抗CD20抗体的新型CD20-CAR载体的构建及应用制造技术

本发明专利技术提供了基于人源化CD20抗体的新型CD20‑CAR载体的构建及应用。具体地，本发明专利技术提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(即，scFv)包括SEQ ID No.:1所示的抗体重链可变区，和SEQ ID NO.:2所示的抗体轻链可变区。利用本发明专利技术构建的CD20‑CAR载体构建的CD20‑CAR‑T细胞展现出非常好的体外杀伤效果。

【技术实现步骤摘要】
抗CD20抗体的新型CD20-CAR载体的构建及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于人源化CD20抗体的新型CD20-CAR载体的构建及应用。
技术介绍
近年来，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法作为一种强大的新型过继免疫治疗技术，已显示出非常有效的治疗效果，被用于治疗多种实体和血液癌症，特别是针对B细胞淋巴细胞白血病和淋巴瘤的CD19-CAR-T疗法在临床上展现出非常好的治疗效果，但对于CD19阴性的B细胞肿瘤，CD19-CAR-T就不会有效，CD20也是B细胞肿瘤的一个很好的靶点，因此可以用CD20-CAR-T来靶向治疗CD20阳性的B细胞白血病和淋巴瘤，而且，用人源化CD20抗体序列构建的CD20-CAR-T细胞，与鼠源CD20序列相比，可以降低进入体内后产生的免疫原性，提高治疗效果。因此，本领域迫切需要开发一种基于人源化CD20抗体的新型CD20-CAR载体。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种基于人源化CD20抗体的新型CD20-CAR载体的构建及应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)(序列)，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(即，scFv)包括SEQIDNo.:1所示的抗体重链可变区，和SEQIDNO.:2所示的抗体轻链可变区。QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMHWVRQTPGQRLEWMGAIYPGNGDTSYNQKFKGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGQGTTVTVS(SEQIDNo.:1)DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASSSVSYIHWYQQKPGKAPKLLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTSFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTSNPPTFGGGTKVEIKRTV(SEQIDNo.:2)在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(scFv)如下式I或式II所示：VH－VL,(I)；VL－VH,(II)其中，VH为抗体重链可变区；VL为抗体轻链可变区；“－”为连接肽或肽键。在另一优选例中，所述连接肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:3所示。GGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNo.:3)在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的结构如下式所示：L－scFv－H－TM－C－CD3ζ其中，L为任选的引导序列(Leadersequence，即信号肽序列)；scFv为抗原结合结构域；H为绞链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；所述抗原结合结构域和“－”分别如上所述。在另一优选例中，L的序列如SEQIDNO.:4所示。MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP(SEQIDNo.:4)在另一优选例中，H的序列如SEQIDNO.:5所示。ESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQIDNo.:5)在另一优选例中，TM的序列包括源于ICOS的跨膜区，优选地TM的序列如SEQIDNO.:6所示。WLPIGCAAFVVVCILGCILICWL(SEQIDNo.:6)在另一优选例中，所述共刺激信号分子包括ICOS来源的共刺激信号分子，和/或4-1BB来源的共刺激信号分子。在另一优选例中，所述ICOS来源的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQIDNO.:7所示。TKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTL(SEQIDNo.:7)在另一优选例中，所述4-1BB来源的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQIDNO.:8所示。KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQIDNo.:8)在另一优选例中，CD3ζ的序列如SEQIDNO.:9所示。RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQIDNo.:9)在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的序列如SEQIDNO.:10所示。MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMHWVRQTPGQRLEWMGAIYPGNGDTSYNQKFKGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGQGTTVTVSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASSSVSYIHWYQQKPGKAPKLLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTSFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTSNPPTFGGGTKVEIKRTVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKWLPIGCAAFVVVCILGCILICWLTKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTLKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQIDNo.:10)在本专利技术的第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本专利技术第一方面所述的嵌合抗原受体(CAR)。在另一优选例中，所述核酸分子包含选自下组的编码所述铰链区核酸序列：(a)编码如SEQIDNO.:5所示多肽的多核苷酸；(b)序列如SEQIDNO.:11所示的多核苷酸；GAGAGCAAGTACGGACCTCCTTGTCCTCCTTGTCCAGCTCCAGAGTTTGAGGGCGGACCTAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCAGAAGTGACTTGCGTGGTGGTGGACGTGTCTCAGGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)(序列)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(即，scFv)包括SEQ ID No.:1所示的抗体重链可变区，和SEQ ID NO.:2所示的抗体轻链可变区。

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)(序列)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(即，scFv)包括SEQIDNo.:1所示的抗体重链可变区，和SEQIDNO.:2所示的抗体轻链可变区。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式所示：L－scFv－H－TM－C－CD3ζ其中，L为任选的引导序列(Leadersequence，即信号肽序列)；scFv为抗原结合结构域；H为绞链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；所述抗原结合结构域和“－”分别如上所述。3.一种核酸分子，所述核酸分子编码如权利要求1所述的嵌合抗原受体(CAR)。4.一种载体，所述的载体含有如权利要求3所述的核酸分子。5.一种宿主细胞，所述的宿主细胞中含有如权利要求4所述的所述的载体或染色体中整合有外源的如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，游凤涛，
申请(专利权)人：博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32