一种缩小模型的层析柱及其制备方法技术

本发明专利技术涉及抗体纯化技术领域，尤其是涉及一种缩小模型的层析柱及其制备方法。所述缩小模型的层析柱，包括层析柱体和填充于层析柱体内的层析填料，装柱液为乙醇的水溶液。采用乙醇的水溶液为装柱液，将层析填料装填于层析柱体。本发明专利技术采用乙醇的水溶液作为装柱液，能够有效缓解柱壁效应，经柱效测试合格，可得到适用于抗体纯化缩小模型的层析柱。本发明专利技术的层析柱的制备方法，操作简单，易于填装，无需缓冲液置换等繁琐步骤。

【技术实现步骤摘要】
一种缩小模型的层析柱及其制备方法
本专利技术涉及抗体纯化
，尤其是涉及一种缩小模型的层析柱及其制备方法。
技术介绍
抗体生产工艺验证的目标是，证明其在已确定限度内操作时，能够生产出质量适当并持续稳定的抗体产品。由于抗体和其生产工艺的复杂性，只通过成品检验不能充分保证生产的持续稳定性。所以，必须对抗体生产工艺进行设计和验证，证明某工艺具有有效性和可重复性，并且其生产出的成品符合已确立的放行标准的要求。在工艺验证中，建立一个使用实验室规模的模型来模拟商业化生产规模的缩小模型是非常有价值的。首先，在商业化规模下进行工艺验证研究是非常困难并且昂贵的，所以可以利用缩小模型进行工艺表征研究，开展重复使用的层析填料的寿命研究和执行探索性清洁验证研究。同时，小规模研究可以防止商业化生产系统受到清除研究中所用危险物质(杂质和病毒等)的污染。缩小规模实验可以被设计用于单个单元操作或用于整个工艺链，用以评价工艺步骤的稳健性。在缩小规模模型的建立中，从商业化规模到缩小规模模型的倍数非常关键，因为缩小模型太大则无法提供足够的物料，而缩小模型太小则无法反映实际的工艺性能。所以必须建立合适的缩小规模模型以满足工艺验证的使用需求。在层析工艺缩小规模模型的建立中，缩小模型的层析介质应与商业化生产规模的层析介质相同，此外，所有重要的工艺参数应当保持不变，缩小模型的纯化水平应当尽可能代表商业化规模的工艺水平。对于层析设备、柱床高度、线性流速、保留时间、缓冲液、操作温度和上样的样品，都应当证明其能够代表商业化规模。为了保证有效性，规模缩小色谱柱中得到的产品回收率和纯度，应与实际生产色谱柱中获得的产品回收率和纯度一致。用于验证的指定的分离色谱柱的规模缩小程度，依赖于实际生产规模和能够可靠重复生产的最小规模。对于层析工艺缩小模型，所采用缩小模型层析柱十分关键，一般有两种选择。一是采用预装柱，主要产品为Repligen公司的OPUSValiChromColumn，一般可选择5、8和11.3mm直径的预装柱。预装柱使用方便，但是价格昂贵。另一种是采用空柱自己填装，主要产品为Millipore公司的Vantage系列层析柱(最小直径为11mm)，GE公司的Tricorn系列层析柱(最小直径为5mm)和XK或Hiscale系列层析柱(最小直径为16mm)。以上常用的实验室规模空层析柱，价格也很贵，且规格选择的余地不大，很难满足各层析工艺缩小模型的需要。传统的10mm及以下的层析柱的柱壁效应非常严重，普通的装柱液(纯化水或盐溶液)容易造成填料挂壁现象、导致装柱失败。同时，由于柱壁效应，正常的层析工艺流速很难将整根柱子压实，会导致柱头压的过紧而柱尾压的过松，导致装柱失败。以上的这些不足限制了层析工艺缩小模型的建立及其在在特定的工艺验证中的应用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种缩小模型的层析柱，以解决现有技术中存在的柱壁效应严重、成本高的技术问题。本专利技术的第二目的在于提供一种缩小模型的层析柱的制备方法，易于填装，无需缓冲液置换等繁琐步骤。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种缩小模型的层析柱，包括层析柱体和填充于层析柱体内的层析填料，装柱液为乙醇的水溶液。本专利技术采用乙醇的水溶液作为装柱液，能够有效缓解柱壁效应，经柱效测试合格，可得到适用于抗体纯化缩小模型的层析柱。优选的，装柱液为质量分数为10-30％的乙醇的水溶液。更优选的，装柱液为质量分数为15-25％的乙醇的水溶液。优选的，层析柱的理论塔板高度≤0.05cm。优选的，层析柱的对称性为0.8-1.8。优选的，层析柱体的直径为5-10mm。更优选的，层析柱体的直径为5mm、6.6mm或10mm。优选的，层析柱体的长度为100-330mm。