一种蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法技术

本发明专利技术属于水产品深加工领域，涉及一种蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法。本发明专利技术的方法以蛤贝类加工蒸煮液为原料，经原料浓缩、离心除渣、超滤、乙醇沉淀、酶解、二次醇沉，冷冻干燥等步骤获得乳白色粉末状蛤贝类加工蒸煮液多糖成品，多糖回收率达到70％，多糖纯度为80％以上。本发明专利技术提供的方法工艺简单，绿色环保，多糖得率高、纯度高，适于工业化放大。步骤简单、操作方便、实用性强。

【技术实现步骤摘要】
一种蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法
本专利技术属于水产品深加工领域，尤其涉及一种蛤贝类加工蒸煮液多糖的工业化提取方法
技术介绍
近年来，我国菲律宾蛤仔和扇贝的养殖规模不断扩大，产量急剧增长，目前两者的加工过程都会涉及到蒸煮环节，会产生大量的蒸煮液，其中含有很多水溶性的多糖组分。相关研究已经表明，蛤贝类中的水溶性多糖成分具有抗肿瘤、抗氧化、提高免疫力和保肝护肝等多种生理功能。现阶段，对于这部分蒸煮液多糖很少进行回收利用，主要是由于没有合适的回收方法，现有方法操作复杂、多糖收率低、所得多糖纯度不高，活性不好，没有好的应用方向。因此，迫切需要对现有工艺进行改进，开发绿色高效的蛤贝类蒸煮液多糖提取方法。本专利技术提供一种蛤贝类蒸煮液活性多糖的工业化制备方法，能够高效率的获得多糖产品。本专利技术有助于充分利用蛤贝类加工副产物，减少蒸煮液排放对环境造成的污染；可以提高蛤贝类加工附加值，提高经济效益。所得具有免疫活性的蛤贝类蒸煮液多糖可进一步开发为功能性食品。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种以蛤贝类蒸煮液为原料的多糖工业化制备方法。所述的蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法包括以下步骤：①将蛤贝类蒸煮液进行浓缩至固形物质量含量为8～15％，离心除杂，收集上清液I；②使用1-3万分子量的超滤膜对步骤①所得的上清液I进行超滤，获得透过液；③向透过液中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，取沉淀I；④将沉淀I用水分散，加入木瓜蛋白酶进行酶解，离心，收集上清液II；⑤向上清液II中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，得到沉淀II；⑥沉淀II用水溶解后，冷冻干燥。通过上述方法制备蛤贝类蒸煮液多糖，所得多糖纯度可达80％，多糖回收率可达70％以上。并且本专利技术的方法所用原料来源广泛、价格便宜，加工方法简单，投资少，附加值高，可广泛地用于活性多糖的大规模回收，应用前景十分广阔。所述的蛤贝类蒸煮液多糖具有提高免疫力的生物活性。因此，本专利技术另一方面的目的也在于提供蛤贝类蒸煮液多糖及其在制备免疫力增强剂中的应用。具体实施方式本专利技术的技术方案是以蛤贝类蒸煮液为原料的、包括超滤-醇沉-酶解-二次醇沉等工序的技术方案：其中，所述的步骤①中优选将蛤贝类蒸煮液浓缩至固形物含量为12～15％。其中，所述的步骤②中的超滤膜优选2～3万分子量的超滤膜。其中，所述的步骤③中，透过液与乙醇水溶液的体积比优选1:3。其中，所述的步骤④中，沉淀I用水分散后成为固形物质量含量10～12％的体系。其中，所述的步骤④中，酶解步骤优选的参数包括：木瓜蛋白酶的加酶量1～3％，酶解pH为6.0～7.5，酶解时间2～6小时，酶解温度45～65℃。最为优选的技术方案中，本专利技术所述的方法，包括如下步骤：①将蛤贝类蒸煮液进行浓缩至固形物质量含量为12～15％，离心除杂，收集上清液I；②使用1-3万分子量的超滤膜对步骤①所得的上清液I进行超滤，获得透过液；③向透过液中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，使透过液与乙醇水溶液的体积比为1:3，静置，离心，取沉淀I；④将沉淀I用水分散至固形物质量含量10～12％，加入木瓜蛋白酶进行酶解，离心，收集上清液II；其中，加酶量1～3％，酶解pH为6.0～7.5，酶解时间2～6小时，酶解温度45～65℃；⑤向上清液II中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，使上清液II与乙醇水溶液的体积比为1:3，静置，离心，得到沉淀II；⑥沉淀II用水溶解后，冷冻干燥。下面以具体实施例的方式对本专利技术的内容作进一步的说明，以使本专业人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。如无特殊说明，本专利技术中所述的蛤贝类蒸煮液均为商品购得。实施例1菲律宾蛤仔蒸煮液多糖的生产工艺(1)离心除杂将菲律宾蛤仔蒸煮液(固形物15％)以转速4000rpm进行离心除杂，时间20分钟，收集上清液。(2)超滤将离心除杂后的上清液过3万分子量的超滤膜，获得透过液。(3)一次醇沉将上述透过液在室温下，使用95％乙醇，按照料液体积比1:3比例，静置24小时。