡糖的方法。
技术介绍
利用生物技术从海洋生物中寻求具有防病、治病作用的新药源，“向海洋要药物”是海洋生物技术研究和应用的重要方面。海藻中存在着大量的具有各种生物活性的多糖类物质，这些多糖类物质被广泛的应用于生化、临床、医药和食品等领域。如琼胶具有凝胶性能，大多数微生物都不能使其降解，被广泛用做微生物培养基的胶凝剂；琼胶类硫酸多糖对B-型流感病毒、腮腺炎病毒和脑膜炎病毒等有抑制作用。琼胶寡糖(Agaro-oligosaccharide, AOS)是琼胶多糖经水解后聚合度为2?10的低聚糖，又称琼胶低聚糖，主要由琼二糖的重复单位连接而成,包括琼寡糖(Agaroligo saccharides)和新琼寡糖(Neoagarooligo-saccharides)两个系列。琼胶寡糖具有多种生物活性，如抗病毒、抗肿瘤、抗炎症、增强免疫和保湿美白等，因此可广泛地应用于药品、保健品、食品添加剂、饲料添加剂和化妆品等领域。 采用传统的酸水解法降解琼胶时，反应条件剧烈，工艺条件难以控制，活性物质易被破坏。而琼胶酶作为一种有催化活性的蛋白质，具有催化效率高、底物专一性强、反应条件温和、产物不易被破坏等优点，逐渐取代了酸水解。然而，由于琼胶酶的菌株大多数来源于海洋，受海洋特殊生长环境的影响，这些菌种产酶性状不稳定。因此，寻找一种性状稳定，易于培养的高效产琼胶酶菌株成为整个问题的关键，具有重要理论意义和应用价值。 本专利技术利用从鲍鱼肠道分离获得的蝙蝠弧菌(5/7.)，接种至产琼胶酶特定液体培养基中，通过该菌自身代谢合成琼胶酶；后采用多点联接固定化技术将琼胶酶固定到乙酰化的魔芋胶颗粒上；以固定化琼胶酶颗粒为催化剂，水解由江蓠菜制得的琼胶溶液；琼胶水解液后依次经超滤、纳滤制得江蓠菜琼胶寡糖。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有加工技术上的不足和存在的问题，提供，通过特定产酶液体培养基发酵获得高活性琼胶酶粗酶液，采用多点联接固定化技术将琼胶酶固定到乙酰化的魔芋胶颗粒上制备可反复使用的催化剂，对由江蓠菜制得的琼胶溶液进行批次水解，制备获得江蓠菜琼胶寡糖。 本专利技术是通过以下技术方案来实现的: 所述江蓠菜琼胶寡糖是利用蝙蝠弧菌(Vampirovibr1 sp.) f jfst-2013001自身代谢产生的琼胶酶经固定化后水解江蓠菜琼胶溶液，获得聚合度为六的新琼六糖； 所述的蝙蝠弧菌(Vampirovibr1 sp.) f jfst-2013001为从市售鲍鱼肠道中分离筛选出的产琼胶酶细菌，该菌已于2013年12月8日在中国武汉典型培养物保藏中心登记保藏，其保藏编号为CCTCC M 2013638。 本专利技术所述江蓠菜琼胶寡糖的制备方法如下: (1)琼胶酶粗酶液制备:将蝙蝠弧菌(Vampirovibr1sp.)fjfst-2013001从斜面培养基转接至种子培养基，振荡培养得种子液，将种子液接种至液体培养基中(接种量为6%)，发酵温度25°C，搅拌转速10rpm下发酵48h，发酵液离心得上清液即为粗酶液；(2)琼胶溶液制备:江蓠菜原料经清洗、浸泡，充分吸水后用浓度为10wt%的NaOH溶液80°C下处理6h，后经清水漂洗后置于浓度为0.10wt%的似(:102溶液中酸化漂白，浙干后经煮胶、粗滤、精滤处理，后经板式换热器冷却至55°C，即制得琼胶溶液；(3)琼胶酶粗酶液固定化:乙酰化的魔芋胶颗粒浸泡在步骤(I)制备的粗酶液中，室温下低速搅拌24h，加入少量的NaBH4后继续搅拌0.5h使琼胶酶固定在魔芋胶颗粒上，之后用0.1M的磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)冲洗固定好琼胶酶的魔芋胶颗粒，并在4°C下保存备用；(4)琼胶水解:以步骤(3)制备的固定化琼胶酶为催化剂，以步骤(2)制备的琼胶溶液为反应底物，55 °C下水解反应50h，搅拌速度150rpm，反应pH控制在8.0±0.5 ;(5)膜过滤:步骤(4)水解反应液经20目钢丝网过滤，琼胶酶颗粒继续用于下一批琼胶水解反应，滤液依次经超滤、纳滤制得江蓠菜琼胶寡糖。 