The present application relates to a method for detecting cell surface holes by atomic force microscopy. Specifically, the present disclosure provides a method for detecting cell membrane holes, including steps: providing cells; optionally fixing the cells; and observing the cells with atomic force microscopy. The hole in the cell membrane exists in or penetrates the cell membrane. By the method of the present disclosure, the existence of a hole on the cell membrane can be accurately observed, and the size and depth of the hole can be accurately measured.
【技术实现步骤摘要】
一种采用原子力显微镜检测细胞表面孔洞的方法
本申请涉及生物
更具体而言,涉及一种利用原子力显微镜检测细胞(尤其是活细胞)表面特征的方法。尤其是,涉及一种利用原子力显微镜检测细胞(尤其是活细胞)表面孔洞的方法。
技术介绍
细胞死亡的起初是在细胞膜上形成一个个孔洞,进而细胞被杀灭。这些细胞膜上孔洞的形成在免疫监控、病原清除以及炎症性疾病方面都具有重要的作用。目前,已经鉴定出有几类分子可以在细胞膜上打孔,例如,T细胞或者NK细胞释放的穿孔素、以及炎症小体激活的GSDMD/GSDME等。但是,至今为止,没有文献报道显示细胞膜上的这些孔洞。尽管有报道显示人工合成的脂质膜上的孔洞(TheEMBOJournal.2016;35:1766-1778),人工脂质膜不是真正的细胞膜。原子力显微镜(atomicforcemicroscope,简称AFM)利用微悬臂感受和放大悬臂上的尖细探针与待测试细胞之间的作用力,对细胞进行无损伤扫描,最终获得至少纳米级别分辨率的细胞形貌图。原子力显微镜涉及这样的原理过程:原子力显微镜包括两个关键部件探针(Probe)和扫描管(Scanner);当探针和样品接近到一定程度时,如果有一个足够灵敏且随探针-样品距离单调变化的物理量P=P(z),那么该物理量可以用于反馈系统(FeedbackSystem,FS),通过扫描管的移动来控制探针-样品间的距离,从而描绘材料的表面性质。以形貌成像为例:为了得到表面的形貌信息,扫描管控制探针的针尖在距离样品表面足够近的范围内移动,探测两者之间的相互作用;在作用范围内,探针产生信号来表示随着探针-样品距离 ...
【技术保护点】
1.一种检测细胞膜孔洞的方法,其包括步骤:‑提供细胞;‑任选地,固定所述细胞;以及‑用原子力显微镜观测所述细胞;其中,所述的孔洞存在于所述细胞膜之中、或贯穿所述细胞膜;其中,所述的孔洞涉及所述细胞膜完整性的破坏、或者涉及细胞膜双分子层连续性的破坏;所述原子力显微镜的设置如下:‑峰值力轻敲模式;‑探针的弹性常数为0.1至1N m‑1,优选0.1至0.4N m‑1;‑探针的曲率半径为2至70nm;优选2至20nm;更优选2至5nm;‑工作温度:18℃至28℃,更优选20℃至24℃;‑成像力:0.5至10nN;优选0.5至6nN;‑频率:1至8kHz;优选1至2kHz;‑振幅:5至200nm;优选50至150nm;‑增益:2至40;优选20至30。
【技术特征摘要】
1.一种检测细胞膜孔洞的方法,其包括步骤:-提供细胞;-任选地,固定所述细胞;以及-用原子力显微镜观测所述细胞;其中,所述的孔洞存在于所述细胞膜之中、或贯穿所述细胞膜;其中,所述的孔洞涉及所述细胞膜完整性的破坏、或者涉及细胞膜双分子层连续性的破坏;所述原子力显微镜的设置如下:-峰值力轻敲模式;-探针的弹性常数为0.1至1Nm-1,优选0.1至0.4Nm-1;-探针的曲率半径为2至70nm;优选2至20nm;更优选2至5nm;-工作温度:18℃至28℃,更优选20℃至24℃;-成像力:0.5至10nN;优选0.5至6nN;-频率:1至8kHz;优选1至2kHz;-振幅:5至200nm;优选50至150nm;-增益:2至40;优选20至30。2.根据权利要求1所述的方法,其中:所述的细胞是活细胞;所述的细胞选自:动物细胞、微生物细胞、植物细胞、或其组合;优选,所述的细胞是有细胞核的活细胞。3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述的孔洞是选自以下的任一项:细胞死亡过程中所产生的孔洞、物理因素所致孔洞、化学因素所致孔洞、或其组合;所述细胞死亡是细胞坏死、细胞凋亡或...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄波,刘玉英,
申请(专利权)人:中国医学科学院基础医学研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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