(4)酶解醇沉后4000rpm离心20分钟取沉淀，挥干乙醇，调整固形物含量为11.6％，采用木瓜蛋白酶酶解，pH为7.0、加酶量2％、酶解时间4小时、酶解温度65℃。(5)二次醇沉酶解后的酶解液离心取上清，进行二次醇沉(条件同上)。(6)冷冻干燥将醇沉体系离心取沉淀，用少量蒸馏水浸泡，挥干乙醇，进行冷冻干燥，获得纯度为81.27％的菲律宾蛤仔蒸煮液多糖。实施例2扇贝蒸煮液多糖的生产工艺(1)离心除杂将扇贝蒸煮液(固形物8.3％)以转速4000rpm进行离心除杂，时间20分钟，收集上清液。(2)超滤将离心除杂后的上清液过1万分子量的超滤膜，获得透过液。(3)一次醇沉将上述透过液在室温下，使用95％乙醇，按照料液体积比1:3比例，静置24小时。(4)酶解醇沉后4000rpm离心20分钟取沉淀，挥干乙醇，调整固形物含量为12％，采用木瓜蛋白酶酶解，pH为7.0、加酶量1％、酶解时间4小时、酶解温度45℃。(5)二次醇沉酶解后的酶解液离心取上清，进行二次醇沉(条件同上)。(6)冷冻干燥将醇沉体系离心取沉淀，用少量蒸馏水浸泡，挥干乙醇，进行冷冻干燥，获得纯度为80.25％的扇贝蒸煮液多糖。实施例3菲律宾蛤仔蒸煮液多糖对巨噬细胞作用的检测实验(1)MTT法检测菲律宾蛤仔蒸煮液多糖促进巨噬细胞增值的实验1)细胞培养将单核巨噬细胞(RAW264.7)的细胞冻存管从液氮中取出置于37℃水浴锅内，待冻存管内冰核大体融化后，取出冻存管，将其移至超净工作台内，用酒精棉球擦拭管口。吸取细胞悬液移至10cm培养基的15cm的离心管中，1000r/min离心5min，吸取上清液，轻弹离心管底部使细胞团震荡均匀分散。添加1mL培养基使细胞悬浮，而后吸取细胞悬液滴入装有10mL培养基的培养瓶中摇动，使细胞均匀分散，放到CO2培养箱中培养。于RPMI1640培养基中培养巨噬细胞RAW264.7，培养基中含有10％的胎牛血清(经56℃灭活30min)、双抗各100U/mL。孵箱中孵育细胞(温度37℃，含有5％CO2气体)，每二天传一代。2)菲律宾蛤仔蒸煮液多糖提高巨噬细胞活力的检测按照100μL/孔的方式将处于对数生长期的细胞接种于96孔板中，培养24h后小心吸弃上清，用含有相应终浓度糖(200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL)的培养基处理24h，吸弃上清，用PBS反复洗板两次，随后加入MTT(1mg/mL)溶液，继续培养4h，再次弃上清，每孔加入100μLDMSO，于570nm处检测各孔吸光度值，参考波长设为630nm。结果表明：150μg/mL和100μg/mL浓度的菲律宾蛤仔蒸煮液多糖对单核巨噬细胞(RAW264.7)的细胞活力提升效果明显，相对增值率都在50％以上，说明菲律宾蛤仔蒸煮液多糖能有效增强单核巨噬细胞活力，提高人体免疫力。(2)菲律宾蛤仔蒸煮液多糖对巨噬细胞吞噬能力的测定将细胞悬液浓度调整为1×105mg/mL，按照100μL/孔的方式将处于对数生长期的细胞接种于96孔板中，培养24h后弃上清，经PBS清洗2次，各孔加入一定量药物(200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法，包括以下步骤：①将蛤贝类蒸煮液进行浓缩至固形物质量含量为8～15％，离心除杂，收集上清液I；②使用1‑3万分子量的超滤膜对步骤①所得的上清液I进行超滤，获得透过液；③向透过液中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，取沉淀I；④将沉淀I用水分散，加入木瓜蛋白酶进行酶解，离心，收集上清液II；⑤向上清液II中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，得到沉淀II；⑥沉淀II用水溶解后，冷冻干燥。

【技术特征摘要】
1.一种蛤贝类蒸煮液多糖的制备方法，包括以下步骤：①将蛤贝类蒸煮液进行浓缩至固形物质量含量为8～15％，离心除杂，收集上清液I；②使用1-3万分子量的超滤膜对步骤①所得的上清液I进行超滤，获得透过液；③向透过液中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，取沉淀I；④将沉淀I用水分散，加入木瓜蛋白酶进行酶解，离心，收集上清液II；⑤向上清液II中加入体积浓度为95％的乙醇水溶液，静置，离心，得到沉淀II；⑥沉淀II用水溶解后，冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤①中将蛤贝类蒸煮液浓缩至固形物含量为12～15％。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤②中的超滤膜为2～3万分子量的超滤膜。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤③中，透过液与乙醇水溶液的体积比为1:3。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤④中，沉淀I用水分散后固形物质量含量10～12％。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智博，赵前程，王海波，祁艳霞，李莹，崔琦，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21