在步骤(I)中所述液态培养基为:琼脂粉2.5-3.0g/L，牛肉膏1.0?2.0g/L，尿素0.5?1.0g/L,氯化锰0.1?0.2g/L，硫酸锌0.1?0.3g/L，磷酸二氢钾0.1?0.2g/L，溶剂为海水，ρΗ7.8?8.2 ;在步骤(2)中所述煮胶工艺为:将酸化漂白浙干后藻体投至65?70°C清水中(料液比为1:15?20)，熟烂后升温至90±2°C，开启打浆，继续煮溶约40min直至完全熔化；在步骤(3)中所述乙酰化的魔芋胶颗粒的制备方法为:将大小为Imm3的魔芋胶颗粒浸泡在浓度为6mg/mL的NaBH4碱溶液(NaOH浓度为0.16M)中，然后添加一定量的缩水甘油，室温下搅拌18h用离子水洗净,之后浸入到35mM Na14溶液中Ih,再次用离子水洗净,于4°C下保存备用。 与现有技术相比本专利技术具有如下突出效果:1、本专利技术采用多点链接固定化技术，将琼胶酶固定在乙酰化的魔芋胶颗粒上，对高浓度、高粘度琼胶溶液进行连续、高效、专一化水解；而且固定化琼胶酶可多次重复使用，生产成本低； 2、本专利技术采用的蝙蝠弧菌(Vampirovibr1sp.)f jfst-2013001易于培养,产酶性状稳定，利用其制备江蓠菜琼胶寡糖，操作简便，工艺参数易于掌握，易于大量推广使用。 【专利附图】【附图说明】 图1为江蓠菜琼胶溶液生产流程图；图2为江蓠菜琼胶寡糖HPLC图。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。 实施例11、琼胶溶液的制备图1为琼胶溶液制备工艺流程；江蓠菜经充分清洗后浸入清水中，浸泡4小时后浙干，按10wt%浓度配制NaOH溶液，加热至82°C ;将浸泡过的原料置于碱处理液中，保持6小时；将原料移至漂洗罐中，以清水浸泡洗涤至PH8.0 ;去除洗涤水，并浙干；在浓度为0.10wt%的NaClO2溶液中加H#04调pH值至3.0，将碱处理后的原料浸于酸化漂白液中，漂白1min ；将浙干后藻体投入15倍质量的水中，水温65°C，使之熟烂，加温至92°C并开启打浆，继续煮溶40 min直致完全熔化；将熔胶泵送至筛孔为20目的旋转粗器中进行粗过滤，去除胶液中较大的杂质；圆筒筛的转速控制在60rpm，粗滤液的温度控制不低于80°C ;粗滤的胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种江蓠菜琼胶寡糖，其特征在于：所述江蓠菜琼胶寡糖是利用蝙蝠弧菌（Vampirovibrio sp.）fjfst‑2013001代谢产生的琼胶酶经固定化后，水解江蓠菜琼胶溶液，获得的聚合度为六的新琼六糖；所述的蝙蝠弧菌（Vampirovibrio sp.）fjfst‑2013001已于2013年12月8日在中国武汉典型培养物保藏中心登记保藏，保藏编号为CCTCC M 2013638。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑宝东，林坤城，洪清林，欧洋，张龙涛，
申请(专利权)人：福建省绿麒食品胶体有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35