禽副粘病毒融合蛋白及其制备方法、应用和用于鸽子的APMV疫苗技术

本发明专利技术提供了一种禽副粘病毒融合蛋白及其制备方法、应用和用于鸽子的APMV疫苗，涉及生物技术领域，该禽副粘病毒融合蛋白将鸽1型副粘病毒的HN基因和禽副粘病毒7型的HN基因进行串联，包含NDV‑HN区段和AMPV‑7‑HN区段；其中NDV‑HN区段包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，AMPV‑7‑HN区段包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，该禽副粘病毒融合蛋白具有抗原性好，表达量高，应用广泛的优点。

【技术实现步骤摘要】
禽副粘病毒融合蛋白及其制备方法、应用和用于鸽子的APMV疫苗
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种禽副粘病毒融合蛋白及其制备方法、应用和用于鸽子的APMV疫苗。
技术介绍
近来，全国各地出现了许多上万对、几万对，个别达10-20万对的大型鸽场，仅广东省鸽子年存栏量达400万对以上，生产乳鸽4500-5000万只以上，是国内养鸽的大省，其他省市的饲养量约为广东的3-4倍，其中以江苏、山东、河北、湖南、广西以及新疆的南疆等地饲养较多。基于如此规模的养殖环境，给养鸽业带来丰厚的利润。然而，在肉鸽养殖快速发展的过程中，鸽病的发生和流行是妨碍肉鸽养殖快速发展的主要问题之一。随着养鸽业的快速发展和禽病科学的进步，病种较20多年前明显增多，己达60-70种之多，而且还不断有新的疾病出现。在各类疾病中，报道最多的依次是病毒性传染病、细菌性传染病、体内外寄生虫病。鸽病毒性传染病一直是各类鸽病中发生频率最多、危害性最大的一类传染病，其中鸽1型副粘病毒病从80年代初开始亦在我国各地先后出现，并逐年增多，成为鸽死亡的主要疫病，占各种病毒性疾病的86.47％(147/170)。禽副粘病毒1型(APMV-1)也被称为新城疫病毒(NDV)，新城疫病毒常常感染家禽，也感染家鸽和其他野鸟，其中，来源并感染鸽子的新城疫病毒也被称为鸽1型副粘病毒(PigeonParamyxovirus-1，PPMV-1)。NDV主要传播途径是呼吸道和消化道。预防接种是目前大多数国家控制新城疫的主要措施。历史上曾发生过的3次新城疫大流行中，其中上世纪70年代末发生的第三次大流行，鸽子作为传播宿主扮演重要角色。禽副粘病毒7型(APMV-7)是禽副粘病毒9个血清型中之一，英国曾经从隔离检疫时死亡的鸽中分离获得。该病毒的分离株均来自于野鸟，鸽是易感宿主之一。其余引起家禽发病的重要血清型还有APMV-2，APMV-3，APMV-6和APMV-7。因此对于禽副粘病毒的预防和控制对于禽类养殖业的发展和人类生命财产的安全至关重要。目前鸽类没有特定的商品化疫苗，市面上其他禽类商品化的疫苗主要为灭活苗和弱毒苗。灭活苗虽然安全稳定，但需要大剂量接种或应用浓缩抗原；免疫期短，常需强化接种；产生完全免疫力需要2周，不利于紧急预防接种与降低疫苗费用，保护效果不佳。而弱毒苗由于存在着成本高、易返祖、有潜在感染危险等缺陷，很难在实践中推广应用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种禽副粘病毒融合蛋白，该禽副粘病毒融合蛋白将APMV-1型的HN基因和APMV-7型的HN基因进行串联表达。本专利技术的第二目的在于提供一种上述禽副粘病毒融合蛋白的制备方法，该制备方法可以制备出上述禽副粘病毒融合蛋白。本专利技术的第三目的在于提供一种上述禽副粘病毒融合蛋白、上述禽副粘病毒融合蛋白的制备方法、或由上述制备方法制备得到的禽副粘病毒融合蛋白的应用。本专利技术的第四目的在于提供一种用于鸽子的APMV疫苗，该疫苗包含上述禽副粘病毒融合蛋白、表达上述禽副粘病毒融合蛋白的基因或上述禽副粘病毒融合蛋白的制备方法制备得到的禽副粘病毒融合蛋白。为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：一种禽副粘病毒融合蛋白，包含NDV-HN区段和AMPV-7-HN区段；所述NDV-HN区段包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，所述AMPV-7-HN区段包括如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。优选地，所述NDV-HN区段和所述AMPV-7-HN区段通过融合蛋白连接肽连接；优选地，所述融合蛋白连接肽为柔性连接肽；优选地，所述融合蛋白连接肽的序列为(PPSPS)n；n为1-3的正整数；n优选为2。优选地，所述禽副粘病毒融合蛋白具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。优选地，所述禽副粘病毒融合蛋白的N端和/或C端连接有标签。优选地，所述禽副粘病毒融合蛋白为乳酸杆菌表达系统表达的蛋白。