更优选的，层析柱体的长度为100mm、150mm、250mm和330mm。优选的，层析填料包括蛋白A亲和填料、阳离子交换填料、阴离子交换填料和疏水作用填料中的任一种。如在不同实施方式中，层析填料可以选自MabSelectSure、MabSelectLX、AmsphereA3、PraestoJettedA50、FractogelEMDCOO、EshmunoCPX、EshmunoQ、POROS50HQ、POROS50HS、POROS50XS、POROS50XQ、QSepharoseFF、CaptoQ、CaptoS、CaptoButylImpRes等。优选的，层析柱体为Omnifit系列层析柱。更优选的，层析柱体包括OmnifitEZColumn和OmnifitEZSOLVENTPLUSColumn中的任一种。本专利技术还提供了一种缩小模型的层析柱的制备方法，包括如下步骤：采用乙醇的水溶液为装柱液，将层析填料装填于层析柱体。本专利技术的层析柱的制备方法，操作简单，易于填装，无需缓冲液置换等繁琐步骤。优选的，以800-2000cm/h流速装柱。更优选的，以1000-1500cm/h流速装柱。优选的，层析柱体竖直固定，将层析填料匀浆重悬后置于层析柱体，采用装柱液加满层析柱体，安装柱头，采用装柱液冲洗层析柱，直至柱床高度稳定。在实际操作中，可采用装柱器进行装柱。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术采用乙醇的水溶液作为装柱液，能够有效缓解柱壁效应，经柱效测试合格，可得到适用于抗体纯化缩小模型的层析柱；(2)本专利技术的层析柱柱效好，能满足缩小模型的使用需求；(3)本专利技术的层析柱的制备方法，操作简单，易于填装，无需缓冲液置换等繁琐步骤。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的缩小模型的层析柱的柱效测试图；图2为本专利技术实施例2提供的缩小模型的层析柱的柱效测试图；图3为本专利技术实施例3提供的缩小模型的层析柱的柱效测试图；图4为本专利技术实施例4提供的缩小模型的层析柱的层析图谱；图5为本专利技术实施例5提供的缩小模型的层析柱的层析图谱。具体实施方式下面将结合附图和具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例提供了一种缩小模型的层析柱的制备方法，包括如下步骤：(1)取一根OmnifitEZColumn，直径6.6mm，高度250mm的层析柱体，同时准备一根对应的空柱管和装柱器，清洗干净；拆下Omnifit层析柱体可以伸缩的一端柱头，然后将Omnifit层析柱体通过装柱器与空柱管连接；(2)将层析柱体竖直固定，将计算体积后的填料匀浆(MabSelectSuReLX)重悬后倒入层析柱体，采用质量分数为2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缩小模型的层析柱，其特征在于，层析柱体和填充于层析柱体内的层析填料，装柱液为乙醇的水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种缩小模型的层析柱，其特征在于，层析柱体和填充于层析柱体内的层析填料，装柱液为乙醇的水溶液。2.根据权利要求1所述的缩小模型的层析柱，其特征在于，所述装柱液为质量分数为10-30％的乙醇的水溶液；优选的，所述装柱液为质量分数为15-25％的乙醇的水溶液。3.根据权利要求1所述的缩小模型的层析柱，其特征在于，所述层析柱的理论塔板高度≤0.05cm。4.根据权利要求1所述的缩小模型的层析柱，其特征在于，所述层析柱的对称性为0.8-1.8。5.根据权利要求1所述的缩小模型的层析柱，其特征在于，所述层析柱体的直径为5-10mm；优选的，所述层析柱体的直径为5mm、6.6mm或10mm。6.根据权利要求1所述的缩小模型的层析柱，其特征在于，所述层析柱体的长度为100-330mm；优选的，所述层析柱体的长度为100mm、150mm、250mm和330mm。7....

【专利技术属性】
技术研发人员：汤炜，金雄华，徐志豪，
申请(专利权)人：杭州奕安济世生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33