本专利技术还提供了一种上述禽副粘病毒融合蛋白的制备方法，包括：将所述禽副粘病毒融合蛋白的基因在宿主中表达。优选地，将所述禽副粘病毒融合蛋白的基因在乳酸杆菌中表达。本专利技术还提供了一种上述禽副粘病毒融合蛋白、上述的制备方法或由上述制备方法制备得到的禽副粘病毒融合蛋白的应用，包括如下(x1)-(x6)中的至少一种：(x1)制备鸽亚单位二联疫苗；(x2)制备禽类病毒性疾病的疫苗；(x3)制备禽副粘病毒的抗体；(x4)制备禽副粘病毒的抗原；(x5)制备检测禽副粘病毒的试剂和/或试剂盒；(x6)制备检测禽副粘病毒抗体的试剂和/或试剂盒。本专利技术还提供了一种用于鸽子的APMV疫苗，所述APMV疫苗包含上述的禽副粘病毒融合蛋白、表达所述禽副粘病毒融合蛋白的基因或上述制备方法表达的禽副粘病毒融合蛋白。优选地，所述APMV疫苗以表达上述禽副粘病毒融合蛋白的乳酸杆菌为活性成分。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的禽副粘病毒融合蛋白，将鸽1型副粘病毒的HN基因和禽副粘病毒7型的HN基因进行串联，得到的融合蛋白具有抗原性好，表达量高，应用广泛的优点。本专利技术提供的禽副粘病毒融合蛋白将鸽1型副粘病毒和禽7型副粘病毒的HN基因串联表达，该禽副粘病毒融合蛋白中不仅含有鸽1型副粘病毒病的抗原表位，还含有禽7型副粘病毒的抗原表位，具有较好的免疫原性，因此可作为禽类病毒性疾病的疫苗，既可以作为疫苗中的主要抗原，也可以作为疫苗的免疫原性的增强剂。并且，本专利技术提供的禽副粘病毒融合蛋白还可以用来制备禽副粘病毒的抗体等，以进一步应用于制备检测鸽1型副粘病毒、其他来源的新城疫病毒、禽7型副粘病毒以及上述病毒的抗原或者抗体的试剂盒。本专利技术提供的禽副粘病毒融合蛋白，通过将所述禽副粘病毒融合蛋白的基因在宿主中表达即可，方法简便，适合广泛的应用。本专利技术提供的用于鸽子的APMV疫苗，能提供有效地同源攻毒保护，免疫后能够产生较强免疫力，接种的发病率和死亡率均明显减少，能够有效预防鸡新城疫和禽7型副粘病毒引起的感染流行和传播，降低本病对养鸽业造成的经济损失，应用前景广阔。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的重组质粒pMG-NDAP-HN图谱；图2-A为本专利技术实施例1提供的pMG-NDAP-HN重组菌NDVHN基因的PCR鉴定结果图；图2-B为本专利技术实施例1提供的pMG-NDAP-HN重组菌APMVHN基因的PCR鉴定结果图；图3为本专利技术实施例1提供的pMG-NDAP-HN重组菌的双酶切鉴定结果图；图4为本专利技术实施例1提供的pMG-NDAP-HN重组抗原的western-blotting结果图；图5为本专利技术对比例1提供的重组质粒pMG-NDV-HN图谱；图6为本专利技术对比例2提供的重组质粒pMG-APMV-HN图谱；图7为本专利技术实施例1提供的红细胞凝集试验；图8-A为本专利技术效果例2直肠棉拭子PCR检测结果；图8-B为本专利技术效果例2直肠棉拭子PCR检测结果；图8-C为本专利技术效果例2直肠棉拭子PCR检测结果。具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，包含NDV‑HN区段和AMPV‑7‑HN区段；所述NDV‑HN区段包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述AMPV‑7‑HN区段包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，包含NDV-HN区段和AMPV-7-HN区段；所述NDV-HN区段包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，所述AMPV-7-HN区段包括如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，所述NDV-HN区段和所述AMPV-7-HN区段通过融合蛋白连接肽连接；优选地，所述融合蛋白连接肽为柔性连接肽；优选地，所述融合蛋白连接肽的序列为(PPSPS)n；n为1-3的正整数；n优选为2。3.根据权利要求2所述的禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，所述禽副粘病毒融合蛋白具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，所述禽副粘病毒融合蛋白的N端和/或C端连接有标签。5.根据权利要求1-3中任一项所述的禽副粘病毒融合蛋白，其特征在于，所述禽副粘病毒融合蛋白为乳酸杆菌表达系统表达的蛋白。6.一种权利要求1-5中任一项所述的禽副粘病毒融合蛋白的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，任芳，赵毅，刘宏，张丹，李森江，叶青，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65